细胞在接种在24孔板上时，孔的周围细胞密集，中间细胞稀少，怎样操作才能使细胞分布均匀？
博凌科为解答：吹细胞时注意不要把枪头打空，不要吸进空气，一般就不会有泡沫了，少量泡沫也不会影响很大。中间细胞多可能是由于你摇匀细胞时，板子是圆周运动的，这样细胞就会聚集到中间。最好用十字运动摇匀，注意用力均匀。
那至少说明你的细胞开始接种时没有摇均匀，不过24孔板确实很难摇匀。此外，染色得多操作几次，根据经验可以慢慢调整，操作的多了自然就会染得好了
博凌科为解答：周围细胞密集，中间细胞稀少这种情况一般是种板时培养液过少，液面总是呈一凹面，如果液面过低，孔中间就基本上没什么细胞，所以种板时一定不能吝啬培养液，待贴壁后可以用比较 少量的培养液处理周围细胞稀少，中间细胞密集:这种情况一般是种板后过于晃动，特别是旋转着晃动.有人才用十字方向的晃动方法使细胞分散均匀.但我个人认为，将细胞加入孔后， 用枪或移液器充分吹打混匀后就不用，也不能再晃动，甚至拿着孔板走路带来的震动都会 让细胞往中间集中.当然，无论是哪种情况，首先都需要保证细胞在种板时时均匀分布的，即种板时的细胞悬液一定要混匀细胞分布均匀与否有一点很关键，即每种细胞是有个体差异的，别人的细胞操作不一定适合于你.所以要靠自己摸索，且找出专属于自己细胞的一套规律，就 我个人而言，有如下经验：1.所有待接种的细胞悬液在种板前一定要用吸管混匀。2.按资料记载，24孔板的液体量为1ml，个人也觉得1ml的量足矣。3.接种时，要慢慢加样，且记得轻微旋转枪头，这样做对细胞均匀分布有一定效果。4.接种后最好直接放入培养箱让细胞适应培养板这个新的环境，个人认为没有必要在室温放置一段时间。5.根据细胞的特性，细胞均喜欢聚集在边缘生长，所以我考虑到，你的问题还有可能是接种时的细胞密度不够，导致周边密集，中间稀疏的错觉。你的拌种 密度是多少？另要慢慢加样，且记得轻微旋转枪头的意思就是:加样不能太快，避免细胞在一个加样处聚集，且注意在不同的部位进行加样，即边加边活动枪头，人为 使细胞趋于均匀分布，我个人觉得有一定的效果，不知这次我解释清楚没有。接种后将培养板放在超净台上，进行米字形晃动。试试看那
96孔板多少天能涨起来
3天。每孔要加100ul培养基,细胞接种的密度,密度适中的话培养3天。复苏杂交瘤细胞后，细胞长得一直快，开始复苏后就不长，后转入96孔板3天后才有的克隆，又一周转入24孔板，又一周才转入培养瓶，转入瓶的细胞也长得慢，一周传不了一次代。
PC12细胞活力及凋亡检测方法(MTT、流式、细胞爬片HE、免疫组化protocol...
流式细胞仪凋亡分析<\/: 在6孔板中接种细胞，观察并区分活细胞、早期凋亡等不同阶段，揭示细胞生命周期的动态变化。 细胞病理学与免疫组化 对于HE观察和Bcl-2免疫组化，24孔培养板上的细胞经过固定后，将进行:山羊血清封闭，为后续抗体结合做好准备 Bcl-2抗体孵育，采用特定比例在4℃过夜...
单克隆抗体的制备技术路线和关键点
(5)在第7天换液,以后每2～3天换液1次。 (6)8～9天可见 细胞克隆形成,及时检测抗体活性。 (7)将阳性孔的细胞移至24孔板中扩大培养。 (8)每个克隆应尽快冻存。 2.软琼脂培养法克隆 (1)软琼脂的配制:含有20%NCS(小牛血清)的2倍浓缩的RPMI1640。 ①1%琼脂水溶液:高压灭菌,42℃预热。 ②0.5%琼脂:由...
双炔失碳酯的科学研究
细胞形态学观察:取常规培养液中生长的对数生长期的LNCaP细胞消化后,常规培养液稀释,接种于6孔板,细胞量每孔50000个,加入含不同终浓度α?ANO(3,6,12,24μmol\/L),对照组加等量培养液,药物作用48h后,于相差显微镜下观察LNCaP细胞形态的变化。ELISA法测药物对细胞分泌PSA的影响:取对数生长期细胞,在去除激素的...
悬浮细胞病毒转染铺6孔板要多少细胞
1. 在进行悬浮细胞病毒转染前18至24小时，应确保贴壁细胞以每孔1×10^5的数量接种到24孔板中，以便在慢病毒转染时细胞数量达到大约2×10^5\/孔。2. 转染第二天，用含有6 μg\/ml polybrene的2ml新鲜培养基替换原有的培养基，并加入适量的病毒悬液。之后将细胞在37℃下孵育。3. 对于对polybrene敏...
MTT法测24孔板时 细胞数多 二甲基亚砜(DMSO)溶解甲瓒后溶液颜色深的孔...
\\x09配制MTT时用PBS（ph=7.4）溶解.PBS配方：Nacl 8g ＋ Kcl 0.2g ＋ Na2HPO4 1.44g ＋ KH2PO4 0.24g调pH 7.4,定容1L.普通MTT法实验步骤：1：接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液,以每孔1000-10000个细 \\x09胞接种到96孔板,每孔体积200ul.2: 培养细胞：同一般...
jc-1检测线粒体膜电位时应注意什么
② 处理：接种24小时后用有糖earle’s 液洗两遍, 给予相应处理（氧化应激或药物）。③ JC-1孵育：用有糖earle’s 液洗1遍，并换上终浓度为10µg\/ml JC-1培养箱孵育20 min.④ 检测：用有糖earle’s 液洗2遍，盖玻片可在荧光显微镜下检测荧光变化，96孔板在多功能荧光酶标仪检测荧光值，...
胚胎干细胞培养是如何培养的?它的具体操作过程?饲养层细胞是成纤维细胞...
24孔板接种3.5×105\/孔或6孔板1.7×106\/孔。6.2天后更换培养基第5步-N3培养基通过撤除bFGF使神经前体细胞分化1.细胞被接种在盖玻片上4天后将培养基换成不含bFGF的N3培养基2.根据需要换液(大约每隔一天)3.分化10～15天后固定细胞移除培养基PBS洗涤加入4%福尔马林室温放置30分钟PBS洗涤2次储存于PBS。长期储存使用...
mtr是什么的检查方法(医学方面)
1）将对数生长期细胞用胰酶消化后配制成浓度为1-10×104个\/ml的细胞悬液，按1000-10000个细胞\/孔接种于96孔板，每孔加100μl。2）将平板置37℃、 5%CO2湿度培养箱中24小时后，加入含有不同浓度受试样本的培养液100μl，每个样本不同浓度设平行的三个孔，对照组加不含样本的培养液100μl，再...
96孔板一般接种多少间充质干细胞
总结下各种孔板细胞接种量 仅供参考 细胞培养瓶（板）生长面积容量与细胞数（大约）96孔板 4~5X10 4 35mm培养皿 1X10 6 48 孔板 1.3X10 5 60mm培养皿 2.6X10 6 24孔板 2.5X10 5 100mm培养皿 7X10 6 12孔板 5X10 5 150mm培养皿 1.8X10 7...
纵饶舒筋： 如果您从96孔传到24孔板上现在96孔板上把细胞吹开,用枪移至到24孔中帖着孔周围来回吹打然后再靠近孔中央来回吹几次这样细胞不会只长在中间拉.
博乐市18850103293： 24孔板培养细胞的问题,很困扰,请高手指点!？
纵饶舒筋： 博凌科为解答:吹细胞时注意不要把枪头打空,不要吸进空气,一般就不会有泡沫了,少量泡沫也不会影响很大.中间细胞多可能是由于你摇匀细胞时,板子是圆周运动的,这样细胞就会聚集到中间.最好用十字运动摇匀,注意用力均匀.
博乐市18850103293： 24孔板里293细胞转染,总是后面的孔里细胞死亡,何故?？
纵饶舒筋： 博凌科为解答:也遇到过类似的情况,如果你在加DNA-Lipofectamine complex时孔板里是没有液体的,会在风机下风干的,很快的,这样你在加到后面的孔时,部分细胞已经干了,所以你先加的很好,后面的就有问题.解决办 法就是,你不要一起吸净所有孔的液体,6个孔为一个单位,吸弃孔里的液体,在加DNA-Lipofectamine complex,就可以了.
博乐市18850103293： 如何把细胞铺的更均匀 - ？
纵饶舒筋： 做细胞生物学实验,细胞铺板大概是最常见的一个实验了.但是有很多人不是很得要领,铺得不是均匀: 要么中间密周围稀,要么周围密中间秃顶.现分享我的实验技巧.一般 96 孔板我每孔是加 100 微升细胞悬液,从孔的左边靠近底部加入...
博乐市18850103293： 细胞爬片后观察是不是要在干净的六孔板 - ？
纵饶舒筋： 细胞爬片后观察是不是要在干净的六孔板1. 爬片:24*24盖玻片,刚好用于6孔板.也可用更大的盖玻片,放在大的培养皿中爬片.2. 盖玻片泡酸过夜,第二天先用自来水冲洗20遍,再置于无水酒清中浸泡6小时,再用三 蒸水冲洗3遍(个人认为...
博乐市18850103293： 细胞培养24孔板中其中一个空污染怎么处理 - ？
纵饶舒筋： 6孔板中致病菌粘附细胞培养会污染细胞培养箱 细胞培养最关键的还是操作,如果操作规范的话,污染几率是很小的,如果在培养的时候总是有黑色点状物质,可以考虑是不是细胞碎片或者血清里的蛋白质沉淀.细胞污染可能原因: 1.天气太热,实验者在培养和接种或者换液时出汗(有空调稍好,但是手也出汗). 2.培养间里可能暗藏污染原. 3.注意培养箱(这点最重要),仔细检查培养箱里的隔板的下面,有可能有霉菌斑.(我以前遇到过) 4.培养基污染多数是配置过程中造成的,仔细检查配置过程用到的器具.
博乐市18850103293： 如何筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞? - ？
纵饶舒筋： 选择性培养基.
博乐市18850103293： 胃癌7901细胞计数24孔板每孔应该接种多少个细胞呀 - ？
纵饶舒筋： 根据细胞生长的速度来决定,96孔板的每孔体积100~200ul,种细胞数一般都是2000~10000个/孔,最好不要超过10000个/孔. 同理,24孔板每孔大约500ul,那么细胞数一万为佳.
博乐市18850103293： 细胞消化接种到24孔板之后,老是每孔的中间部分长不满 - ？
纵饶舒筋： 铺板时没铺匀 铺板后可以平行晃培养板 中央有死细胞 是不是你每次都是对着中间加试剂,将细胞冲死了,要沿壁加液! 其它的不懂了
博乐市18850103293： 96,24孔培养板或培养皿的盖子都很松,污染物会不会也随着溜进去呢? - ？
纵饶舒筋： 博凌科为解答:1.盖子很松,属于半开放培养,这样的目的是透气(实际上是为了使培养皿外的co2能够与培养皿充分交换,维持培养基的pH值).2.凡事有利必有弊,这样当然增加了污染的可能性.此外这样还会使培养皿内的液体蒸发,这对...
