有没有高人能告诉我蓝白斑筛的步骤，原理。谢谢。 有加分
是重组子筛选的一种方法，一些载体带有β-半乳糖苷酶N端α片段的编码区，该编码区中含有多克隆位点，可用于构建重组子。这种载体适用于仅编码β-半乳糖苷酶C端ω片段的突变宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有半乳糖苷酶活性，但它们同时存在时。
α片段与ω片段可通过α-互补形成具有酶活性的β-半乳糖苷酶。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地破坏α片段的编码，使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。
扩展资料：
蓝白斑筛选原理
一些载体（如PUC系列质粒）带有β-半乳糖苷酶（lacZ）N端α片段的编码区，该编码区中含有多克隆位点（MCS），可用于构建重组子。
这种载体适用于仅编码β-半乳糖苷酶C端ω片段的突变宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有半乳糖苷酶活性，但它们同时存在时，α片段与ω片段可通过α-互补形成具有酶活性的β-半乳糖苷酶。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补。
由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地破坏α片段的编码，使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，称为蓝白斑筛选。
（1）首先定义
LacZ：B(beta,打不出来，下同)-半乳糖苷酶
LacZ'：含有B-半乳糖苷酶的启动子和5‘端的编码的a肽链。
那么LacZ'是没有功能的（是指能表达没有功能的蛋白质），只有和失去正常氨基端（5'端）的B-半乳糖苷酶重新互补形成完整的B-半乳糖苷酶后才具有功能，它能将底物Xgal（5-溴-4-氯-3吲哚-B-半乳糖苷）水解，形成一种蓝色化合物，菌落呈蓝色；其靠近5‘端有多克隆位点，当插入外源目的基因后将会影响该基因的功能，导致无法形成完整功能的B-半乳糖苷酶而不能水解IPTG底物，菌落呈白色。
通俗易懂的说法就是LacZ'是左半边，失去正常氨基端（5'端）的B-半乳糖苷酶是右半边，组合在一块形成有功能的酶。
（2）明白以上这点，我们再往下说。
1.一般来说，做蓝白斑，质粒载体上有LacZ'
2.Lac I，是LacZ'的抑制基因，表达的阻遏蛋白和LacZ'上的操作子区结合将会阻遏LacZ'基因的表达，当有诱导物，IPTG（异丙基-B-D-硫代半乳糖苷）与阻遏蛋白结合后，将使阻遏蛋白脱离操作子，从而使LacZ'正常表达。
3.抗药基因，如Amp，用于筛除未将载体转入了的宿主细胞，这是前提，否则鉴定是没有意义的
4.而宿主应该具备的条件是具有失去正常氨基端（5'端）的B-半乳糖苷酶的一种突变体，即前文说的右半边
（3）步骤如下：
1.将目的基因插入LacZ'靠近5‘端有多克隆位点，是否成功插入有待蓝白斑筛选鉴定。
2.通过一定的方法，如CaCl2诱导法将目的基因转入宿主菌（失去正常氨基端（5'端）的B-半乳糖苷酶的一种突变体）
3.将宿主菌至于含有IPTG，Xgal，以及抗生素Amp固体培养基中培养
4.形成白色菌斑，说明目的基因插入了多克隆位点，导致LacZ’的基因功能受到影响，与失去正常氨基端（5'端）的B-半乳糖苷酶组合后不能水解Xgal，菌落呈白色。形成蓝色菌斑，说明目的基因没有成功插入多克隆位点，LacZ'功能正常，与失去正常氨基端（5'端）的B-半乳糖苷酶组合后能水解Xgal，生成蓝色化合物，菌斑呈蓝色。
5.这里不存在由于质粒未能成功转入宿主而导致的Xgal不水解形成白色菌落的可能，因为未能成功导入质粒的宿主菌将会因为缺乏Amp抗性而被杀死。
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