二步法免疫组化操作流程及细节分析
1 石蜡印片脱蜡和水化后，用PBS(pH7.4)冲洗二次，每次3分钟(3x3min)
2 根据每种抗体的要求，对组织抗原进行相应的修复。(具体选择见附录)
3 如果有必要，每张切片加1滴或50ul的3％H202，室温孵育10分钟，以阻断内原性 过氧化物酶的活性。PBS冲洗3x3·．
4 除去PBS液，每张印片加1滴或50ul第一抗体(用户自选)，室温孵育60分钟或4'C 过夜，建议参见每种抗体的说明书。
5 PBS冲洗3x5’。除去PB5液，每张印片加1滴或50ul聚合物增强刑(试剂 A )，室腽孵育20分钟．PBS冲洗3x3．
6 除去PBS液，每张切片加1滴或50ul酶标抗鼠／免聚什物(试剂 B )，室温孵育30分钟。PBS冲洗3x3·．
7 除上PBS液，每张切片加1滴或5Oul新鲜配制的DAB或AEC溶液(具体选择见附录)，显微镜观察3~5分钟( DAB )或10分钟( AEC )。
8 自来水冲洗，苏木素复染，若有必要，可用0.1％HCl分化自来水冲洗，PBS返蓝．
9 如果用DAB显色，则切片经梯度酒精脱水干燥，(二甲苯透明)，中性树胶封片，如果用AEC显色，则切片不能酒精脱水， 而直接用水性封片剂。
附：1. 免疫组化实验中的抗原修复
2. 免疫组化技术常用显色液的选择与使用
实验室最近要做 免疫组化,细胞培养实验,需要什么试剂和耗材?还有病理实 ...
盖玻片 5片装载玻片染色缸 24片装载玻片塑料染色架，2个 24片装载玻片塑料染色缸，10个 湿盒，避光，20片，3个 免疫组化笔，Pap Pen，2支
石蜡切片免疫荧光与免疫组化一抗浓度有区别吗
因此免疫荧光一般采取二步法，而免疫组化中有biotin放大这一步。所以建议免疫荧光的时候重新摸索浓度，要是采用三步法可能不需要摸索了。另我们免疫荧光抗体一般用推荐浓度。免疫荧光抗体浓度要根据免疫组化结果的强弱调整，如果较强，用相同浓度即可；如果组化阳性较弱，那么做荧光时要加大抗体浓度。至于免疫...
为什么做免疫组化时固定用的多聚甲醛PFA要现配现用?放久了甲醛会挥发...
请问你做哪方面的组化，用的什么方法做的？现在通用流行的免疫组化一步法里，好像没有一步是需要固定的了哦？难道你还是用的最古老的3步法麽？建议您换用一步法哦，方法简单，效果很好。另外，甲醛溶液是易挥发液体。现在因为为了后期做免疫组化和分子生物学的一些实验，病理科标本固定已经推荐使用中性...
做快速液盖膜单独温控法是确定癌症之后才做的么?
快速液盖膜单独温控是免疫组化检查过程中一种特殊的操作方法。它是确认患者有无癌症的重要依据。因此都是它是确诊前包含在免疫组化检查里一起做的。免疫组化的原理是利用抗体和抗原具有高度特异性结合的原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性抗体...
免疫组化二步法,过氧化氢封闭时间过长,会有什么影响
注意清洗操作防止残留，导致假阳性，影响后续检测结果。
免疫组化不是抗体的原因那为什么只有背景有色
浓度进行测试，使每一抗体个体化，找到适合自己实验室的理想工作浓度，既使是即用型的抗体也应如此，不能只简单的按说明书进行染色。（2）抗体孵育时间过长或温度较高：解决办法是，严格执行操作规程，最好随身佩带报时表或报时钟，及时提醒，避免因遗忘而造成时间延长。现在流行的二步法（Polymer）敏感性...
在免疫组化SABC法中,DAB显色是做什么用的?为什么用?原理是什么?DAB试剂...
DBA显色：DAB是显色剂，有毒，所以操作是最好带口罩和手套。它主要和蛋白质的NH2或SH基团结合，形成稳定的nn键或ns键；然后DAB中的显色基团就能显示出颜色，标记到已经暴露的蛋白质上，从而显示我们目标细胞的蛋白质分布及种类等。原理：是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合...
小儿肾积水的诊断方式
Knerr 等利用冷冻切片采用免疫组化及RT—PCR技术检测了先天性输尿管肾盂连接部梗阻(UPJO)患者nNOS在狭窄段表达情况，结果显示狭窄段氮能神经元及神经纤维明显减少，nNOS的mRNA表达明显降低，故认为UPJO狭窄段氮能神经分布的改变可能在uPJO的病因及发病机制中发挥重要作用。姜立新等用S2P二步法对中、重度小儿...
免疫组织化学sp法和pv法的区别
灵敏度高而极易控制背景的检测系统试剂盒是最为理想也是免疫组化染色优劣的关键，根据免疫组化技术发展至今PV系列及SP试剂盒更优于其它试剂盒。检测系统应与一抗来源相匹配，否则检不出目的物。如一抗是鼠单或多抗的，二抗就应该是羊或兔抗鼠的。四·建议选SP，亦可根据实验室习惯及在组织中的表达...
免疫组化经验总结
5. 实验流程：如SP三步法，涉及石蜡切片、脱蜡、H2O2处理等步骤，以及一抗、二抗孵育和显色剂处理等关键操作。在实验中，特别强调理论与实践的结合，如免疫荧光技术的细节处理和酶免疫组化的步骤，包括样本处理、封闭、抗体孵育等。在实际操作中，需注意如试剂盒更换、抗体稀释液pH值的影响、血清封闭和...
镇章化癥： 免疫组化实验程序目前比较常用的有两个:三步法和二步法.前者在较长时间内一直是免疫组化的标准程序,目前该法仍在使用.后者是近年来(1995年)推出的灵敏度比较高的方法,操作较三步法便捷,但价格也高于前者.其原理是将传统三步法中的二抗和附有酶的三抗由二步法中的二抗和酶的结合物所代替.即:抗原~一抗~二抗*酶复合物 其特点是灵敏度高、背景干净、简便快捷、可以省去三步法中血清封闭的步骤、具有更高的信号放大系统.至于详细步骤就要看你使用的试剂盒了.下面以多聚辣根过氧化物酶免疫组化检测试剂盒说明其特点和原理.
汉寿县18857636629： 免疫组织化学的全过程包括哪些步骤 - ？
镇章化癥： 免疫组织化学的全过程包括哪些步骤 免疫组织化学的全过程包括:1.抗原的提取与纯化;2.免疫动物或细胞融合,制备特异性抗体(免疫球蛋白)以及抗体的纯化;3.将显色剂与抗体结合形成标记抗体
汉寿县18857636629： 一步法免疫组化和SP法免疫组化有什么区别 - ？
镇章化癥： 楼主是问免疫组化SP法和Pv法的区别吧:SP法是生物素-卵白素系统:生物素为一种小分子维生素,卵白素又称为抗生物素,SP法的染色步骤为一抗~生物素化二抗~ABC复合物~DAB显色,其中ABC复合物是由一分子抗生物素蛋白与三分子结合有HRP的生物素组合成的复合物.PV法属于非生物素系统免疫组化方法,应该是称为二步法,是以高分子的葡聚糖为载体将多个二抗分子和酶结合在一起,代替了传统的二抗和三抗,是检测变得简单而且增加了敏感性.
汉寿县18857636629： 免疫组化操作步骤有哪些? - ？
镇章化癥： 建议您到杭州百替生物的主页上来看看,有详细的步骤,我们也可以专业代做免疫组化实验哦! 直染料在溶液中被纤维吸附到表面,然后不断向纤维的无定形
汉寿县18857636629： 免疫组化sp法和sabc法? - ？
镇章化癥： SP法是链霉菌抗生素蛋白——过氧化物酶连接法而SABC法也是一个生物素标记抗体显色方法二者最大的区别就是试剂盒不一样,主要是因为二抗的标记物不同,选择的时候,可以根据实验室现有的或者最容易购得二抗选择不同的试剂盒,主要是显色的机制上的不同.
汉寿县18857636629： 免疫组织化学sp法和pv法的区别 - ？
镇章化癥： 一·第二代聚合酶两步法( PV,En Vision) PV-9000是2001年投入美国市场的,它是将二抗抗体分子的单价Fab段与酶聚合在一起,与一抗结合后,直接用底物进行显色的方法.此方法由于简单、快速、敏感性强且避免了内源性生物素所造成...
汉寿县18857636629： 什么是免疫组化染色,它的原理和步骤是什么?请尽量的准备和详细一点, - ？
镇章化癥：[答案] 这个网页 专门介绍 它的原理和步骤的,很详细,看看吧! 这个网页 是 关于 免疫组化的 相关知识,很全.
汉寿县18857636629： 什么是免疫组化检查 - ？
镇章化癥： 免疫组化检查指应用免疫学抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色,确定组织或细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对的定量检查. 免疫组织化学利用抗体...
