怎样用高效液相色谱法计算检出限和定量限?
首先要采集一段基线,看一看波动情况,需要一段稳定的波动,看看最高点和最低点之间的高度。这个就是你的仪器噪音。
然后是将你需要测定的样品进样分析,当信噪比为10的时候,这个浓度就是定量限;当信噪比为3的时候,这个浓度就是检测限。信噪比的意思就是信号/噪音。
比如说,你的噪音高度大约是0.1mV,那么检测限就是你的待测样品逐级稀释至
样品峰高为0.3mV时样品的浓度,定量限则是峰高为1.0mV时的样品浓度。
你可以选择线性最小浓度的样品进样,假设它的浓度是10ug/ml,进样后主峰峰高是10mV,那么你的定量限浓度大约是这个浓度稀释10倍,也就是1ug/ml。而检测限浓度则需要这个浓度再稀释3倍,大约是0.3ug/ml
HPLC色谱图上的基线并不是一条直线,而是呈现锯齿状,这就是检测器的噪音信号,通过测定噪音峰峰高与样品峰峰高的的比值,来确定在此系统条件下样品的检出限与定量限。
检出限 流动相中样品组分在检测器上产生两倍基线噪声信号时相当的浓度或质量流量定为HPLC法的检出限,也就是信噪比为2:1的时候的样品浓度。
定量限 流动相中样品组分在检测器上产生十倍基线噪声信号时相当的浓度或质量流量定为HPLC法的定量限,也就是信噪比为10:1的时候的样品浓度。
测定检出限和定量限的所用的方法,就是把样品稀释成一系列浓度梯度,注入HPLC仪中,测定信噪比,在色谱图上直接测定就可以了。
首先要采集一段基线,看一看波动情况,需要一段稳定的波动,看看最高点和最低点之间的高度。这个就是你的仪器噪音。
然后是将你需要测定的样品进样分析,当信噪比为10的时候,这个浓度就是定量限;当信噪比为3的时候,这个浓度就是检测限。信噪比的意思就是信号/噪音。
比如说,你的噪音高度大约是0.1mV,那么检测限就是你的待测样品逐级稀释至 样品峰高为0.3mV时样品的浓度,定量限则是峰高为1.0mV时的样品浓度。
你可以选择线性最小浓度的样品进样,假设它的浓度是10ug/ml,进样后主峰峰高是10mV,那么你的定量限浓度大约是这个浓度稀释10倍,也就是1ug/ml。而检测限浓度则需要这个浓度再稀释3倍,大约是0.3ug/ml
高效液相色谱仪怎么定量分析的?
高效液相色谱仪定量分析是一种相对分析,是通过对已知含量的物质和待测样品在相同条件下进行分析,得到数据后进行对照计算,推算出含量的。题中已经知道未知含量物质的峰面积后,还无法得到含量,如果需要得到绝对含量数据,还需要将一个已知含量的样品(标准样品)在同一条件下进行一次分析,得到相同物质组份...
高效液相色谱法中的样品和流动相在使用前需要注意什么?
高效液相色谱仪的流动相选择时应注意: 1、尽量使用高纯度试剂作流动相,防止微量杂质长期积累而损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 2、避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子,如使固定液溶解流失、酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。 3、样品在流动相中应有适宜的溶解度,防止产生沉淀沉积在柱中。 4...
高效液相色谱法有哪些特点
4、高灵敏度:紫外检测器可达0.01ng,进样量在μL数量级。5、应用范围广:百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析,特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析,显示出优势。6、柱子可反复使用:用一根柱子可分离不同化合物 7、样品量少、容易回收:样品经过色谱柱后不被...
高效液相色谱与经典液相色谱有何异同?
离子交换色谱:离子交换色谱通常用离子交换树脂作为固定相。一般是样品离子与固定相离子进行可逆交换,由于各组分离子的交换能力不同,从而达到色谱的分离。二、特点不同 1、高效液相色谱法如下:①高压:流动相为液体,流经色谱柱时,受到的阻力较大,为了能迅速通过色谱柱,必须对载液加高压。②高速:...
高效液相色谱法对流动相有什么要求?
高效液相色谱流动相的选择原则:1、色谱醇的溶剂不要随意加满溶剂瓶 作为分析流动相,应避免不必要的浪费,防止污染环境,危害身体健康。应该根据样哦数量,计算需要使用的溶剂体积,添加适量流动相到试剂瓶中作为流动相。因为有些有机溶剂长期放置易变质,在分析时导致基线抬高,对一些分析,特别是质谱分析...
高效液相色谱面积归一法是什么?
在被测波长(紫外检测器)处吸收系数相同,各组分的吸收在线性范围内,这是一种粗略的方法。在没有参照物的情况下,可采用高效液相面积归一法化法对样品含量进行标定,并可从有机溶剂(溶解残渣)、水、无机杂质(燃烧残渣)的量中扣除该方法测定的含量,即测得样品含量。
高效液相色谱方法及应用的目录
第一章 绪论 第一节 高效液相色谱法的特点 一、与经典液相色谱法比较,高效液相色谱法具有更高的分离效率和更低的柱压降。二、与气相色谱法比较,高效液相色谱法适用于极性、非极性及具有不同分子量的化合物分离。三、高效液相色谱法的优点包括:速度快、灵敏度高、样品用量少、色谱柱可重复使用等。四...
高效液相色谱法用于含量测定的原理是什么?
所以在使用标准品进行含量标定的时候,标准品的纯度是已知的量,称取一定量标准品后进行定容稀释.进样分析后,峰面积可从图谱上读取(A样品).样品也称取一定的质量,稀释后进样分析.然后读取峰面积(A对照).公式中之后样品纯度是未知数,最后计算结果.也有情况是在没有标准品的情况下用面积归一化法计算...
高效液相色谱法在药物分析中的应用
例如,盐酸噻吩诺啡、奥沙西泮原料药及其片剂、盐酸喹那普利原药、氟他胺中有关物质的检查。这些方法简便、可行且专属性较强。3、在含量测定中的应用 用高效液相色谱法测定合成药及其制剂的含量,可以消除药物中的杂质,制剂中的附加剂及共存药物的干扰。此外,国内还对醋酸可的松滴眼液、喹诺酮类抗菌药...
高效液相色谱方法学验证如何进行?
高效液相色谱方法学验证如下:1、专属性:查看被测物质与被测结果间是否正确且唯一对应。考察方法:将处被测成分外的其他物质均做空白干扰对照,包括流动相、辅料空白、溶剂空白、其他成分(多组分产品)空白、如果方法有衍生还应包括衍生空白等等。2、精密度:查看方法多次测定是否能够得到相同的结果。考察...
貂良连翘:[答案] HPLC色谱图上的基线并不是一条直线,而是呈现锯齿状,这就是检测器的噪音信号.通过测定噪音峰峰高与样品峰峰高的的比值,来确定在此系统条件下样品的检出限与定量限.检出限 流动相中样品组分在检测器上产生两倍基线噪声...
铜川市19110592528: 色谱分析中检出限怎么算 - ?
貂良连翘: 首先要采集一段基线,看一看波动情况,需要一段稳定的波动,看看最高点和最低点之间的高度.这个就是你的仪器噪音. 然后是将你需要测定的样品进样分析,当信噪比为10的时候,这个浓度就是定量限;当信噪比为3的时候,这个浓度就是检测限.信噪比的意思就是信号/噪音.比如说,你的噪音高度大约是0.1mV,那么检测限就是你的待测样品逐级稀释至 样品峰高为0.3mV时样品的浓度,定量限则是峰高为1.0mV时的样品浓度. 你可以选择线性最小浓度的样品进样,假设它的浓度是10ug/ml,进样后主峰峰高是10mV,那么你的定量限浓度大约是这个浓度稀释10倍,也就是1ug/ml.而检测限浓度则需要这个浓度再稀释3倍,大约是0.3ug/ml
铜川市19110592528: 高效液相色谱检出限 怎么 测? - ?
貂良连翘: 检出限,顾名思义也就是液相将样品检出的最小浓度,信噪比3:1是指,信号峰(也就是样品峰)的峰高是噪音峰峰高3倍即可,至于噪音峰峰高的确定,您可以选取较为平缓的一段基线作为参比,放大后,记录基线噪音峰的高度,然后要做的就是稀释您的样品,直到您的样品峰高大约是噪音峰高的三倍,这时候样品的浓度就是检出限. 另外,知道标准曲线并不能确定检出限,标准曲线只能说明样品在一定范围以内,面积与浓度是成正比的,而检出限则是液相的最小检出浓度,一般不会在线性范围以内,也就是说,检出限仅仅能给物质定性,如果需要定量,则必须在线性范围以内. 但愿我的回答能对您有所帮助
铜川市19110592528: 我用的是岛津LC - 10A液相色谱,其检出限怎么计算 - ?
貂良连翘: 观察法吧. 首先要采集一段基线,看一看波动情况,需要一段稳定的波动,看看最高点和最低点之间的高度.这个就是你的仪器噪音. 然后是将你需要测定的样品进样分析,当信噪比为10的时候,这个浓度就是定量限;当信噪比为3的时候,这个浓度就是检测限.信噪比的意思就是信号/噪音.比如说,你的噪音高度大约是0.1mV,那么检测限就是你的待测样品逐级稀释至 样品峰高为0.3mV时样品的浓度,定量限则是峰高为1.0mV时的样品浓度.
铜川市19110592528: 液相色谱最低检测限怎么算 - ?
貂良连翘: 你说的检测限其实具体叫法应该分检出限和定量限. 检出限是指仪器可以检测出物品是否存在时的样品浓度. 定量限是指仪器可以检测出,并峰面积可以用于计算时的样品浓度. 检出限的峰高是基线噪音的3倍,定量限的峰高是基线噪音的7倍. 有啥不懂的还可以再问,国家药典里也有详细介绍.
铜川市19110592528: 高效液相色谱中的线性范围及检测极限怎么算 - ?
貂良连翘: 线性就是方差 平方差那类,就是重复性rsd,检测限就是标样看看能不能检出来,仪器参数上都有,只是平时用看看靠不靠谱,能满足应用就行了,满足不了也没招,说白了就是仪器稳定性和检测器性能
铜川市19110592528: 高效液相色谱如何计算含量 - ?
貂良连翘: 先计算供试品溶液浓度:20.96*4.909/3.411=30.16 微克每毫升计算样品百分含量:30.16*10*50/25/1.0156/1000000*100%=0.05939%由于你没有提供平均片重,还不能计算每片的含量公式...
铜川市19110592528: 请问高效液相色谱的测定范围是多少 - ?
貂良连翘: 1、这个要做检测限,即噪声信号的3倍值(S/N=3),还有定量限(S/N=10) 2、再做一下线性范围,就能知道样品在哪个浓度范围定量检测是比较准确的了.
铜川市19110592528: 高效液相色谱法的计算公式 - ?
貂良连翘: [编辑本段]测定方法定量测定时,可根据样品的具体情况采用峰面积法或峰高法.但用归一法或内标法测定杂质总量时,须采用峰面积法. 面积归一化法测定供试品(或经衍生化处理的供试品)中各杂质及杂质的总量限度采用不加校正因...