一文解决单细胞亚群注释的所有问题
好久没更新了，上来我得写一个有分量的推文暖暖场。其实细想一下，不能全归因于平时太忙（还是太懒了），因为最近看到其它很多小伙伴做的很好且都在不断更新。其实抽出时间写一写推文对个人整理知识和练习写作能力都是很有帮助的！
Immugent最近一直在做单细胞的课题，期间收集了各种细胞注释的marker基因，本次分享主要就针对这个主题展开。
单细胞测序技术是近十年最火爆的生物学技术之一，它赋予我们在单个细胞水平研究科学问题的能力。虽然单细胞技术目前已经发展的很成熟，商业化的10X平台让很多科研团队有自己做单细胞测序的能力，但是并不是每一项通过单细胞测序得到的结果都能成功发表。我身边就有很多认识的朋友做了单细胞测序，但是没有分析出任何可用的结果，最终砸手里了。
单细胞测序既然是在单个细胞研究科学问题，那就引出了其分析流程中很关键一步--细胞亚群的注释。别小看这简单的一步，它可以说是单细胞测序研究成败的最关键因素之一，因为后续的分析都是基于这一步开展的，如果开头都是错的，那后续分析出的任何结果都是没有意义的。
理论上来说，每一类细胞都有自己独特的标志基因，就像我们做流式一样，根据表达的蛋白来对细胞进行定义，而且既然是单个细胞水平的测序结果，这应该没有什么难度。但和其它技术一样都会有自己的不足，而单细胞测序(10X)同样也有自身解决不了的问题：
如下图是一篇做正常 肾组织 单细胞文献中用到的标志基因：
这两个表已经总结的相当全面了，但是在实际进行细胞亚群注释时应当遵循一定原则，我提供以下思路来进行参考：1. 首先应根据免疫细胞的marker（PTPRC）在全局上定义出免疫细胞和非免疫细胞，因为相对于非免疫细胞，免疫细胞的种类不仅多而且功能各异；2. 其次就是对这两类再细分群，非免疫细胞可分为上皮细胞(EPCAM)，内分泌细胞(PECAM1)，纤维细胞(FAP)等；免疫细胞可首先区分为天然免疫细胞：NK(NCAM1)，Mac(CD68)，DC(XCR1)，中性粒(MNDA)和肥大细胞(TPSAB1)等；适应性免疫细胞：B细胞(CD19,CD79A)和T细胞(CD3D,CD3E)，到这非免疫细胞和天然免疫细胞差不多说完了，下面进一步说下更为复杂的适应性免疫细胞亚群；3. 适应性细胞中的B细胞相对好区分，就是在B细胞群基础上再多区分一群浆细胞(IGKC,MZB1); 最后就说一下这个T细胞，T细胞群的注释可谓是最复杂的，第一步可以简单在大群上区分出3种：CD4 Tconv(CD40LG,MAF), Treg(FOXP3,IL2RA)和CD8 T(GZMB,NKG7)细胞;接下来就需要根据功能状态把CD4 Tconv和CD8 T分为Naive(SELL,CCR7), Effector(PRF1,CCL5),Effector-memory(IL7R,EOMES), Exhausted(LAG3,TIGIT)了。
在对各种细胞亚群进行注释的过程中T细胞的注释是最复杂的，而最最复杂的是对各种CD4 T细胞的注释。正如上面抛出的一个问题所介绍的，因为CD4基因的表达不太容易像CD8A/B那样容易被捕捉到(最新的解释可能是因为CD4分子在实验过程中有内吞现象)，因此对CD4 T细胞的亚群注释是难上加难的。但是我这里根据自己免疫学知识来给大家介绍另一种比较靠谱的解决方式，那就是通过各种CD4 T细胞的转录因子来注释。
首先原始的CD4 T细胞在受到TCR信号刺激的情况下会朝着各种CD4 T细胞亚群的方向分化，而这每一种不同亚群的命运是由各种转录因子来决定的，其中最重要的就是 Signal transducer and activator of transcription (STAT)。 从下图我们也可以看到，正是由不同的STAT来诱导CD4 T细胞朝着不同的方向发育，并且相对于其它种类的基因，转录因子的表达更加稳定保守，所以就比较容易被单细胞测序平台所捕获，因此，利用各种CD4 T细胞亚群的表面蛋白联合关键转录因子就能对CD4 T细胞亚群进行更准确的注释。
好了，本次的分享到这就结束了，下次我将继续这篇推文的内容，介绍一下如何利用生信软件，同时利用多种标志基因的综合评分对细胞亚群进行注释，敬请期待！
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汉川市14796102395： 如图是植物细胞和动物细胞的结构示意图,据图回答问题:(1)属于植物细胞的是 - -----图,你判断的依据是 -- ？
函敬丽英： (1)由植物细胞和动物细胞的结构示意图可知:[A]细胞壁,[B]细胞膜,[C]细胞核,[D]细胞质,[E]叶绿体,[F]液泡.甲图与乙图相比,相同点是都具有细胞膜、细胞质、细胞核和线粒体,不同点是甲图还具有细胞壁、叶绿体和液泡,乙图没有.细胞...
汉川市14796102395： 有关单细胞生物的问题 - ？
函敬丽英： 从分类(taxonomy)上来说,单细胞动物有:1.细菌(bacteria)2.古细菌(archaea)3.原生物(Protista)4.部分海藻(algae)5.部分真菌(fungi) 最最最常见,最有代表性的就是细菌了,其他单细胞生物种类数量比较见,所以我就主要来说...
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函敬丽英： A、一切生命活动都离不开细胞,但细胞不能完成一切生命活动,如人体的反射活动,故A错误; B、单细胞生物是由一个细胞构成的,只能说明单细胞的生命活动在细胞内进行,但对于多细胞生物,其生命活动不仅仅在细胞内进行,故B错误; C、各种生物的生命活动都是在细胞内或细胞的参与下完成,所以每一个生命科学问题的答案都必须在细胞中寻找,故C正确; D、一切动植物都是由细胞构成的,但不是一切生物,如病毒没有细胞结构,故D错误. 故选:C.
汉川市14796102395： 膜内折合内共生学说是用来解释生物进化过程中的哪个本质性变化 1厌氧到有氧2单细胞到多细胞3原核细胞到真 - ？
函敬丽英： 膜内折应该是生物从厌氧到需氧、异养到自养的基础. 内共生学说可以解释线粒体、叶绿体两种细胞器的起源问题.
汉川市14796102395： 生物是怎么从单细胞生物进化为多细胞生物的? - ？
函敬丽英： 单细胞生物进化为多细胞生物的问题,有很多推测,比较著名的有以下几种学说 (一)群体学说 1.赫克尔的原肠虫学说 .认为多细胞动物最早的祖先是由类似团藻的球形群体,一面内陷形成多细胞动物的祖先.这样的祖先,因为和原肠胚很相似,...
汉川市14796102395： 孙悟同学学习k“练习使用显微镜”之后,用显微镜观察某种植物叶肉细胞的结构.根据有关知识回答下列问题 - ？
函敬丽英： (1)在显微镜上目镜安放在镜筒上方,①是目镜.反光镜起反射光线的作用,在载物台的三方,把外界的光线反射进入通光孔,再通过物镜进入镜筒,②是反光镜.&ngsp; &ngsp;(五)图示①的操作是对光,图示②的操作是取镜与安放,图示③的...
