大肠杆菌怎么培养的
一般大肠杆菌都使用LB 培养基,
其成分如下：
胰化蛋白胨 10g/L
酵母提取物 5g/L
NaCl 10g/L
如果是固体的培养基,就需要再加入15克琼脂粉
pH 7.4~7.6
实验室里,配好之后就去灭菌锅里灭菌就好了.
LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基.它含有酵母提取物、蛋白胨和NaCl.其中酵母提取物为微生物提供碳源和能源,磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源,而NaCl提供无机盐.
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂.琼脂在常用浓度下96℃时溶化,一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化,以免琼脂烧焦.琼脂在40℃时凝固,通常不被微生物分解利用.固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同.
使用牛肉膏蛋白胨培养基
组成成分：牛肉膏
3g,蛋白胨
10g,Nacl
5g,琼脂
15～20g,水1000mL,PH7.4～7.6。
具体配置步骤：
1.称药品
按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中.牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量,随后放入热水中,牛肉膏使与称量纸分离,立即取出纸片.蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速.
2.加热溶解
在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至所需量.若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶解的药品中,再加热融化,此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补足所失的水分.
3.
调pH
检测培养基的pH,若pH偏酸,可滴加lmol/L
NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸检测,直至达到所需pH范围.若偏碱,则用lmol/L
HCl进行调节.pH的调节通常放在加琼脂之前.应注意pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度.
4.过滤
液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4层纱布趁热过滤,以利培养的观察.但是供一般使用的培养基,这步可省略.
5.分装
按实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内.分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染.
分装量:固体培养基约为试管高度的l/5,灭菌后制成斜面.分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜.半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝.
6.加棉塞
试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞.棉塞的形状,大小和松紧度要合适,四周紧贴管壁,不留缝隙,才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用.要使棉塞总长约3/5塞入试管口或瓶口内,以防棉塞脱落.有些微生物需要更好的通气,则可用8层纱布制成通气塞.有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞.
7.包扎
加塞后,将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸,以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞.若培养基分装于试管中,则应以5支或7支在一起,再于棉塞外包一层牛皮纸,用绳扎好.然后用记号笔注明,培养基名称,组别,日期.
8.灭菌
将上述培养基于121.3℃湿热灭菌20min.如因特殊情况不能及时灭菌,则应故人冰箱内暂存.
9.无菌检查
将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24～48h,无菌生长即可使用,或贮存于冰箱或清洁的橱内,备用.
大肠杆菌的培养：
37摄氏度，恒温培养48到72小时，因为接种时和具体培养条件的不同，其生长一般都在2天外才能长出明显的菌落。
菌落特征：乳白色，圆形，菌落边缘整齐，表面光滑，表面和背面颜色一致。
使用牛肉膏蛋白胨培养基
组成成分：牛肉膏 3g,蛋白胨 10g,Nacl 5g,琼脂 15～20g,水1000mL,PH7.4～7.6。
具体配置步骤：
1.称药品 按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中.牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量,随后放入热水中,牛肉膏使与称量纸分离,立即取出纸片.蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速.
2.加热溶解 在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至所需量.若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶解的药品中,再加热融化,此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补足所失的水分.
3. 调pH 检测培养基的pH,若pH偏酸,可滴加lmol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸检测,直至达到所需pH范围.若偏碱,则用lmol/L HCl进行调节.pH的调节通常放在加琼脂之前.应注意pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度.
4.过滤 液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4层纱布趁热过滤,以利培养的观察.但是供一般使用的培养基,这步可省略.
5.分装 按实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内.分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染. 分装量:固体培养基约为试管高度的l/5,灭菌后制成斜面.分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜.半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝.
6.加棉塞 试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞.棉塞的形状,大小和松紧度要合适,四周紧贴管壁,不留缝隙,才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用.要使棉塞总长约3/5塞入试管口或瓶口内,以防棉塞脱落.有些微生物需要更好的通气,则可用8层纱布制成通气塞.有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞.
7.包扎 加塞后,将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸,以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞.若培养基分装于试管中,则应以5支或7支在一起,再于棉塞外包一层牛皮纸,用绳扎好.然后用记号笔注明,培养基名称,组别,日期.
8.灭菌 将上述培养基于121.3℃湿热灭菌20min.如因特殊情况不能及时灭菌,则应故人冰箱内暂存.
9.无菌检查 将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24～48h,无菌生长即可使用,或贮存于冰箱或清洁的橱内,备用.
大肠杆菌的培养：
37摄氏度，恒温培养48到72小时，因为接种时和具体培养条件的不同，其生长一般都在2天外才能长出明显的菌落。
菌落特征：乳白色，圆形，菌落边缘整齐，表面光滑，表面和背面颜色一致
发酵法，这种方法主要是在44.5℃下的培养基上进行大肠杆菌的培养，该培养基含有荧光底物，需要培养 24 h。然后对荧光底物进行释放，需要采用葡萄糖醛酸进行，让培养基能够在紫外光的照射下发出荧光。主要步骤包括发酵、分离培养、二次发酵、显微镜观察等。另外滤膜法主要过程：加入 10 mL 左右的无菌水于滤器中，然后掺入一些无菌水进行清洁滤器的内壁，再进行过滤，将滤膜放在 M-FC 培养基中，两者之间不能够有气泡，然后进行密封，存放温度为 44.5℃，存放时间约 24 h，直到大肠杆菌的菌群变成蓝色或蓝绿色。
发酵法，这种方法主要是在44.5℃下的培养基上进行大肠杆菌的培养，该培养基含有荧光底物，需要培养 24 h。
然后对荧光底物进行释放，需要采用葡萄糖醛酸进行，让培养基能够在紫外光的照射下发出荧光。主要步骤包括发酵、分离培养、二次发酵、显微镜观察等。
培养大肠杆菌用LB培养基.
LB培养基是一种培养基的名称,生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求.培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌.通过培养工程菌,我们可以表达大量的外源蛋白,也可以拿到带有外源基因的质粒,工程菌的有效扩增是生化分子实验的基础.
LB培养基的配方如下:
胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L
酵母提取物(Yeast extract) 5g/L
氯化钠(NaCl) 5g/L
另外根据经验值用NaOH调节该培养基的pH,使其达到7.4(该pH适合目前使用最广的原核表达菌种E.coli的生长)
E.Coli就是大肠杆菌
最好用去离子水配制,不过要求不是很严格的话纯净水也可以.
如何用发酵法区分大肠杆菌、普通变形菌、产气肠杆菌?
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如何使用EMP培养基鉴别细菌?
二、EMP培养基使用方法 1. 制备EMP培养基 （1）将10g葡萄糖、12g琼脂、0.08g苯红、5g氯化钠、1.5g磷酸二氢钾加入1000ml蒸馏水中，加热并搅拌至完全溶解。（2）将培养基调节至pH7.4±0.2。（3）分装到无菌培养皿中，灭菌后储存在4℃。2. 鉴别原理 EMP培养基的鉴别原理基于肠杆菌属和大肠杆菌...
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产气肠杆菌在乳糖蛋白胨培养基生长。产气肠杆菌是一种细菌，在体内体外都能存活，主要存活在人和动物的肠道，只要有糖分蛋白质和水就可以繁衍。
xl1-blue感受态的制备通常使用电击吗
答：肠杆菌电转化受态细胞制备 第： 1. 适合菌株（XL1-Blue, DH5α）置于LB或其营养丰富培养基37°C夜培养 2. 高温灭菌离瓶（250-500ml）备第二摇瓶用 3. 准备几瓶灭菌水（总量约1.5升）保存于冷冻室备第二重悬浮细胞用 第二： 4. 转移0.2-1ml夜培养物至装500ml LB（或其营养丰富培养...
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肠杆菌败血症合并肺炎者,尿常规、肾功能和肝功能可能异常。 13.3 痰液细菌培养 痰液细菌培养为确诊肠杆菌肺炎的唯一手段。临床咳出的痰受口咽部其他细菌的污染,可采用经环甲膜穿刺、经皮肺穿刺和经纤支镜获得标本。若采用咳痰培养,标本需先进行培养前处理和应用合适的选择培养基,以提高结果的可靠性。 (1)咳痰的处理...
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粪大肠菌群检测程序,使用什么增菌培养基有什么现像
分别使用乳糖发酵管或乳糖胆盐发酵管进行初发酵，如果为阳性再使用EC肉汤进行复发酵试验。其中，乳糖发酵管或乳糖胆盐发酵管颜色变黄，其中倒管有气泡产生；而复发酵中如果为阳性则表现为肉汤浑浊且倒管中有气泡产生。
肠杆菌科细菌有哪些共同的生物学特征?
(2)培养特点：兼性厌氧，营养要求不高，在普通培养基和MAC培养基上生长良好。(3)生化反应：氧化酶试验(-)、触酶试验(+)、发酵葡萄糖产酸或产酸产气、硝酸盐还原试验(+)。(4)抗原构造：主要包括菌体(O)抗原、鞭毛(H)抗原和表面抗原。O抗原、H抗原是肠杆菌科血清学分群、分型的依据。(5)抵抗...
大肠杆菌
一分钟了解大肠杆菌
肠杆菌有哪些分类
③志贺氏菌属，本属是人类细菌痢疾的病原菌，通称痢疾杆菌。菌体大小(0.5~0.7)微米×(2~3)微米，无芽孢，无鞭毛，无荚膜，有的菌株有菌毛，需氧或兼性厌氧，能在普通培养基上生长。④克雷伯氏菌属。短粗，无鞭毛，有荚膜，菌体大小(0.3~1.5)微米×(0.6~6.0)微米，单个、成双或短链...
殷咽氨酚：[答案] 一般大肠杆菌都使用LB 培养基, 其成分如下: 胰化蛋白胨 10g/L 酵母提取物 5g/L NaCl 10g/L 如果是固体的培养基,就需要再加入15克琼脂粉 pH 7.4~7.6 实验室里,配好之后就去灭菌锅里灭菌就好了. LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基...
科尔沁右翼前旗18853814887： 有谁知道大肠杆菌的详细培养方法?越详细越好,希望精确到每样材料和各种材料的克数 急···急··· - ？
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殷咽氨酚： 大肠杆菌一般培养方法 使用牛肉膏蛋白胨培养基 组成成分:牛肉膏 3g,蛋白胨 10g,Nacl 5g,琼脂 15~20g,水1000mL,PH7.4~7.6. 具体配置步骤: 1.称药品 按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中.牛肉膏可放在小烧杯或表面...
科尔沁右翼前旗18853814887： 大肠杆菌培养? - ？
殷咽氨酚： 培养的过程:冻干菌株——复苏——营养肉汤培养(37摄氏度摇床,约18小时)——营养肉汁琼脂培养基平皿画线培养(37摄氏度隔水恒温培养箱,约24小时)——(挑取单个菌落)营养肉汁琼脂斜面培养基培养(37摄氏度隔水恒温培养箱,约24小时)——活菌计数实验(培养:37摄氏度隔水恒温培养箱,约48小时)
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科尔沁右翼前旗18853814887： 大肠杆菌培养基制备,要具体的步骤,金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌呢? - ？
殷咽氨酚：[答案] 平板计数琼脂(plate count agar,PCA)培养基 成分 胰蛋白胨 5.0 g 酵母浸膏 2.5 g 葡萄糖 1.0 g 琼 脂 15.0 g 蒸馏水 1000 mL 加热溶解 调配好后 高压蒸汽灭菌即可使用了
科尔沁右翼前旗18853814887： 大肠杆菌培养基怎么制作 - ？
殷咽氨酚： 大肠杆菌培养基比较简单,用普通的营养琼脂培养基即可,市场上有售,按照说明书直接配置就可.
科尔沁右翼前旗18853814887： 如何简单较快地培养大肠杆菌? - ？
殷咽氨酚： LB液体培养基 37摄氏度,摇床培养
科尔沁右翼前旗18853814887： 大肠杆菌一般采用哪些培养基? - ？
殷咽氨酚：[答案] 胆盐乳糖培养基、MUG培养基、曙红亚甲蓝琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基等
