实时荧光定量pcr数据如何统计？

实时荧光定量PCR的结果该怎样分析？~

1、如果有标准曲线，按照标准曲线计算；
2、一般都是相对量，则用delta delta CT方法来计算；
3、引物或探针降解：可通过PAGE电泳检测其完整性；
4、模板量不足：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起；
5、看CT值是分析荧光定量PCR最直观的一个数据，CT值一般在35左右就失去参考价值了，平时我们实验室用BIODAI-PCR荧光定量法测得的扩增曲线的起跳值基本在30左右。

扩展资料：
PVR的循环参数：
1、预变性；
模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要，加热时间参考试剂说明书。
2、变性步骤；
循环中一般95℃，30秒足以使各种靶DNA序列完全变性，可能的情况下可缩短该步骤时间。变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不彻底，易造成扩增失败。
3、引物退火；
退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的Tm值为参考，根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对PCR的特异性有较大影响。
4、引物延伸；
引物延伸一般在72℃进行（Taq酶最适温度）。但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略延伸时间随扩增片段长短而定，一般推荐在1000bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。
5、循环数；
大多数PCR含25-35循环，过多易产生非特异扩增。
6、最后延伸；
在最后一个循环后，反应在72℃维持10-30分钟．使引物延伸完全，并使单链产物退火成双链。
参考资料来源：百度百科—实时荧光定量PCR

1、如果有标准曲线，按照标准曲线计算。
2、一般都是相对量，则用delta delta CT方法来计算。
3、举例如下：对照组基因A的CT值为20， 内参（比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18，内参CT值14。
4、首先算加样量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。基因A: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是说基因A的量在实验组是对照组的4倍。但是由于加样量是2倍，所以4处以2=2，最后的相对量是2倍。
5、几点注意：必须确定扩增的特异性，只有相同目标的CT值才能相减（扩增效率有可能不同），2的某次方只是理论值，实际扩增效率低于2，最好不用Syber Green。

扩展资料：
PCR原理：
1、PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
2、PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成：
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；
③引物的延伸：DNA模板-引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
参考资料来源：百度百科--PCR反应

首先你这样做出来的统计没有意义。
应该是至少3次独立实验，而不是重复3次PCR。
如果3次试验，每次重复3次（取平均值算一次）。然后先定各个基因在对照组的值为一，再算出其他组该基因的相对量，比如内参CT值一样（都是15），而TNF的CT值对照组是20，而模型组是19，则相对量是2 （对照组为1）。△△ct=（19-15）-（20-15）= -1， 2-△△ ct= 2。
以此类推。
其实你只有3组，2个基因。用ANOVA先算，然后再用t test就可以了。结果表达为TNF：对照组1， 模型组想x± d, 药物组y± d. NF-kB: 对照组1， 模型组想x± d, 药物组y± d. TNF和NF-kB间不需要比较。

请参考我发表的文章：
http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1021/bp060102e/abstract
如果你提供email, 我可以发全文给你。

一般跑实时定量的机器的电脑上有软件自己可以分析的 可以抄写出数据来自己上EXCEL表格做出柱状图 也可以直接将软件给的数据图下载下来

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吉林市17790868314： 实时荧光定量pcr数据如何统计? - ？
仉符捷克： 首先你这样做出来的统计没有意义. 应该是至少3次独立实验,而不是重复3次PCR. 如果3次试验,每次重复3次(取平均值算一次).然后先定各个基因在对照组的值为一,再算出其他组该基因的相对量,比如内参CT值一样(都是15),而...

吉林市17790868314： 实时荧光定量pcr数据如何统计?近日做实时荧光定量pcr,得到了不同的ct值,只是计算了△△ct以及2 - △△ ct的值,但是我不知道如何使用spss进行统计分... - ？
仉符捷克：[答案] 首先你这样做出来的统计没有意义. 应该是至少3次独立实验,而不是重复3次PCR. 如果3次试验,每次重复3次(取平均值算一次).然后先定各个基因在对照组的值为一,再算出其他组该基因的相对量,比如内参CT值一样(都是15),而TNF的...

吉林市17790868314： 实时荧光定量pcr数据怎么记录? - ？
仉符捷克： rt pcr的机器会给出cT值和fluorescence的值,cDNA值自己计算

吉林市17790868314： 实时定量PCR的结果是怎样分析的?？
仉符捷克： PCR是聚合酶链式反应,通过反复的变性退火延伸,达到将微量DNA扩增检测的目的.目前实验室里多采用的是实时荧光定量检测,一起可以读取每次循环的荧光强度,并记录达到设定的阈值的循环次数.原始标本含有的DNA量愈多,达到阈值循环数愈小.通过已知浓度的标准品为对照,定量分析样本所含的目的DNA量.

吉林市17790868314： 实时荧光定量PCR的结果该怎样分析? - ？
仉符捷克： 1、如果有标准曲线,按照标准曲线计算; 2、一般都是相对量,则用delta delta CT方法来计算; 3、引物或探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性; 4、模板量不足:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起; 5、看CT值是分析...

吉林市17790868314： 实时定量PCR的结果分析 - ？
仉符捷克： Sybergreen可以和所有核酸结合,没有特异性.所以要保证特异性的话,最好用其他的方法.扩增体系中加入模板DNA的体积,比如同时10微升的体系,对照组加1微升DNA,实验组加2微升DNA,则实验组的加样量是对照组的2倍.看CT值是分析荧光定量PCR最直观的一个数据,CT值一般在35左右就失去参考价值了,平时我们实验室用BIODAI-PCR荧光定量法测得的扩增曲线的起跳值基本在30左右

吉林市17790868314： 如何分析荧光定量pcr实验结果? - ？
仉符捷克： 如果是realtime做表达量,用excel的制图,将每个个体的Ct值平均数做出柱状图就可以了.如果你还做了标曲的话,就用制图中的散点图看R2值.其实这些功能做定量PCR的时候电脑程序应该会自动分析才对.具体情况具体分析.

吉林市17790868314： 荧光定量pcr中基因相对表达量数据怎么进行统计分析 - ？
仉符捷克： 做各组比较即可,一般t检验或者方差分析

吉林市17790868314： 实时荧光绝对定量PCR实验数据分析哪个指标啊? - ？
仉符捷克： ct,是从基线到指数增长的拐点所对应的循环次数,仪器中给出的ct就是你每个孔实际的ct值 ct mean,是你相同样品的几个重复的CT值得平均值 如果是做的相对定量,用CTmean的结果就可以了,计算方法就是R=2-ΔΔCt,现在很多仪器你只要设置的时候明确标出内参基因和目的基因,这个结果也是会有自带软件给计算出来的.如果你是做绝对定量,那更方便,你只要在仪器设置的时候把你的标准品含量依次输入,最后软件会自动生成标准曲线什么的,你最后只要分析og sq的结果就可以了.

吉林市17790868314： 荧光定量PCR仪ABI7500数据怎么分析做完荧光定量,出来的数据项自己作图,但是横纵坐标和误差值都选哪些呢?不懂. - ？
仉符捷克：[答案] 做绝对定量的话横坐标是初始模版的拷贝数,纵坐标是CT值