疑似大肠杆菌的病料如何抹片染色,怎样判定

作者&投稿:舒奇 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
大肠杆菌染色方法~

考虑到你是观察纯净水,大肠杆菌含量较少,首先用滤膜过滤浓缩,然后平板培养数菌落即可,如果要用显微镜观察的话可以革兰氏染色

大肠杆菌测定
伊红美蓝平板上典型大肠杆菌菌落接种到营养琼脂平板,在(36土1)℃培养18h -24 h 。每个平板至少挑选2个菌落。挑取上述菌落纯培养物接种3.6.3生化培养基和乳糖发酵管,(36士1)0C培养24h 后观察结果。

大肠杆菌与非大肠杆苗鉴别试验方法

靛基质试验:
滴加Kovacs氏靛基质试剂0.1 m L于靛基质试验培养基中混合,静置,观察结果。
出现红色环的为反应阳性;出现黄色环的为反应阴性。

甲基 红(MR)试验:
滴加甲基红指示剂0.2 m 1于MR-VP培养基中混合,观察结果。
出现红色为阳性反应;出现黄色为阴性反应。

维 培(VP)试验:
滴加VP试剂甲液0. 2 mL于MR-VP培养基中混匀,再滴加VP试剂乙液0.1mL混匀,静置,观察结果。在15min内出现红色的为阳性反应;无颜色变化的为阴性反应。阴性结果1h后再观察一次出现红 色也为阳性反应。

西蒙氏柠檬酸盐试验:观察培养基颜色变化,出现蓝色为阳性反应;不变色为阴性反应。

大肠杆菌鉴定结果
靛基质 MR VP 西蒙氏柠檬酸盐 鉴定

- +
+ -
- —
- 典型大肠艾希氏杆菌
非典型大肠艾希氏杆菌

- +
+ -
- +
+ 典型柠檬酸盐杆菌
非典型柠檬酸盐杆菌

+ -
- -
- +
+ 典型产气肠杆菌
非典型产气肠杆菌

如出现表1以外的生化反应类型,表明培养物可能不纯,应重新划线分离,必要时做重复试验。

结果报告
1M Vic 试 验结果为++一一、一+一一和乳糖发酵管产气者,查其EC肉汤产气管数及其稀释倍
数,对照附录B(资料性附录)中MPN检索表报告样品中大肠埃希氏杆菌MPN /a (mL)值

大肠杆菌属于革兰氏阴性细菌(G-),用革兰氏染血法
基本原理:
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种重要的鉴别染色法。1884年由丹麦医师Gram创立。此法可将细菌分为革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌两大类。
革兰氏染色的机理主要是利用两类细菌的细胞壁成分和结构的不同。革兰氏阴性菌的细胞壁中含有较多的类脂质,而肽聚糖的含量较少。当用酒精或丙酮酸脱色时,类脂质被溶解,增加了细胞壁的通透性,使初染后的结晶紫和碘的复合物易于渗出,结果细胞被脱色,经复染后,又染上复染液的颜色。而革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖的含量多而且交联度大,类脂质含量少,经乙醇或丙酮洗脱后,肽聚糖层的孔径变小,通透性降低,因此细胞仍保留初染时的颜色。
二、基本步骤:
将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染液,染1min,水洗;滴加革兰氏碘液,作用1min,水洗;滴加95%乙醇脱色约15~30s,直至染色液被洗掉,不要过分脱色,水洗;
滴加番红复染液,复染1min,水洗、待干、镜检。结果:革兰氏阳性菌呈紫色,革兰氏阴性菌呈红色。


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