固氮微生物的分离和鉴定

固氮微生物的分离和鉴定~

我认为用缺氮培养基还有点欠缺，因为空气中大部分都是氮气。例如，根瘤菌就是利用空气中的固氮微生物。用缺氮培养基的话，有些能够利用气体氮的微生物就不能被选择。首先涉及的培养基要缺氮，然后放进一个完全封闭的容器内，容器内只充进一些氮气培养。如果最终长出菌来，那么一定是能够固氮的，然后再将这些菌分离，因为可能有菌会自己产生氮然后利用。鉴定的时候要看看微生物的有机成分中有没有氮，如果有，那么它就一定是固氮了。

常见微生物的分离与鉴定

在发酵工程中，首先要选育优良菌种，但由于微生物在自然条件下都是杂居混生的，因此要选育良种，就必须对其中的纯种微生物进行分离或鉴定。根据各类微生物的形态结构和新陈代谢类型，利用选择性培养基和鉴别性培养基，结合显微镜的镜检以及菌落的特征，可以把混杂在一起的微生物分离或鉴定出来。假若某一样品中含有大肠杆菌、硝化细菌、酵母菌、光合细菌、金黄色葡萄球菌、圆褐固氮菌、乳酸菌微生物，你如何根据上述原理或方法，从理论上一一将其中的纯种微生物分离出来呢?

自生固氮菌的分离
实验原理
农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多。将用表土制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来。
目的要求
1．初步学会从土壤中分离自生固氮菌的方法。
2．初步学会制作临时涂片的方法。
材料用具
农田的表层土壤(土壤溶液的pH不低于6.5)。
无菌研钵，无菌玻璃棒，接种环，天平，存放有载玻片的酒精缸，盖玻片，显微镜，酒精灯，火柴，镊子，恒温箱，量筒，玻璃铅笔。
灭过菌的、盛有无氮培养基的培养皿，结晶紫染液，无菌水。
方法步骤
一、接种
1．接种前，将灭过菌的、盛有无氮培养基的培养皿，放在37℃的恒温箱中一两天。随后，选取培养基上没有生长任何微生物的培养皿供实验用。
2．取10g土壤，放在无菌研钵中，注入5mL无菌水，并用无菌玻璃棒搅拌均匀，备用。
3．将接种环放在酒精灯的火焰上灭菌。略微打开培养皿盖，将接种环放在培养基边缘处冷却。然后，用接种环蘸取少许稀泥浆，轻轻地点接在培养基的表面上，共点接15～20处(注意：接种时手和衣袖不要碰到火焰，以免烧伤)。
4．接种后，轻轻地盖上培养皿盖，将培养皿放在实验桌上，并在顶盖上写明实验内容、接种人的姓名和接种日期。
二、培养
将接过种的培养皿放入恒温箱内，在28～30℃的温度下培养3～4d。
三、观察
3～4d后，取出培养皿，仔细观察培养基上稀泥浆周围长出的培养物——黏液。黏液初为无色透明，以后为乳白色，最后变成褐色，表明含有自生固氮菌。
四、镜检
1．制作临时涂片
(1)用镊子从存放载玻片的酒精缸中夹取一片载玻片，将载玻片放在酒精灯火焰的上方缓缓烘烤，以便除去上面的酒精。将载玻片放在实验桌上，待载玻片冷却后，在载玻片的中央滴一滴无菌水。
(2)在火焰旁，按照接种的要求，用灭过菌的接种环从培养基上挑取少许黏液，将黏液涂在载玻片上的水滴中，加1滴结晶紫染液，混合均匀，染色1min。
(3)另取一片载玻片作推片。将推片自液滴左侧向右侧移动，使液滴均匀地附着在两片之间。然后，将推片自右向左平稳地推移(两片之间呈30～45°夹角)，推出一层均匀的菌膜。
2．干燥
让临时涂片自然干燥(自生固氮菌的临时涂片不用加热固定，以免破坏荚膜)。
3．在显微镜下观察
依次通过低倍镜和高倍镜观察临时涂片，可以看到染成紫色的自生固氮菌。
结论
通过显微镜能够看到几种自生固氮菌？它们在形态上各有什么特点？将得出的结论写在《实验报告册》上。
讨论
1．为什么盛放无氮培养基的培养皿应当是灭过菌的？
2．假如黏液中有三种自生固氮菌，你能不能想出一种办法，将这三种细菌分离开来？

用缺氮培养基呗

---

韶关市18027428396： 如何分离和鉴定土壤中的固氮微生物 - ？
樊方单克： 自生固氮菌的分离 实验原理 农田的表层土壤中,自生固氮菌的含量比较多.将用表土制成的稀泥浆,接种到无氮培养基上进行培养.在这种情况下,只有自生固氮菌才能生长繁殖.用这种方法,可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来. 目的要求 1.初...

韶关市18027428396： 鉴别、选择培养基鉴别自生固氮菌:培养基中加入_____________,现象_________选择培养基,分离固氮微生物__________ -- ？
樊方单克：[答案] 1.碳源,水,无机盐,生长因子,维生素等(不能加氮源,因为只有固氮菌才能在无氮培养基上生长).现象黏液初为无色透明,后为乳白色,最后变成褐色. 2.分离固氮微生物也是如此,因为大多微生物在无氮的条件下无法生长. 制作无氮培养基,培...

韶关市18027428396： 微生物实验(如何从环境中分离出厌氧固氮菌) - ？
樊方单克：[答案] 自生固氮菌的分离(选做) 实验原理农田的表层土壤中,自生固氮菌的含量比较多.将用表土制成的稀泥浆,接种到无氮培养基上进行培养.在这种情况下,只有自生固氮菌才能生长繁殖.用这种方法,可以将自生固氮菌与其他细菌分离...

韶关市18027428396： 探究如何从土壤中分离自生固氮菌并计数.实验原理:农田的表层土壤中,自生固氮菌的含量比较多.将用表层土制成的稀泥浆,接种到无氮培养基上进行培养.... - ？
樊方单克：[答案] (1)倒平板应在酒精灯火焰旁进行,防止杂菌污染.(2)制备土壤稀释液.取土样10g加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中,充分摇匀.用无菌移液管吸取上清液 1mL,转至9mL无菌水的大试管中,依次稀释到107倍稀释度.为实现...

韶关市18027428396： 微生物分离方法 - ？
樊方单克： 微生物分离法是获得微生物纯培养物的一种分离方法.通过这个方法可实现一种微生物的培养,或获得一个细胞的后代.其具体方法有: 1、稀释倒平皿法.将待分离的材料作一系列稀释,取不同稀释度适量涂布于固体培养基平板上或与已熔化...

韶关市18027428396： 如何分离自生固氮菌? - ？
樊方单克： 2,不加抗生素,理由:加入抗生素后,所有细菌都会死亡 4,不加氮源,理由:自生固氮菌能利用空气中的氮来自己提供生长所需氮源,而其他细菌不可以,没有外来氮源,其他细菌会死亡,而自生固氮菌不会 5,加葡萄糖,理由:土壤中的自生固氮菌是异养生物

韶关市18027428396： 鉴别、选择培养基 - ？
樊方单克： 1.碳源,水,无机盐,生长因子,维生素等(不能加氮源,因为只有固氮菌才能在无氮培养基上生长).现象黏液初为无色透明,后为乳白色,最后变成褐色.2.分离固氮微生物也是如此,因为大多微生物在无氮的条件下无法生长.制作无氮培养基,培养一段时间后,只有固氮微生物能够存活.

韶关市18027428396： 下面是探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数的实验.实验原理:农田的表层土壤中,自生固氮菌的含量比较 - ？
樊方单克： (1)倒平板应在酒精灯火焰旁进行,防止杂菌污染. (3)按照由101~108倍稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布,每个稀释度下,无氮培养基应至少涂布3个平板,牛肉膏蛋白胨培养基涂布1个平板做对照. (5)当菌落数目稳定时,选取茵落...

韶关市18027428396： 自生固氮菌分离的原理是 - ？
樊方单克： 答案D 本题考查自生固氮菌分离的实验原理.自生固氮菌是指能在土壤中独立进行固氮的微生物,也就是说,其生命活动所需要的氮素不是依靠获取有机培养基中的氮,因此,利用这一原理,我们可以把有多种微生物的稀泥放在无氮培养基中培养,凡是生存下来的微生物也就是能进行独立生存的自生固氮微生物.

韶关市18027428396： 怎样分离圆褐固氮菌和尿素分解菌 - ？
樊方单克： 根据培养基是否需要N源分离.圆褐固氮菌不需要,而尿素分解菌需要.这就是选择培养基