碱裂解法提取质粒时,试述溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ的主要成分及作用原理。

作者&投稿:竺衬 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
~ 【答案】:(1)溶液Ⅰ的主要成分为葡萄糖和EDTA。葡萄糖能增加溶液的黏度,防止DNA受机械作用而降解。EDTA可螯合Mg2+、Ca2+等金属离子,抑制DNase对DNA的降解作用(DNase作用时需要一定的金属离子作辅助因子)。
(2)溶液Ⅱ的主要成分为氢氧化钠(NaOH)和SDS。DNA在pH5~9的溶液中是稳定的,但当pH>12或pH<3时,就会引起DNA双链之间氢键的解离而变性。溶液Ⅱ中NaOH浓度为0.2mob/L,加入溶液Ⅱ后,该系统的pH为12.0~12.6,因而促使染色体DNA与质粒的变性解离成单链。SDS是一种阴离子去垢剂,它的主要作用有:①溶解细胞膜上的脂肪与蛋白,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜;②解聚细胞中的核蛋白,使蛋白质与DNA分开;③SDS能与蛋白质结合成为SDS-蛋白质复合物,使蛋白质变性而沉淀;④SDS能抑制核酸酶的作用,防止对DNA的降解。
(3)溶液Ⅲ的主要成分为KAc(pH4.2)。用pH4.2的KAc溶液是为了调整溶液pH至中性,使变性的质粒DNA能够复性,并能稳定存在。而高盐的3mol/L醋酸钾(KAc)有利于变性的大分子染色体DNA、RNA以及SDS-蛋白质复合物凝聚而沉淀。


碱裂解法质粒提取过程中三种质粒哪种跑得快
碱裂解法质粒提取过程中三种质粒螺旋形式跑得快。同一质粒DNA其超螺旋形式的泳动速度要比开环和线状分子的泳动速度快。

经典碱裂解方法提取质粒,加入S3并离心后,上清表面残留许多漂浮物,高 ...
我一般都是把枪头伸到液面下小心吸取,剩最后一点的时候就不要了,每次只吸取400ul。或者也可以先用枪头把漂浮物粘走,然后换个新枪头吸。

SDS碱裂解法提取质粒DNA中加酚氯仿离心后加异丙醇的作用?
异丙醇可以沉淀DNA和RNA(即核酸)静置是为了增加沉淀效果

有没有用NaOH直接提取植物DNA的方法
NaOH可以用于提取植物DNA,但是一般需要配合其他物质和方法才能实现。例如碱裂解法可以用于提取质粒DNA,该方法中加入了KAc,一方面利用HAc\/Ac-缓冲体系平衡溶液二中NaOH的强碱性,使DNA复性;另一方面,K+与溶液二中的SDS(结合到蛋白质上)结合生成微溶性物质,促使体系中的蛋白质以及蛋白质所连接的基因组...

碱裂解法提取质粒后 电泳拖尾严重,是什么原因
类似于溶液方面的问题一般比较容易排除,而且比较容易改正。电泳结果拖尾大部分原因与实验操作有关,在加入碱性溶液裂解细胞后操作需要轻柔,静置时间不宜过长,剧烈震荡以及静置时间过长均可导致质粒DNA断裂,电泳结果中出现拖尾现象。有什么问题可以继续追问,欢迎交流。

碱裂解法提取质粒后 电泳拖尾严重,是什么原因?
1浓度过高无法正常电压。2提取过程因为某些因素使DNA降解

SDS碱裂解法提取质粒DNA中溶液1的成分及作用是什么?
葡萄糖增稠,使悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部;EDTA 抑制DNase的活性。这一步溶液中还可以加入RNase,不受EDTA影响,并且可以在后续步骤中被除去 溶液Ⅱ 0.2M NaOH \/ 1% SDS 破细胞的主要是碱,而不是SDS,所以才叫碱法抽提。溶液Ⅲ 3M 醋酸钾 \/ 2M 醋酸 这一步的K置换了SDS(十二...

SDS碱裂解法提取植物DNA中加醋酸铵的作用是什么,加了之后放冰上的作用...
碱裂解法提取质粒DNA的时候加醋酸铵,利用形成的HAc\/Ac-缓冲体系平衡溶液二中NaOH的强碱性,使DNA复性;另一方面,NH4+与溶液二中的SDS(结合到蛋白质上)结合生成微溶性物质,促使体系中的蛋白质以及蛋白质所连接的基因组DNA的沉降DNA呈负性,加入阳离子NH4+中和电荷,促进DNA在无水乙醇中沉淀。冰上...

用碱裂解法提取质粒DNA的,加入溶液1,容液2,容液3后各有哪些现象,原因是...
可选中1个或多个下面的关键词,搜索相关资料。也可直接点“搜索资料”搜索整个问题。 溶液 裂解 质粒 dna 搜索资料 提交回答 匿名为你推荐:特别推荐 如真有龙,它的飞行原理是什么? 古代的夏天有冰镇食品吃吗? 中国首次敲奥运之门,有多艰难? 神农架深处:为何会被列为禁区?

分析碱裂解法提取的质粒DNA电泳图,M:Puc19质粒作为Marker,泳道1、2...
和marker平齐的是完整质粒,后面的应该是开环DNA,整体挺清楚的,也没有滞后或者拖尾的现象但是1和2亮度明显低证明质粒的量比3和4少

五原县15533615311: 质粒提取的步骤 -
黎肤嘉诺: 实验一 ApaLI (178) P(BLA) ALPHA 质粒DNA的提取、 质粒DNA的提取、酶切 DNA的提取 及琼脂糖凝胶电泳 ApaLI (2367) EcoRI (397) AvaI (413)XmaI (413) SmaI (415) APr pUC19 BamHI (418) PstI (440)HindIII (448) P(LAC) ORI 2686 bp ApaLI ...

五原县15533615311: 质粒的提取原理 -
黎肤嘉诺: 质粒提取是指去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒. 目录 一、质粒提取原理 质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA,是进行DNA重组的常用载体.作为一个具有自身复制起点的复制单位...

五原县15533615311: dna提取试验中用KAc的作用 -
黎肤嘉诺: 碱裂解法提取质粒DNA的时候,溶液三中用的是KAc,一方面利用HAc/Ac-缓冲体系平衡溶液二中NaOH的强碱性,使DNA复性;另一方面,K+与溶液二中的SDS(结合到蛋白质上)结合生成微溶性物质,促使体系中的蛋白质以及蛋白质所连接的基因组DNA的沉降.另外,如楼上所说,pH4.8的NaAc溶液常用于配合异丙醇沉淀DNA.

五原县15533615311: 大肠杆菌质粒DNA如何提取?
黎肤嘉诺:碱裂解法:此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析.方法如下: 1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基. 2、37℃振荡培养过夜. 3、取1.5ml菌体于Ep管,以4000rpm离心3...

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