荧光光度法原理
基本原理
由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中,激发样品中的荧光物质发出荧光,荧光经过滤过和反射后,被光电倍增管所接受,然后以图或数字的形式显示出来。 物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态, 这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出,从而产生荧光.
不同物质由于分子结构的不同,其激发态能级的分布具有各自不同的特征,这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱;,因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。
在溶液中,当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系,即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析,与紫外-可见分光光度法类似,荧光分析通常也采用标准曲线法进行。
基本结构
1. 光源:
为高压汞蒸气灯或氙弧灯,后者能发射出强度较大的连续光谱,且在300nm~400nm 范围内强度几乎相等,故较常用。
2.激发单色器:
置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器,筛选出特定的激发光谱。
3.发射单色器:
置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器,常采用光栅为单色器。筛选出特定的发射光谱。
4. 样品室:
通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。测量液体时,光源与检测器成直角安排;测量固体时,光源与检测器成锐角安排。
5. 检测器:
一般用光电管或光电倍增管作检测器。可将光信号放大并转为电信号。
荧光分光光度计工作原理:
由光源氙弧灯发出的光通过切光器使其变成断续之光以及激发光单色器变成单色光后,此光即为荧光物质的激发光,被测的荧光物质在激发光照射下所发出的荧光,经过单色器变成单色荧光后照射于测样品用的光电倍增管上,由其所发生的光电流经过放大器放大输至记录仪,激发光单色器和荧光单色器的光栅均由电动机带动的凸轮所控制,当测绘荧光发射光谱时,将激发光单色器的光栅,固定在最适当的激发光波长处,而让荧光单色器凸轮转动,将各波长的荧光强度讯号输出至记录仪上,所记录的光谱即发射光谱(emission spectrum),简称荧光光谱。
当测绘荧光激发光谱时,将荧光单色器的光栅固定在最适当的荧光波长处,只让激发光单色口的凸轮转动,将各波长的激发光的强度讯号输出至记录仪,所记录的光谱即激发光谱(emission spectrum)。
当进行样品溶液的定量分析时,将激发光单色器固定在所选择的激发光波长处,将荧光单色器调节至所选择的荧光波长处,由记录仪得出的信号是样品溶液的荧光强度。
而荧光分光光度计是给与一个激发波长后,到达激发态,再发射光,所以检测的是物质发射的光,检测信号与发射器不在一条线上。
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简述原子吸收分光光度法的基本原理
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分光光度法原理
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分光光度计原理
分光光度法原理是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析的方法。它具有灵敏度高、操作简便、快速等优点,是生物化学实验中最常用的实验方法。许多物质的测定都采用分光光度法。在分光光度计中,将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时,便可得到...
分光光度法的基本原理是什么
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利津县19673493371: 荧光分光光度法 - 搜狗百科?
长殃美百:[答案] 原子荧光光谱法是通过测量待测元素的原子蒸气在辐射能激发下产生的荧光发射强度,来确定待测元素含量的方法.
利津县19673493371: 有谁知道荧光分光光度计的原理??
长殃美百: 荧光分光光度计工作原理: 由光源氙弧灯发出的光通过切光器使其变成断续之光以及激发光单色器变成单色光后,此光即为荧光物质的激发光,被测的荧光物质在激发光照射下所发出的荧光,经过单色器变成单色荧光后照射于测样品用的光电倍...
利津县19673493371: 荧光分光光度计原理及结构? - ?
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利津县19673493371: 原子荧光光度计原理 - ?
长殃美百: 原子荧光光谱法是通过测量待测元素的原子蒸气在辐射能激发下产生的荧光发射强度,来确定待测元素含量的方法.
利津县19673493371: 从原理和仪器上比较紫外 -- 可见分光光度法与荧光分光光度法的异同点 - ?
长殃美百: 1.原理 相同点:吸光光度法和荧光分析法都是分子光谱. 不同点:吸光光度法是由分子对辐射能选择性吸收由基态或较低能级跃迁到较高能级产生的分子光谱,是分子吸收光谱;而荧光分析法是由分子对辐射能选择性吸收由基态跃迁到单重激...
利津县19673493371: 荧光光度法和分光光度法 - ?
长殃美百: 实际上分光光度计的概念叫大,分光光度计还有紫外分光光度计,红外分光光度计等等.其主要是根据能量跃迁原理来区分.例如紫外分光光度计是测量物质经过紫外激发后物质可以吸收紫外光多少,测量的值是通过物质的光,检测信号与发射信号在一条直线上.而荧光分光光度计是给与一个激发波长后,到达激发态,再发射光,所以检测的是物质发射的光,检测信号与发射器不在一条线上.例如蛋白质,因为里面有酪氨酸、色氨酸的发色基团,一般的联苯结构,也就是可以形成ππ共轭体系的物质都可发射荧光.如果物质自身不带有荧光,则可以加入荧光探针.
利津县19673493371: 试说明分子荧光法的基本原理和影响因素 - ?
长殃美百: 原理:当一些物质被光照射后,物质的分子吸收光以后,便以基态跃迁到激发态,成为激发分子,然后通过相互碰撞或和其它溶剂分子碰撞等去活化的过程而消耗了能量,回到第一激发态的最低振动能级,这种跃迁称为无辐射跃迁,它不会发光...
利津县19673493371: 紫外可见分光光度法 - ?
长殃美百: 此方法的原理是根据被测物对特定波长处光吸收的多少来计算其浓度(含量)的,使用前需要教正仪器,避免测量是产生误差. 当盖上盖子时,样池中没有样品,所以光应该是完全透过到达另一端被接收,其能量没有减失,所以仪器应该显示100%,当盖子打开时光就不能到达接收端,所以仪器应该显示0