PCR中加各种药品的原因根据是什么？比如镁离子有什么用~

pcr到底要不要加镁离子，纠结~

PCR反应需要加镁离子，并且镁离子浓度的总量应该比dNTPs的浓度高，常用1.5mmol/L。
镁离子是加在PCR反应的缓冲液中的，成分是最复杂的，除水外一般包括四个有效成分：
1、缓冲体系，一般使用HEPES或MOPS缓冲体系；
2、一价阳离子，一般采用钾离子，但在特殊情况下也可使用铵根离子；
3、二价阳离子，即镁离子，根据反应体系确定，除特殊情况外不需调整；
4、辅助成分，常见的有DMSO、甘油等，主要用来保持酶的活性和帮助DNA解除缠绕结构。
缓冲液的目的是提供合适的酸碱度与某些离子，而PCR反应五要素是：引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。

扩展资料：标准的PCR过程：

1、DNA变性
在90℃-96℃下，双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA；

2、退火
在60℃-65℃下，系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链；

3、延伸
在70℃-75℃下，在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物的3′端开始以从5′→3′端的方向延伸，合成与模板互补的DNA链。
每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量即增加一倍。现在有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度。
参考资料：百度百科-聚合酶链式反应

镁离子在酶催化过程中，结合到酶－底物结合体上，从而使催化反应的活化能更加降低。使得反应能够进行。

一、引物（上、下游）
PCR反应中的寡核廿酸引物至少应含有玲个与DNA模板序列完全互补的核酸.长达20一24个核普酸，这样才能保证扩增反应的特异性。低温冷却液循环泵寡核昔酸引物在NCR反应中的浓度通常是。.t一1.OlumWL,这一浓度足以完成30个循环的扩增反应。浓度过高会引起模板与引物的错配，影响反应的待异性，同时使形成引物二聚体的概率增大，而且非特异产物和引物二聚体可与摸板竞争使用酶、引物和dNTP等，从而导致产量的下降。反之，若寡核普酸引物浓度过低，会导致PCR效率的降低。
二、DNA模板
DNA摸板亦称为靶序列。它既可以是单链DNA.也可以是双链DNA,闭环DNA校板的扩增效率略低于线状DNA，因此用做模板时最好先将其线状化。DNA模板不能混有蛋白酶、核酸酶、DNA聚合醉抑制剂以及能与DNA结合的蛋白质等。在一定范围内、PCR的产物随DNA模板浓度的升高而显著增加，但模板浓度过高会导致反应的非特异性增加。为保证反应的特异性，基因组DNA做模板时可用lmol左右，质位DNA做模板时用10ng左右。
三、缓冲液
BUFFER 作用主要是稳定PCR过程中的PH。用于PCR的标准级冲液的主要成分，其中二价镁离子的存在与否至关重要。镁离子浓度可直接关系DNA聚合敌的活性和DNA双链的解链温度，因此对反应的特异性及产证有显著影响。镁离子浓度过低会使DNA聚合酶活性降低、PCR产率下降;镁离子浓度过高则影响PCR反应的特异性。钱离子的最佳作用浓度为1.5一2.0~，肠由于镁离子可与缓冲液中的鳌合剂(如EDTA)以及带负电荷的丛团(如磷酸根)结合.因此反应中游离的镁离子浓度取决于反应液中dN]P和EDTA的浓度。
四、DNA聚合酶
最早的PCR是采用大肠杆菌DNA聚合酶.的Kl}片段催化退火的寡核昔酸引物在DNA模板上进行延仲反应。由于该酶会在DNA变性的拟度下失活.所以在每一轮合成反应中都必须新加人一份酶。这种反应在扩增小片段DN州《200bp)时效果尚可，但对于扩增更长的目的DNA则结果不够理想。同时这种反应的产率通常较低，产物的大小也不均一。耐热DNA聚合酶的应用使这些问题迎刃而解。耐热DNA聚合酶在951C下持续温育仍能保持活性，因此寡核节酸引物的退火和延仲可以在更高的温度下进行，使引物与校板的误配大大减少，扩增反应的特异性和产率大大提高，而更长的扩增产物也得以生成。现已发现多种耐热DNA聚合酶，其共同特点是在高温下仍保持一定的酶活性甲但其他性能有一定的差别。
五、Mg离子

Mg离子的作用主要是 dNTP-Mg 与核酸骨架相互作用 并能影响Polymerase的活性，一般的情况下 Mg的浓度在0.5-5mM之间调整，同样要记住的是在调整了dNTPs的浓度后要相应的调整Mg离子的浓度。Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。

PCR需要DNA聚合酶，而DNA聚合酶的活性是需要镁离子的。很多的酶活性都需要不同的金属离子的辅助。

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长春市13596729484： 通常情况下,PCR体系中各试剂加入量的依据是什么? - ？
由堂盐酸：[答案] 依据经验吧 25~50mM KCl——促进引物退火,>50mM会抑制Taq酶的活性. 10~50mM Tris•Cl(pH 8.4)——维持 Taq 酶作用... 100μg/ml牛血清白蛋白 (BSA) ——对酶有一定的保护性 这些都是多次实验的基础上得出的 当然,不同类型的pcr需要的浓...

长春市13596729484： 为啥pcr中要加入全部引物而不是任意一种引物呢? - ？
由堂盐酸： 看实验目的,扩增某一特定片段就是用一对特异性引物,如果同时扩增多个片段,就是用多对引物的多重PCR,等等还有其他很多种PCR的方法.

长春市13596729484： pcr技术中,除酶外还需要加入引物,其原因是 - ？
由堂盐酸： 引物引导合成RNA一条链

长春市13596729484： 为什么PCR中加Mgcl2溶液 - ？
由堂盐酸： Mgcl2的作用主要是促进核酸骨架的形成,影响聚合酶的4活性.Mgcl2浓度过高会降低扩增特异性,浓度过低影响扩增产量.

长春市13596729484： 为什么PCR中加Mgcl2溶液?它的作用是什么？
由堂盐酸： 主要是Mg离子,Mg与dNTP以及DNA模板结合形成复合体,只有这种复合体才能被DNA聚合酶识别

长春市13596729484： PCR扩增的过程中分别在何时加入何种试剂?不要复制网上那些过程 我只要试剂加入的部分 麻烦高手给写写 谢 - ？
由堂盐酸： 说起来麻烦做起来不是很麻烦,我们是算好了,照着加的~ 真不愿意回想啊...:{ 水,buffer,dNTP,Taq酶,引物,DNA...应该是这些了吧...加入后就PCR了~ 酶是到用的时候才拿出来的,加完放回去,防变性 只是做过,不是高手~

长春市13596729484： PCR技术扩增DNA的过程中,需要加入足量? - ？
由堂盐酸： 足量引物,足量脱氧核糖核苷酸,足量taqDNA连接酶

长春市13596729484： PCR的原理是什么,它有什么用途? - ？
由堂盐酸： PCR技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品DNA,然后才进行自动热循环,最后进行产物鉴定与分析.引物设计与合成目前只能在少数技术力量较强的研究院、所进行,临床应用只需购买PCR检测试剂盒就可开展工作,PCR自动热循环...

长春市13596729484： 请问PCR体系中加二甲基亚砜的作用是什么?？
由堂盐酸： 加入DMSO利于减少DNA的二级结构,使G、C含量高的模板易于完全变性,在反应体系中加入DMSO使PCR产物直接测序更易进行.

长春市13596729484： pcr缓冲液中各成分的作用是什么?是缓冲液中各成分的作用,不是缓冲液的作用, - ？
由堂盐酸：[答案] 基本常识 PCR包括7种基本成分:模板DNA、特异性引物、热稳定DNA聚合酶、脱氧核苷三磷酸(dNTP)、二价阳离子、缓冲液及一价阳离子. 其中缓冲液:一般使用Tris-Cl缓冲液,标准的为10mmol/L,并将其调节到8.8.8之间 配制方法(二种): ...