粗蛋白的定量测定——微量凯氏定氮法实验中的思考题
《蛋白质的定量测定——微量凯氏定氮法》
实验原理：
生物材料的含氮量测定在生物化学研究中具有一定的意义，如蛋白质的含氮量约为16％，测出含氮量则可推知蛋白含量。生物材料总氮量的测定，通常采用微量凯氏定氮法。凯氏定氮法由于具有测定准确度高，可测定各种不同形态样品等两大优点，因而被公认为是测定食品、饲料、种子、生物制品、药品中蛋白质含量的标准分析方法。其原理如下：
1. 消化：有机物与浓硫酸供热，使有机氮全部转化为无机氮——硫酸铵。为加快反应，添加硫酸铜和硫酸钾的混合物；前者为催化剂，后者可提高硫酸沸点。这一步约需30min至1h，视样品的性质而定。
2. 加碱蒸馏：硫酸铵与NaOH(浓)作用生成(NH4)OH, 加热后生成NH3, 通过蒸馏导入过量酸中和生成NH4Cl而被吸收。（硼酸）
3. 滴定：用过量标准HCl吸收NH3，剩余的酸可用标准NaOH滴定，由所用HCl摩尔数减去滴定耗去的NaOH摩尔数，即为被吸收的NH3摩尔数。此法为回滴法，采用甲基红为指示剂。HCl＋NaOHNaCl +H2O
本法适用于0.2 ~ 2.0 mg的氮量测定。
参考：《蛋白质的定量测定—微量凯氏定氮法》：http://wenku.baidu.com/view/7521c01ec281e53a5802ff71.html。
凯氏定氮法的优点：可用于所有食品的蛋白质分析中；操作相对比较简单；实验费用较低；结果准确，是一种测定蛋白质的经典方法；用改进方法（微量凯氏定氮法）可测定样品中微量的蛋白质。
缺点：最终测定的是总有机氮，而不只是蛋白质氮；实验时间太长(至少需要2h才能完成)；精度差，精度低于双缩脲法；所用试剂有腐蚀性。
分光光度法的优点：灵敏度高；仪器设备简单，操作简便、快速；应用广泛。
缺点是：准确度相对不高；有的检测不可用，有限制性。
蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，并换算成蛋白质含量。
扩展资料：
在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收，再以标准盐酸滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。
物质与光作用，具有选择吸收的特性。有色物质的颜色是该物质与光作用产生的。即有色溶液所呈现的颜色是由于溶液中的物质对光的选择性吸收所致。
由于不同的物质其分子结构不同，对不同波长光的吸收能力也不同，因此具有特征结构的结构集团，存在选择吸收特性的最大实收波长，形成最大吸收峰，而产生特有的吸收光谱。
参考资料来源：百度百科——凯氏定氮法
参考资料来源：百度百科——分光光度法
2%的硼酸溶液：吸收释放的氧气
2%硼酸溶液中的指示剂：指示滴定颜色反应
问题二：对不起
1,NaOH与硫酸铵反应,释放出氨气
(NH4)2SO4+2NaOH＝2NH3+2H2O+Na2SO4
硼酸用于吸收氨气
2NH3+4H3BO3＝(NH4)2B4O7+5H2O
指示剂用于判断滴定时的颜色终点
2,做空白及硫酸铵测试,可以先判断仪器的准确度及回收率.确保结果的准确.
如何选择合适的蛋白含量测定方法
基于dford方法的QuickStartBradford和Bio_Rad蛋白测定灵敏度高，可以兼容糖、巯基乙醇、DTT等。而对于去污剂和NaOH这两种干扰Bradford测定的物质，DC蛋白测定却可以兼容。如果蛋白是在loadingbuffer中，准备跑1D或2D电泳，或者刚从细胞裂解液中抽提出来，需要定量，那么RCDC蛋白测定更合适。
常用蛋白质氮定量测定方法它有哪些
测定蛋白质最基本的方法是定氮法,即先测定样品中的总氮量,再由总氮量计算出样品中蛋白质的含量.蛋白质含量测定最常用的方法是凯氏定氮法,它是测定总有机氮的最准确和操作较简便的方法之一,在国内外应用普遍.此外,双缩脉法、染料结合法、酚试剂法等也常用于蛋白质含量测定,由于方法简便快速,故多用于...
尿检蛋白定量正常值是多少
正常人每天尿中蛋白质一般为40-80毫克。正常人尿常规检测24小时尿蛋白定量范围小于150mg\/24小时。尿蛋白定量是指准确测定24h内全部尿液中的蛋白质浓度。尿蛋白定量测定有助于泌尿系统疾病的诊断和鉴别诊断，了解肾脏病变的程度。留尿时要求适量添加防腐剂。
蛋白尿检测方法有什么
或出现磺基柳酸法和加热醋酸法的假阴性反应。当尿蛋白仅为一些特殊蛋白质时，蛋白试纸法和磺基柳酸法均不敏感。因此，在进行尿蛋白定性时，应综合各种因素，具体情况具体分析，选择适宜的方法。尽管定性试验比较方便，但有时难以反应蛋白尿的实际情况，有条件时，最好进行定量检查。第二，尿蛋白定量测定：...
免疫球蛋白定量的测定方法是( )。
【答案】：A 免疫球蛋白定量测定常用的方法有单向琼脂免疫扩散法和免疫比浊法，其中免疫比浊法分为速率散射比浊法和透射免疫比浊法。
蛋白质定量测定
bradford检测？检测反应是与蛋白量直接有关，不是与浓度直接相关。但是横坐标可以的用浓度检测，就是你要自己注意每次加入的量一致，这样才好换算。
蛋白质含量测定考马斯亮蓝
实验原理：考马斯亮蓝(Coomassie Brilliant Blue)法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质―染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与...
什么是24小时尿蛋白定量
其实这对于发现疾病很有帮助，所以很多人不禁要问，不是有尿检吗？这种24小时尿蛋白定量采集的方法和意义是什么？正常情况下，人体尿液中可排出极少量的蛋白质，这是通常的常规方法无法检测出来的，如尿蛋白定性试验，需要通过24小时尿蛋白定量测定。尿蛋白排泄过多说明肾功能有问题。请参考尿常规检查部分...
蛋白定量检测方法--双缩脲法,即Biuret法,在什么时候,由谁提出的?
金标法C-反应蛋白全血定量检测方法 发布时间:02年[$mon 原理：ycoCard CRP是一种固相的夹心法免疫试验。稀释后的样品加于卡片上6个试验孔中的1孔，标本流过反应膜，CRP分子即被固定于膜上的CRP特异性单克隆抗体所捕获，CRP将和随后加入的胶体金抗体结合物相结合，发生双抗体夹心法的反应。未结合的...
教你如何做24小时尿蛋白定量检查
如果在这24小时之内解大便，亦强调先解小便收集，然后大解。小量尿液亦不要遗漏。尿量收集不齐全，尿蛋白定量的计算就不准确。检测前要先用量杯量总尿量，然后搅匀，取出约100毫升左右的尿液，装进另一个小容器（可用矿泉水瓶）中，在两小时内带到医院，并在化验单上把尿量写上去。检验科会测定小容器...
金饼益母：[答案] 1,NaOH与硫酸铵反应,释放出氨气 (NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO4 硼酸用于吸收氨气 2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O 指示剂用于判断滴定时的颜色终点 2,做空白及硫酸铵测试,可以先判断仪器的准确度及回收率.确保结果的...
新罗区15721059636： 测蛋白质的含量 - ？
金饼益母： 蛋白质含量测定法,是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一.目前常用的有四种古老的经典方法,即定氮法,双缩尿法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法. 另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法,即...
新罗区15721059636： 为什么凯氏定氮法测定蛋白质的含量称之为粗蛋白含量 - ？
金饼益母： 由于一般蛋白质中含氮量约为16%,故在概略分析中,常用凯氏法(Kjeldahl)测出总氮量,再乘以系数6.25来求得.实际上,它是食品、饲料中含氮化合物的总称,既包括真蛋白又包括非蛋白含氮化合物,后者又可能包括游离氨基酸、嘌呤、吡啶、尿素、硝酸盐和氨等.此外,不同蛋白质的氨基酸组成不同,其氮含量不同,总氮量换算成蛋白质的系数也不同,如小麦和多数谷物的换算系数为5.80,水稻5.95,大豆5.7,多数食用豆和坚果5.3,牛奶6.38等.综上所述粗蛋白只是一个粗略的概念,而凯氏定氮法并不精准,只能粗略推算
新罗区15721059636： 为什么凯氏定氮法测定出的食品中蛋白质含量为粗蛋白含量?测定时还要注意什么问题? - ？
金饼益母：[答案] 由于一般蛋白质中含氮量约为16%,故在概略分析中,常用凯氏法(Kjeldahl)测出总氮量,再乘以系数6.25来求得.实际上,它是食品、饲料中含氮化合物的总称,既包括真蛋白又包括非蛋白含氮化合物,后者又可能包括游离氨基酸、嘌...
新罗区15721059636： 凯氏定氮法计算公式 ？
金饼益母： 凯氏定氮法计算公式:X=[(V1-V2)*N*0.014/(m*10)]*F*100%.式中,X表示样品中蛋白质的百分含量,V1表示样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积,V2表示试剂空白消耗硫...
新罗区15721059636： 油厂棉粕蛋白化验蛋白的微量做法怎么做 - ？
金饼益母： 微量做法就是凯氏半微量定氮法,具体操作步骤如下:饲料粗蛋白的检测方法(凯氏半微量定氮法)1 原理凯氏法测定试样含氮量,即在催化剂存在下,用浓硫酸破坏有机物,使含氮物转...
新罗区15721059636： 凯氏定氮法测蛋白质1.为什么凯氏定氮法测出的食品中蛋白质含量为粗蛋白质的含量?2.试述食品中蛋白质测定样品消化的原理及加入各试剂的作用? - ？
金饼益母：[答案] 凯氏定氮法通过测出样品中的总含氮量再乘以相应的蛋白质系数而求出蛋白质的含量,此法的结果称为粗蛋白质含量:由于样品中含有少量非蛋白质含氮化合物,如核酸、生物碱、含氮类脂、卟啉以及含氮色素等非蛋白质的含氮化...
新罗区15721059636： 国产凯式定氮仪如何测定蛋白质含量? - ？
金饼益母： 现在很多产品都已经是国产化,凯式定氮仪原理:有机含氮化合物与浓硫酸共热消化,氮转化为氨,再与硫酸结合成硫酸铵.硫酸铵与强碱反应,放出氨.将氨蒸馏到过量的标准无机溶液中,再用标准碱溶液进行滴定.根据测得的氨量,计算样品的...
