构建cDNA文库是否需要酶切
反转录酶：以mRNA为模板反转录合成DNA。
限制性内切酶：酶切目的基因和载体，使其产生相同的粘性末端。
DNA连接酶：连接目的基因和载体。
可以，影响很小。
必须要酶切，切割的是质粒！夜深了，手机打字也慢，明天中午，我再给你补充详细解释吧。——————
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是的，基因组文库需要酶切，cDNA文库不需要酶切，但这指的是目的基因。不管哪一种，目的基因要想与质粒连接，都是需要酶切的，因为必须把质粒切开，才能连接目的基因。
基因组文库，是直接从染色体DNA分子上获取目的基因，肯定需要限制酶进行特异性切割。
cDNA文库构建，是用细胞内总的mRNA进行反转录，每个mRNA上只有一个基因，并且不含有内含子（这也是cDNA文库的优点所在）。反转录获得的cDNA不需要酶切（因为只含有一个基因），两端适当处理，即可与切开的质粒DNA连接，再进行转化即可。cDNA不能切，切了就没用了。一般，一个细胞内有上千种mRNA，所以反转录得到的cDNA也是上千种，都不一样，但每个只含有一个基因，cDNA是比较短的。一个cDNA就可以转化一个受体菌，形成一个菌落，这个菌落就只含有这种cDNA了。
具体，可以百度一下“cDNA文库”，百科里介绍的有。大学王镜岩《生物化学》教材里介绍的也有。
构建cDNA文库不需要酶切成随机的短片段，因为cDNA长度不大，可以克隆到像质粒那样的载体上。
mRNA逆转录成cDNA，需要加上adaptor，然后用PCR扩增该文库，这样的文库已经可以使用。但为了方便使用，adaptor上设计了的酶切位点，可非常方便地将cDNA克隆到载体上做成表达文库。
mRNA是一个很大的群体，所以得到的cDNA也是一个大群体，而且一个mRNA对应一个cDNA。另外，逆转录后是单链的DNA，PCR后才是双链的。
构建cdna文库时,如何保证双链cdna与表达载体以正确的方向连接?
构建cDNA文库时，需要将双链cDNA与表达载体连接起来，以便将目标基因表达出来。为了保证双链cDNA与表达载体以正确的方向连接，可以采取以下措施：选择合适的限制性内切酶：在连接双链cDNA和表达载体时，需要使用限制性内切酶进行切割。选择合适的限制性内切酶可以保证连接的方向正确。选择合适的连接方式：连接双链...
cDNA文库必须满足什么条件?其构建包括哪些步骤?
条件：1 、要使用mRNA经过反转录PCR产生cDNA.2 、要进一步获得cDNA全长3 、加适当接头,连接到适当的载体内.4 、转化受体细胞,构建为cDNA文库.基本步骤包括：RNA 的提取(例如异硫氰酸胍法,盐酸胍—有机溶剂法,热酚法...
组建cDNA文库的组建有哪些步骤?
将提取的总RNA在寡聚脱氧核苷酸[oligo（dT）]纤维素中进行亲和层析，分离获得mRNA。（2）cDNA第一链的合成：所有cDNA第一链的合成方法都要用依赖于RNA的DNA聚合酶（反转录酶）来催化反应。与cDNA第一链合成最常用的引物是与真核细胞mRNA分子3′端poly（A）互补的1218个核苷酸长的oligo（dT），沿模板...
为何要建立CDNA文库而不是DNA文库
这是从染色体DNA为出发材料直接克隆目的基因的一个主要困难.高等生物一般具有105种左右不同的基因,但在一定时间阶段的单个细胞或个体中,都尽有15%左右的基因得以表达,产生约15000种不同的mRNA分子.可见,由mRNA出发的cDNA克隆,其复杂程度要比直接从基因组克隆简单得多.参考资料：百度百科 ...
在什么情况下需要构建cDNA?
连接效率高低直接关系到文库构建是否成功，更要注意的是文库连接与一般的片段克隆的连接不一样。一般的片段克隆连接是固定长度的载体与固定长度的目的DNA连接，而文库连接是固定长度的载体与非固定长度的目的DNA连接，目的基因cDNA长的有10kb以上，短的只有500bp或更短。一系列长度不等的cDNA与载体在一起连接...
如何鉴定cDNA文库是否构建成功?通常都是用什么方法鉴定的?
1 直接筛选： 1 利用抗性基因标记 2 营养标记 3 阿拉法半乳糖苷酶标记（插入突变）2 菌落原位杂交杂交（质粒文库）\/噬菌斑原位杂交（噬菌体文库），然后用southern杂交检测阳性的位点 3 对于表达文库的鉴定，可以通过1表形分析，2利用免疫学探针，3 产物生物功能来判断 ...
何谓cDNA基因文库?利用cDNA基因文库钓取目的基因有何优越性?
【答案】：cDNA基因文库是指在逆转录酶作用下，以mRNA为模板形成它的互补DNA(complementary DNA，简称cDNA)单链，然后进一步形成双链DNA。将这种双链DNA同适宜的载体(例如质粒)连接成为重组DNA。导入受体细胞(例如细菌)并进行克隆，就成为cDNA基因文库。由于构建cDNA基因文库时，采用的是总mRNA，所以该基因...
如何构建CDNA文库?
cDNA文库的构建分为六个阶段：阶段1：反转录酶催化合成cDNA第一链 阶段2：cDNA第二链的合成 阶段3：cDNA的甲基化 阶段4：接头或衔接子的连接 阶段5：Sepharose CL-4B凝胶过滤法分离cDNA 阶段6：cDNA与λ噬菌体臂的连接
cDNA文库的构建一般分为哪四步?
【答案】：cDNA文库的构建一般分为以下四步：(1)细胞总RNA的提取和mRNA的分离;(2)cDNA第一条链的合成;(3)cDNA第二条链的合成;(4)双链DNA克隆进质粒或噬菌体载体，并导入宿主中繁殖。
何谓基因文库?何谓cDNA文库,有何优点?建库对于分离目的基因有何重要作...
【答案】：基因文库是指包含某一生物基因组DNA片段的全部克隆。即将整个基因组DNA切成片段，并用合适的载体将全部DNA片段进行克隆。文库中每一个克隆只含基因组中某一特定的DNA片段。cDNA文库是指包含某一生物mRNA的全部cDNA克隆。cDNA文库中的每一个克隆只含一种mRNA信息。cDNA文库的优点：①文库中只含...
程任幼泻： 需要表达和研究表达的mRNA时
海沧区18293864063： 构建cDNA文库时都要用限制性内切酶么?用的限制性内切酶都一样吗 - ？
程任幼泻： 要用各种各样的内切酶,达到最大程度上覆盖整个基因库
海沧区18293864063： 什么是cDNA文库?它和基因文库的差别有哪些 - ？
程任幼泻： cDNA文库: 以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体(常用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细...
海沧区18293864063： 构建基因组文库时为什么要进行酶切 - ？
程任幼泻： 构建基因组文库,必须在基因组DNA两端制造合适的粘性末端(而酶切是制造匹配粘性末端常用的方法),再与相应载体连接,转化相应菌株,然后筛选.
海沧区18293864063： 构建CDNA文库所需的酶有几种?是那些?谢谢(高中生)说的通俗点~ - ？
程任幼泻： 反转录酶:以mRNA为模板反转录合成DNA. 限制性内切酶:酶切目的基因和载体,使其产生相同的粘性末端. DNA连接酶:连接目的基因和载体.
海沧区18293864063： 构建CDNA文库所需的酶有几种?是那些?谢谢(高中生)说的通俗点~ - ？
程任幼泻：[答案] 反转录酶:以mRNA为模板反转录合成DNA. 限制性内切酶:酶切目的基因和载体,使其产生相同的粘性末端. DNA连接酶:连接目的基因和载体.
海沧区18293864063： cDNA文库必须满足什么条件?其构建包括哪些步骤? - ？
程任幼泻： 条件:1 、要使用mRNA经过反转录PCR产生cDNA.2 、要进一步获得cDNA全长3 、加适当接头,连接到适当的载体内.4 、转化受体细胞,构建为cDNA文库. 基本步骤包括:RNA 的提取(例如异硫氰酸胍法,盐酸胍—有机溶剂法,热酚...
海沧区18293864063： 从基因组文库中获取的目的基因是否需要限制酶? - ？
程任幼泻： 如果文库已经构建好了就不需要限制酶了,直接用引物扩增就可以;当然,如果想再将该基因导入受体细胞的过程中需要构建表达载体,这就需要限制酶了.
海沧区18293864063： 高三生物 从基因文库中提取基因需要限制酶吗? - ？
程任幼泻： 现在的生物已经这么难了吗……o(╯□╰)o 这道题 的A肯定是对的.选项B有争议.是这样的,一般从文库中调取基因,不会直接用限制酶酶切,而是首先需要pcr扩增,而后连接到所需的载体上.当然,如果酶切位点合适,质粒又充足,直接酶切调取也是可以的(几率非常小).其次,真核生物的基因都有外显子和内含子,一般需要将内含子去除.而基因文库也不知道是DNA文库还是cDNA文库,如果是cDNA文库,就可以直接进行调取,不然就要先提取mRNA然后反转录得到cDNA,保证是没有内含子的基因序列,才能表达.
海沧区18293864063： 基因组文库+CDNA文库=基因文库吗? - ？
程任幼泻： 基因文库:一个生物体的基因组DNA用限制性内切酶部分酶切后,将酶切片段插入到载体DNA分子中,所有这些插入了基因组DNA片段的载体分子的集合体,将包含这个生物体的整个基因组,也就是构成了这个生物体的基因文库 cDNA文库:以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与适当的载体(常用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库 基因组文库:是包含所有基因组序列即不论基因还是非基因序列都有的文库 基因组文库+CDNA文库=基因文库是不对的
