质粒是如何把剪切好的DNA运输走的?
质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位,包括真核生物的细胞器和细菌细胞中染色体以外的脱氧核糖核酸(DNA)分子。现在习惯上用来专指细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体以外的DNA分子。在基因工程中质粒常被用做基因的载体。许多细菌除了染色体外,还有大量很小的环状DNA分子,这就是质粒(plasmid)(补充:部分质粒为RNA)。质粒上常有抗生素的抗性基因,例如,四环素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些质粒称为附加体(episome),这类质粒能够整合进细菌的染色体,也能从整合位置上切离下来成为游离于染色体外的DNA分子。 目前,已发现有质粒的细菌有几百种,已知的绝大多数的细菌质粒都是闭合环状DNA分子(简称cccDNA)。细菌质粒的相对分子质量一般较小,约为细菌染色体的0.5%~3%。根据相对分子质量的大小,大致上可以把质粒分成大小两类:较大一类的相对分子质量是40×106以上,较小一类的相对分子质量是10×106以下(少数质粒的相对分子质量介于两者之间)。每个细胞中的质粒数主要决定于质粒本身的复制特性。按照复制性质,可以把质粒分为两类:一类是严紧型质粒,当细胞染色体复制一次时,质粒也复制一次,每个细胞内只有1~2个质粒;另一类是松弛型质粒,当染色体复制停止后仍然能继续复制,每一个细胞内一般有20个左右质粒。一般分子量较大的质粒属严紧型。分子量较小的质粒属松弛型。质粒的复制有时和它们的宿主细胞有关,某些质粒在大肠杆菌内的复制属严紧型,而在变形杆菌内则属松弛型。 在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。人工构建的质粒可以集多种有用的特征于一体,如含多种单一酶切位点、抗生素耐药性等。常用的人工质粒运载体有pBR322、pSC101。pBR322含有抗四环素基因(Tcr)和抗氨苄青霉素基因(Apr),并含有5种内切酶的单一切点。如果将DNA片段插入EcoRI切点,不会影响两个抗生素基因的表达。但是如果将DNA片段插入到Hind III、Bam H I 或 Sal I切点,就会使抗四环素基因失活。这时,含有DNA插入片段的pBR322将使宿主细菌抗氨苄青霉素,但对四环素敏感。没有DNA插入片段的pBR322会使宿主细菌既抗氨苄青霉素又抗四环素,而没有pBR322质粒的细菌将对氨苄青霉素和四环素都敏感。pSC101与pBR322相似,只是没有抗氨苄青霉素基因和PstI切点。质粒运载体的最大插入片段约为10 kb(kb表示为千碱基对)。
分离质粒时,可以将质粒去得很干净。方法为:先用TE之类的试剂将菌液悬浮起来,再用NaOH和SDS将菌液裂解(起裂解作用的主要是NaOH,但此时,SDS可以与蛋白很好的结合)。第三步,加入酸中合第二步中的碱,并且将SDS沉淀下来,同时,SDS和蛋白也一起沉淀下来,而基因组上面有很多的蛋白,这样基因组就一起沉淀下来,上清只有质粒了。上清的质粒用乙醇沉淀,这样得到的质粒基本没有基因组。而分离基因组时,一般也是用SDS裂解(想对于碱裂解,SDS比较温和)。同时还用蛋白酶K处理,将基因组上的蛋白降解掉,这样就得到了基因组DNA。再用乙醇沉淀,去掉其他的东东。如果菌中含有质粒,质粒也一起提出来,无法去掉。至于后来的试剂盒,如柱式,前其原理一样,不过最后一步纯度是用柱子的方法。
质粒是一种存在于细泡质中的具有稳定的复制的双链环状DNA。用与提取目的的同种限切霉切质粒便可以使目的DNA“稼接”在质粒上再用连接霉连接DNA磷酸二脂键。高中不要求了解质粒的提取方法、将提取后的带有目的DNA注入受体细胞既可。大肠杆菌做为受体、就是让提取的质粒(目的DNA)有一个生长、复制的平台。跨膜运输
一般来说,大肠杆菌中有作为运载体的质粒,质粒是环状的DNA分子。
用DNA连接酶将目的DNA插入到质粒上 然后通过跨膜运输走 质粒是大肠杆菌中的小型环状DNA分子 只是DNA的一种形式~在基因工程中应用的质粒都是通过人工处理的~脱离高中生物好久了~记得这么多 希望可以帮到你~
质粒是细菌细胞内一种自我复制的 环状 双链DNA分子(补充:部分质粒为RNA),大肠杆菌中有质粒,
用限制性内切酶把环状质粒切一切口,把剪切好的DNA片段插入质粒的缺口处并用DNA连接酶“缝合”接口,再将插入DNA片段的质粒移到受体细胞中
螺杆剪切力不足塑料粒会变色吗
螺杆剪切力不足塑料粒会变色。根据查询相关公开信息显示,塑料粒的耐热性、耐剪切性以及分散情况不一样,就会发生相应的色差。螺杆剪切力降低不宜塑化,同样影响塑料粒的颜色。
土的抗剪强度取决于土粒间
土的抗剪强度取决于土粒间总应力。1、土抗剪强度是指土体抵抗剪切破坏的极限强度,主要包括内摩擦力和内摩擦角(粘性土还包括其粘聚力c)。抗剪强度可通过剪切试验进行测定。2、土的抗剪强度指标一般是通过以下室内试验、原位测试测定源哦按段,比如直接剪切试验、三轴压缩试验、无侧限抗压强度试验,...
土体剪切破坏是什么意思?
其中,土体的物理性质是影响剪切破坏的最主要因素,其中包括土的密度、含水量、孔隙度、粒径分布以及土的力学特性等。同时,外部施力情况和土体结构形态对土体剪切破坏也有很大的影响,例如施力的方向、大小和施力的持续时间等。了解土体剪切破坏的原因和影响因素,对于如何避免土体剪切破坏有很大的帮助。通常...
用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ剪切时,质粒和目的基因两端的粘性末端不同,有四个...
BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA,在质粒上可以形成BamH Ⅰ和Hind Ⅲ的粘性末端,面外源DNA上,左边剩下的是BamH Ⅰ的粘性末端,右边是和Hind Ⅲ的粘性末端,这样就可以形成两种不同的粘性末端,在质粒上的两个切口彼此不同,在目的基因两侧的两个切口彼此不同,而且还可以使目的基因...
颗粒流是什么?有哪些类型?
巴格诺尔德(R·A·Bagnold,1954)认为,在流动的沉积物内,无凝聚力的颗粒之间碰撞作用所产生的支撑应力能在颗粒之间传递剪切应力所引起的颗粒流动的流。因而颗粒流的支撑机理为"颗粒相互作用"。其沉积特征为在砂的基质中有粗碎屑层,内部构造为块状,缺乏由牵引流作用形成的沉积构造。颗粒流润滑是将固体...
泥石流的径流特征
泥石流是一种由水和携带的固体物质(如泥砂、石块、粘土等)组成的流体,它的流动特性与众不同,包含块体滑动、颗粒剪切以及携砂水流运动的特点。泥石流流动时的特殊形态、速度、流量和运动特征,如下所述:1. 流态特征 泥石流的流体由固相和液相组成,其流态会因物质组成和粘稠度的差异而变化。稀性...
什么是土的剪切强度?
二、粘聚力 1、又叫内聚力,是在同种物质内部相邻各部分之间的相互吸引力,这种相互吸引力是同种物质分子之间存在分子力的表现。在有效应力情况下,将总抗剪强度扣除摩擦强度,即得到粘聚力。从另一角度看,粘聚力是破坏面没有任何正应力作用下的抗剪强度。2、用常规试验方法所求得的粘聚力值中均包含...
剪辑技巧学生们都来学
3别忘了剪辑顺序日 剪辑时要考虑好故事情节的顺序。想想你的视频是如何讲述故事的,逻辑清晰并且引人入胜。使用剪辑软件中的剪切工具来调整镜头的顺序,同时在过渡处添加平滑的过渡效果,让观众更容易理解你的故 事,不会感到困惑。三 4高级技巧来了!扑 除了基本的剪辑技巧外,还有一些高级技巧可以让你...
视频剪辑技巧
剪辑现在没有什么书可以看,有也是关于剪辑软件使用的书,但是书里是不会说怎么通过剪辑的方式表现影片的内容、形式等等。这些都要在实践中去掌握总结的。 有没有视频剪切软件? Allok Video Splitter V1.4.8 汉化版 Allok Video Joiner是一款强力的视频分离、剪切和修整工具,将一个大的视频文件如:AVI, Divx, MPEG...
剪切增稠液的原理
如果自己作试验,可找一个容器,最好是透明的,用淀粉和水混合,搅拌均匀,放置30min。在此期间淀粉会沉淀在容器的底部,等到沉淀物上方液体澄清后将水倒掉;剩下的物质就具有剪切增稠特性,如果用手指或筷子慢慢插入,感觉不到太大的阻力;但快速插入或搅拌时,则会感觉到有很大的阻力。当用细棒轻轻...
长兴凌金思: 质粒是一种存在于细泡质中的具有稳定的复制的双链环状DNA.用与提取目的的同种限切霉切质粒便可以使目的DNA“稼接”在质粒上再用连接霉连接DNA磷酸二脂键.高中不要求了解质粒的提取方法、将提取后的带有目的DNA注入受体细胞既可.大肠杆菌做为受体、就是让提取的质粒(目的DNA)有一个生长、复制的平台.
徽州区13994317078: 细胞质中质粒的复制是怎样的? - ?
长兴凌金思: 每个细胞中的质粒数主要决定于质粒本身的复制特性.按照复制性质,可以把质粒分为两类:一类是严紧型质粒,当细胞染色体复制一次时,质粒也复制一次,每个细胞内只有1~2个质粒;另一类是松弛型质粒,当染色体复制停止后仍然能继续复...
徽州区13994317078: 质粒的细胞复制是如何工作的呢? ?
长兴凌金思: 质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位,包括真核生物的细胞器和细菌细胞中染色体以外的脱氧核糖核酸(DNA)分子.现在习惯上用来专指细菌、酵母菌和放线菌...
徽州区13994317078: 质粒在基因工程中的作用是作为什么 - ?
长兴凌金思: 质粒在基因工程中是作为载体送进受体细胞中去进行增殖和表达的工具. 质粒具有自主复制能力,使其在子代细胞中也能保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息.细菌质粒是DNA重组技术中常用的载体.载体是指把一个有用的外源基因...
徽州区13994317078: 天然质粒往往要经过什么才能作为运载体 - ?
长兴凌金思: 做为运载体必需具备三个基本条件:1、可以在宿主细胞中复制,使遗传信息得以保留.2、具有多个限制性内切酶切点,便于连接目的基因.3、具标记基因,便于筛眩天然质粒需经过加工修饰以后才满足运载体的条件.
徽州区13994317078: 细菌质粒是不是环状DNA?它要是DNA为什么还要做细胞工程的运载体?把它放入细胞里面,细菌的DNA - ?
长兴凌金思: 恩,质粒就是环状的DNA,它作为运载体是把我们需要的目的基因连接上,然后通过转化导入细胞中的,把它导入细胞是不会把细菌的基因组DNA也带入细胞的,因为我们使用的质粒都是经过提纯的,是不含有细菌基因组DNA的,有专门的提取质粒的试剂盒,也可以通过自己配制的试剂来提取质粒.而质粒是怎么带上我们的目的基因而导入细胞的呢?首先,我们运用一种叫DNA限制性内切酶的酶来把质粒的环状结构切开,然后用DNA连接酶把我们得目的基因和质粒连接在一起,此时的质粒成为重组质粒,所使用的酶就是基因工程中所谓的工具酶.然后通过转化的方法将重组质粒导入细胞,我们得目的基因便可以在细胞内表达了.
徽州区13994317078: 带有目的基因的质粒怎样导入受体细胞 - ?
长兴凌金思: 你的受体细胞是什么?不同种类的细胞方法是不同的,转化效率也是不同的.所有转化法都需要先把受体细胞制作成感受态细胞.最好操作的就是大肠杆菌细胞.可选择的方法有:热激法,电穿孔法,化学转化法等. 酵母:氯化锂转化法,电穿孔法,这两种方法一般需要把环形质粒线性化. 真核细胞:原生质体融合,基因枪法,精子介导法,病毒载体介导法,显微注射法,花粉管介导法等等.
徽州区13994317078: 细菌分裂时,质粒怎么传递 - ?
长兴凌金思: 质粒是一类存在于细菌的遗传物质DNA之外,能自主复制的环状DNA分子.质粒可以给细菌提供抗药性、毒性等宿主细菌所没有的性状.比如,细菌因含有抗药性质粒而对某种抗生素产生抗性,细菌也可以因含有编码毒素基因的质粒而产生可...
徽州区13994317078: 质粒为什么可作为运载体 - ?
长兴凌金思: 因为质粒是可以独立遗传表达的DNA分子,作为运载体连百上目的基因后,可以在宿主细胞中将目的基因表达出来,度并且质粒上有很多限制酶切割位点和标记基因回,便于对其进行酶切操作和连接成功后的筛选,所以质粒是一种很答好的基因运载体!
徽州区13994317078: 质粒DNA重组的步骤是怎样的 - ?
长兴凌金思: 1.作为载体质粒的分离 2.含有目的基因DNA序列的酶切 3.目的基因插入质粒 4.重组质粒经转化导入受体细胞 5.克隆韩目的基因的细胞