什么是单克隆抗体 作用是什么?

作者&投稿:达唐 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
单克隆抗体制备的基本原理与过程?有什么意义?~

哈哈~我们刚考到这题
原理:
B淋巴细胞在抗原的刺激下,能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能力和量是有限的,不可能持续分化增殖下去,因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞,再进一步克隆化,这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力,又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力,将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技术。
过程
1)免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备,也可采用脾内直接免疫法。
2)骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前,骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选,防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性(恢复HGPRT的活性的细胞不能在含8-AG的培养基中存活)。骨髓瘤细胞用10%小牛血清的培养液在细胞培养瓶中培养,融合前24h换液一次,使骨髓瘤细胞处于对数生长期。
3)细胞融合的关键:
1技术上的误差常常导致融合的失败。例如,供者淋巴细胞没有查到免疫应答。这必然要失败的。
2融合试验最大的失败原因是污染,融合成功的关键是提供一个干净的环境,以及适宜的无菌操作技术。

4)阳性克隆的筛选 应尽早进行。通常在融合后10天作第一次检测,过早容易出现假阳性。检测方法应灵敏、准确、而且简便快速。具体应用的方法应根据抗原的性质,以及所需单克隆抗体的功能进行选择。常用的方法有 RIA法、 ELISA法和免疫荧光法等。其中ELISA法最简便,RIA法最准确。阳性克隆的筛选应进行多次,均阳性时才确定为阳性克隆进行扩增。
5)克隆化 克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体。克隆化应尽早进行并反复筛选。这是因为初期的杂交瘤细胞是不稳定的,有丢失染色体的倾向。反复克隆化后可获得稳定的杂交瘤细胞株。克隆化的方法很多,而最常用的是有限稀释法。
(1)显微操作法:在显微镜下取单细胞,然后进行单细胞培养。这种方法操作复杂,效率低,故不常用。
(2)有限稀释法:将对数生长期的杂交瘤细胞用培养液作一定的稀释后,按每孔1个细胞接种在培养皿中,细胞增值后成为单克隆细胞系。第一次克隆化时加一定量的饲养细胞。由于第一次克隆化生长的细胞不能保证单克隆化,所以为获得稳定的单克隆细胞株需经2~3次的再克隆才成。应该注意的是,每次克隆化过程中所有有意义的细胞都应冷冻保存,以便重复检查,避免丢失有意义的细胞。
(3)软琼脂法:将杂交瘤细胞稀释到一定密度,然后与琼脂混悬。在琼脂中的细胞不能自由移动,彼此互不相混,从而达到单细胞培养的目的。但此法不如有限稀释法好。
(4)荧光激光细胞分类法:用抗原包被的荧光乳胶微球标记杂交瘤细胞,然后根据抗原与杂交瘤细胞结合的特异性选出细胞,并进行单细胞培养。

6)细胞的冻存与复苏
7)大规模单克隆抗体的制备 选出的阳性细胞株应及早进行抗体制备,因为融合细胞随培养时间延长,发生污染、染包体丢失和细胞死亡的机率增加。抗体制备有两种方法。一是增量培养法,即将杂交瘤细胞在体外培养,在培养液中分离单克隆抗体。该法需用特殊的仪器设备,一般应用无血清培养基,以利于单克隆抗体的浓缩和纯化。最普遍采用的是小鼠腹腔接种法。选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠,先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射,一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去。通常在接种一周后即有明显的腹水产生,每只小鼠可收集5~10ml的腹水,有时甚至超过40ml。该法制备的腹水抗体含量高,每毫升可达数毫克甚至数十毫克水平。此外,腹水中的杂蛋白也较少,便于抗体的纯化。
意义:
用于以下各种生命科学实验并具有医用价值
(1)沉淀反应:Precipitation reaction
(2)凝集实验:haemaglutination
(3)放射免疫学方法检测免疫复合物
(4) 流式细胞仪:用于细胞的分型和细胞分离。
(5)ELISA 等免疫学检测
(6)BIAcore biosensor:检测Ab-Ag或与蛋白的
亲和力 。
(7) 免疫印记(western blotting)
(8) 免疫沉淀:
(9) 亲和层析:分离蛋白质
(10) 磁珠分离细胞
(11)临床疾病的诊断和治疗;

单克隆抗体问世以来,由于其独有的特征已迅速应用于医学很多领域。主要表现在以下几个方面。
  1.检验医学诊断试剂
  作为检验医学实验室的诊断试剂,单克隆抗体以其特异性强、纯度高、均一性好等优点,广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪等技术。并且单克隆抗体的应用,很大程度上促进了商品化试剂盒的发展。目前,应用单克隆抗体制作的商品化试剂盒广泛应用于:
  ①病原微生物抗原、抗体的检测;
  ②肿瘤抗原的检测;
  ③免疫细胞及其亚群的的检测;
  ④激素测定;
  ⑤细胞因子的测定。
  单克隆抗体对抗原的识别,与多克隆抗体有很大的不同。不同试剂盒因使用的单克隆抗体不同,识别抗原的位点不同,导致检测结果有一定差异。因此,标准化问题还需要进一步研究。
  2.蛋白质的提纯
  单克隆抗体是亲和层析中重要的配体。将单克隆抗体吸附在一个惰性的固相基质(如Speharose 2B、4B、6B等)上,并制备成层析柱。当样品流经层析柱时,待分离的抗原可与固相的单克隆抗体发生特异性结合,其余成分不能与之结合。将层析柱充分洗脱后,改变洗脱液的离子强度或pH,欲分离的抗原与抗体解离,收集洗脱液便可得到欲纯化的抗原。
  3. 肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术
  将针对某一肿瘤抗原的单克隆抗体与化疗药物或放疗物质连接,利用单克隆抗体的导向作用,将药物或放疗物质携带至靶器官,直接杀伤靶细胞,称为肿瘤导向治疗。另外,将放射性标记物与单克隆抗体连接,注入患者体内可进行放射免疫显像,协助肿瘤的诊断。

单克隆抗体指将特定的效应T细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行动物细胞融合,形成杂交瘤细胞,该杂交瘤细胞可以长时间存在并合成特定抗体
作用1.检验医学诊断试剂
2.蛋白质的提纯
3. 肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术

单克隆细胞将合成针对一种抗原决定簇的抗体,称为单克隆抗体。
应用:1医学诊断试剂:①病原微生物检测②肿瘤抗原检测③免疫细胞检测④激素、细胞因子测定 2蛋白质的提纯 3肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术。

本质是杂交瘤细胞。用瘤细胞与具有免疫效应的效应B细胞融合,即成为单克隆抗体。它不仅能具有免疫效应,也可以无限增殖。补充前面兄弟所说的效应T系胞不能分秘抗体。


顺昌县19882489381: 什么是单克隆抗体 作用是什么? -
以甘双醋:[答案] 单克隆抗体指将特定的效应T细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行动物细胞融合,形成杂交瘤细胞,该杂交瘤细胞可以长时间存在并合成特定抗体 作用1.检验医学诊断试剂 2.蛋白质的提纯 3. 肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术

顺昌县19882489381: 单克隆抗体(抗体类型) - 搜狗百科
以甘双醋: “生物导弹”是免疫导向药物的形象称呼,它由单克隆抗体与药物、酶或放射性同位素配合而成,因带有单克隆抗体而能自动导向,在生物体内与特定目标细胞或组织结合,并由其携带的药物产生治疗作用. “生物导弹”是对单克隆抗体的一种...

顺昌县19882489381: 单克隆抗体的应用 -
以甘双醋: 单克隆抗体,因为是肿瘤细胞和B细胞杂交而成的,所以它有肿瘤细胞无限增殖的特性,又能分泌抗体.

顺昌县19882489381: 1、什么是单克隆抗体?有哪些优点和缺点?2、简述单克隆抗体的基本过程?3、如何制备杂交瘤细胞? -
以甘双醋:[答案] 单克隆抗体是利用体外培养技术生产的抗体,它由于是由一个细胞分裂而来的,所有只含有一种抗体. 单克隆抗体的优点是:理化性状高度均一、生物活性单一、与抗原结合的特异性强、便于人为处理和质量控制,并且来源容易.这些优点使其广泛应...

顺昌县19882489381: 单克隆抗体的作用是什么 -
以甘双醋: 可以用作试剂以检测人是否患某种病,可以治疗某些肿瘤如皮肤癌,可以治疗自身免疫病如红斑狼疮、类风湿性关节炎,还可以用作生物导弹(通过生物载体将单抗运至病灶,效果明显提高)

顺昌县19882489381: 单克隆抗体在医学中的应用有什么?
以甘双醋: 单克隆抗体在生物学和医学研究领域中显示了极大的应用价值,是亲和层析中重要的配体,是免疫组化中主要的抗体,是免疫检验中的新型试剂,是生物治疗的导向武器. ...

顺昌县19882489381: 什么是单克隆抗体? -
以甘双醋: 单克隆抗体是针对肿瘤【也就是癌症】的特异性药物.单克隆抗体不仅为基础医学研究提供极有价值的抗癌载体,而且在临床医学上也得到广泛的实际应用,为肿瘤、自身免疫等许多临床疾病的诊断、治疗和预防提供了新的手段,是人类治疗肿瘤的希望所在.本文来自: 财富赢家论坛 : http://bbs.cf8.com.cn/viewthread.php?tid=297766&extra=

顺昌县19882489381: 什么叫单克隆抗体? -
以甘双醋: 单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体. 1、单克隆抗体制备的宿主动物一般选用BALB/c小鼠,鼠单抗的应用范围相当广泛,一些国内外公司均开发出了兔的单克隆抗体制备技术. 2、单克隆抗体是亲...

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