细菌有哪些染色方法?
简单染色法:利用单一染料对细菌进行染色的一种方法.例如番红.
1.涂片:用灼烧灭菌冷却后的接种环挑取少量菌体与水滴充分混匀,涂成极薄的菌膜.
2.干燥:可自然晾干,或将涂片置于火焰高处微热烘干,但不能直接在火焰上烘烤.
3.固定:手执玻片一端,有菌膜的一面朝上,通过迅速通过火焰2-3次(用手指触涂片反面,以不烫手为宜).
4.染色:加适量(以盖满菌膜为度)结晶紫染色液(或石炭酸复红液),染l~2min.
5.水洗:用自来冲洗至流下的水中无染色液的颜色时为止.
6.干燥
7.镜检
复染色:利用用两种以上染料对细菌进行染色.例如革兰氏染色法.
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,需要碱性染料(basic dye)初染液;媒染剂(mordant);脱色剂(decolorising agent)和复染液(counterstain).
碱性染料初染液的象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样,而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫(crystal violet).媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力,即以某种方式帮助染料固定在细胞上,使不易脱落,碘(iodine )是常用的媒染剂.脱色剂是将被染色的细胞进行脱色,不同类型的细胞脱色反应不同,有的能被脱色,有的则不能,脱色剂常用95%的酒精(ethanol).复染液也是一种碱性染料,其颜色不同于初染液,复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色,而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色,而且将细胞区分成G+和G-两大类群,常用的复染液为番红.
1.载玻片固定.在无菌操作条件下,用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀,在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定.
2.草酸铵结晶紫染1分钟.
3.自来水冲洗,去掉浮色.
4.用碘-碘化钾溶液媒染1分钟,倾去多余溶液.
5.用中性脱色剂如乙醇(95%)或丙酮酸脱色30秒,革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色,革兰氏阴性菌被褪色而呈无色.
6.用番红染液或者沙黄复染30秒,革兰氏阳性菌仍呈紫色,革兰氏阴性菌则呈现红色.
常用的染色方法有革兰氏染色(最基本)、芽孢染色、荚膜染色、鞭毛染色等
一、常用的染色方法有革兰氏染色(最基本)、芽孢染色、荚膜染色、鞭毛染色等。二、.1 革兰染色法 (1)取含金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的混合菌液涂片、干燥、固定;(2)染色:用结晶紫染液染1min,水冲洗;卢戈碘液染1min,水冲洗;0.4%复红酒精溶液染30s,水冲洗;(3)吸干后镜检[2] 。
1.2 抗酸染色法 (1)取结核杆菌阳性的痰标本(已处理)涂片、干燥、固定。(2)染色:将石炭酸复红染液沸水浴10min,滴加2~3滴覆盖菌膜染色 5min,水冲洗,3%盐酸酒精脱色30s,水冲洗;碱性美兰复染30s,水冲洗。(3)吸干后镜检[3] 。
1.3 荚膜染色法 (1)取接种肺炎球菌死亡的小鼠腹腔液涂片、干燥、固定;(2)染色:用石炭酸复红染液染1min,水冲洗;95%酒精脱色5s水冲洗;20%鞣酸溶液媒染10min水冲洗;0.8%孔雀绿溶液染色1min,水冲洗;(3)吸干后镜检[4] 。
1.4 芽胞染色法 (1)取等量破伤风杆菌厌氧培养菌液和5%孔雀绿水溶液,放入小试管中充分混合,沸水浴20min;取上述混合液涂片、干燥、固定;(2)用 1%沙黄液复染10min,水冲洗;(3)干后镜检。
2.1 革兰染色 镜下,金黄色葡萄球菌染成紫色、球形,为革兰阳性菌;大肠埃希菌染成红色、杆状,为革兰阴性菌。革兰染色法是细菌学中最经典,应用最广泛的染色法之一。脱色是影响革兰染色的关键步骤,脱色时间长短直接关系到染色结果的准确性[5] 。脱色过度则革兰阳性菌可能被误染为革兰阴性菌,脱色不 够则革兰阴性菌可能被误染为革兰阳性菌,为此学生难以把握。现将原有四步染色法改为三步法,即把第三步酒精脱色和第四步复红复染合并一步进行,使用 0.4%复红酒精溶液作为复染剂,可达到脱色和复染双重目的。这样,就可以避免学生在四步法中因脱色时间不易掌握而造成染色的失败,减少重复性实验,提高了教学效果。
2.2 抗酸染色 镜下,结核分枝杆菌染成红色,为抗酸菌;背景和其他菌被染成蓝色,为非抗酸菌。传统的方法是滴加石炭酸复红染液于涂片上,用玻片夹夹住涂片以微火烟叶热,保持染液冒蒸汽约5min,此法学生容易使染液蒸干或使染液沸腾,从而影响染色效果和污染环境。改良后的方法是将染液直接加热改为水浴后使用,克服上述的缺点,且染色效果良好。适合实验教学使用。
2.3 荚膜染色 镜下,肺炎球菌菌体染成红色(成双排列),荚膜染成绿色,存在于菌体的周围。传统的荚膜染色是用结晶紫染液染色,菌体染成紫色,荚膜染成淡紫色或无色,菌体和荚膜之间反差小,不易分辨。改良后,增加了脱色、媒染、复染的步骤,使菌体和荚膜之间反差增大,易于观察,可用于学生实验和示教片的制作。
2.4 芽胞染色 镜下,破伤风杆菌的菌体染成红色,芽胞染成绿色。传统的方法是滴加石炭酸复红染液于涂片上并弱火加热,使染液冒蒸汽约5min,此法染液用量大,且容易污染衣物和实验台。现改为菌液和染液混合水浴加热初染,然后制备涂片、固定、复染,即节约时间,染液消耗又少,且菌体、芽胞对比鲜明。此法适用于教学标本片的制作。
三、简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
操作步骤
1.涂片:用灼烧灭菌冷却后的接种环挑取少量菌体与水滴充分混匀,涂成极薄的菌膜。
2.干燥:可自然晾干,或将涂片置于火焰高处微热烘干,但不能直接在火焰上烘烤。
3.固定:手执玻片一端,有菌膜的一面朝上,通过迅速通过火焰2-3次(用手指触涂片反面,以不烫手为宜)。
4.染色:加适量(以盖满菌膜为度)结晶紫染色液(或石炭酸复红液),染l~2min。
5.水洗:用自来冲洗至流下的水中无染色液的颜色时为止。
6.干燥
7.镜检
1
革兰氏染色法
是最常用的鉴别染色法之一。此法起始1881年,染色步骤是先用结晶紫或龙胆紫染液加于已固定好的标本上使之着色,其后加碘液作媒染剂,再用酒精脱色,最后用复红或沙黄复染。革兰氏染色的结果与培养基成分、培养条件及操作技术等有密切关系。如涂片太厚影响酒精脱色,革兰氏阴性菌则可染成革兰氏阳性菌。脱色时若酒精作用时间太长,
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,革兰氏阳性菌又会染成革兰氏阴性菌。在缺乏镁盐的培养基中,革兰氏阳性菌可变成革兰氏阴性菌。菌龄也能影响染色的结果,这与生长过程中核酸含量的改变有关。革兰氏染色法的原理还不十分清楚,有化学学说、等电点学说、渗透性学法,目前最通常的解释是革兰氏阳性菌在95%酒精中因含粘肽多而导致细胞壁脱水,通透性减低,使在细菌细胞内着色的染料─碘复合物不易透出细胞壁,所以保留了紫色;革兰氏阴性菌含粘肽少,其细胞壁在95%酒精作用下通透性变化不大,酒精容易进入菌体内溶解染料─碘复合物而透出,失去紫色后被复染成为红色。
2
抗酸染色法
有些细菌,如结核杆菌,不般不易着色,一旦染上色后又不易被盐酸酒精脱色,称为抗酸菌。主要步骤是将细菌涂片、干燥、固定后,以石炭酸复红染液加温进行染色,然后用含酸的酒精脱色,最后用美蓝复染。一般细菌以及标本中的物质都被脱色,抗酸菌则不能,仍为红色。在蓝色背景上呈红色的细菌即为抗酸菌。
3
细菌特殊结构的染色法
细菌的特殊结构,如鞭毛、荚膜、细胞壁、芽孢及异染颗粒等,用普通染色法不易着色,故需用特殊染色法。
4
负染色法
是指背景着色而细菌本身不着色。常用墨汁负染色法配合单染色法(如美蓝)检查细菌的荚膜,背景呈黑色,菌体染成蓝色,
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,荚膜不着色,包绕在菌体周围,成为一层透明的空圈。
5
荧光染色法
用荧光染料,如金胺、吖啶橙等进行染色。细菌用荧光染料着色后在荧光显微镜下检查,可在黑的背景中观察到细菌发出明亮的荧光。用荧光染色法检查细菌,有加快检查速度和提高阳性率等优点。
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常用的染色方法有革兰氏染色(最基本)、芽孢染色、荚膜染色、鞭毛染色等 查看原帖>>
常用的染色方法有革兰氏染色(最基本)、芽孢染色、荚膜染色、鞭毛染色等
实验室常用的染色方法有哪几种?
实验室常用的染色方法有如下几种:(1)瑞氏染色法 染色结果使组织细胞的胞浆和核染成不同颜色,菌体呈蓝紫色,易于识别。(2)革兰氏染色法 可用于鉴别革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌。革兰氏阳性菌不易被酒精脱色而染成蓝紫色,革兰氏阴性菌则易被酒精脱色,经复染呈红色。(3)美蓝染色法 多色性...
细菌常见的几种染色方法
细菌常用的染色方法:革兰氏染色(最基本)、芽孢染色、荚膜染色、鞭毛染色等。
常见的细菌染色方法
革兰氏染色法是细菌学中广泛应用的一种分类染色技术。首先,细菌被碱性染料如结晶紫染色,随后通过碘液媒介,再经过酒精脱色处理。在特定条件下,有些细菌的染色剂媒介层不会被酒精脱色,被称为革兰氏阳性菌;而其他细菌则可以被酒精脱色,被称为革兰氏阴性菌。荚膜染色是一种特殊的染色技术,用于突出显示...
试述细菌革兰氏染色的方法步骤和机理,染色结果。举出G+和G—的细菌的...
【答案】: 基本步骤:①结晶紫初染色1分钟;②碘液媒染1分钟;③95%乙醇脱色;④番红复染1分钟。结果:G+细菌呈紫色,G-细菌呈红色。机理:G+细菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次多和交联致密,故遇脱色剂乙醇处理时,因失水而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇的处理不会融出缝隙,因此能...
常见的染衣服的方法有哪些
染衣服常用方法有:1、革兰氏染色法,是一种复染色方法,即选用结晶紫和石碳酸复红两种染液染色的方法,依此将细菌分成革兰氏阳性菌(记G+)和革兰氏阴性菌(记G-)。2、简单染色法,是用一种染液染色的方法,如美兰或石碳酸复红等,此法只能显示细菌的形态及大小。3、特殊结构染色法,是染色细菌细胞...
现有一株未知细菌如何对其进行革兰氏染色
您好!1.先涂片,涂片不能太厚,不易观察。2.干燥固定,过火焰三次。3.染色,革兰染色先结晶紫处染,用碘液媒染,酒精脱色,最后复红复染。晾干后镜下观察。根据阳紫阴红确定革兰氏阳性菌还是阴性菌。将菌用培养基培养及鉴定可确定其为何菌。
什么是革兰氏染色法?染色过程应注意什么
注意事项:1.选用活跃生长期菌种染色,老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。2.涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性。3.脱色是革兰氏染色是否成功的关键,脱色不够造成假阳性,脱色过度造成假阴性。方法原理:用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正...
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革兰阴性菌是怎么染色的?
1、涂片环节,不能涂得太厚,否则染色脱色都会有影响;2、干燥环节,要将菌体固定住,还不能烧变形;3、脱色环节,这是最最重要的,要掌握好乙醇的量和速率,脱色太过容易使阳性菌检出假阴性,脱色不足容易使阴性菌检出假阳性。未经染色之细菌,由于其与周围环境折光率差别甚小,故在显微镜下极难...
临床诊断学 细菌染色标本的检查
2.复染色法:用两种或两种以上的染料染色的方法,称为复染色法或鉴别染色法。常用的有革兰染色法和抗酸染色法。(1)革兰染色:本法是细菌学中最经典、最常用的染色方法。除粪便、血液等极少数标本外,绝大多数标本在分离培养之前都要进行革兰染色、镜检。通过革兰染色将所有细菌分为G+菌和G-菌两大...
肥蓓甘草:[答案] 常用的染色方法有革兰氏染色(最基本)、芽孢染色、荚膜染色、鞭毛染色等 查看原帖>>
郁南县13233731409: 细菌的常用染色技术 - ?
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肥蓓甘草: 1革兰氏染色法是最常用的鉴别染色法之一.此法起始1881年,染色步骤是先用结晶紫或龙胆紫染液加于已固定好的标本上使之着色,其后加碘液作媒染剂,再用酒精脱色,最后用复红或沙黄复染.革兰氏染色的结果与培养基成分、培养条件及...
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肥蓓甘草:[答案] 革兰氏染色法
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肥蓓甘草: 细菌形态学检查方法:常用染色方法 1.美蓝染色法 在已干燥、固定好的抹片上,滴加适量的美蓝染色液,经1一2分钟,水洗,干后镜检,结果是细菌呈蓝色. 2.稀释石炭酸复红染色法 染色方法同美蓝染色法,结果是细菌呈红色. 3.革兰(Gram)氏染色法 (1)在已干燥、固定好的抹片上,滴加草酸按结晶紫染色液,染色2一3分钟,水洗. (2)加革兰氏碘液于抹片上媒染1一2分钟,水洗. (3)加95%酒精于抹片上脱色,约30秒至1分钟,水洗. (4)加稀释石炭酸复红(或沙黄水溶液)复染50一60秒钟,水洗.干后镜检.结果是细菌染成蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌,染成红色的称为革兰氏阴性细菌.
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