问题：有目的基因，293t细胞，如何用慢病毒载体整合入293t细胞，求详细过程
彻底消毒，小心别污染环境或直接碰到，危险。
细胞系预实验-MOI 的确定 预实验的目的是了解所操作细胞被慢病毒载体感染的容易程度，另一方面在一些情况下虽然慢病毒已经感染进入细胞，但由于表达标记基因的启动子在该细胞内的表达效率不高，没能观察到感染现象。
慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例)：第一天：
1.用无抗生素DMEM+10%FBS铺板293FT细胞，2ml/孔。确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度
第二天：
1.转染293FT细胞。
1. 500ul Opti-MEM稀释2ug pWPXLd-目的基因+1.5ug psPAX2+1.5ug pMD2.G
2. 500ul Opti-MEM稀释15ul lipofectamine2000
3. 5min后，将，溶液混合，室温静止30min
4. 从6孔板中吸出1ml培养基，然后滴加入1ml质粒和脂质体混合物。
2. 6-10h后，移除含有DNA-脂质体复合物的培养基，代之以正常培养液DMED+
10%FBS（从此刻开始算时间）。
第三天：
3.转染24h后，荧光显微镜下观察，转染效率应达到70%以上
第四天：
4. 48h收获含病毒的上清，0.45um滤膜过滤， 同时再往6孔板中加入2ml完全培养基
4. 感染细胞：用一份病毒液+2份完全培养基感染目的细胞。
第五天：
5. 72h后再次收获病毒上清。将昨天感染的细胞离心去除上清，然后再次感染目的细胞。
6. 一般感染48h后，就能见到明显的荧光。
psPXA2是可以表达慢病毒的外壳质粒，其表达产物可以通过粘附机制更易穿过细胞膜。
PMD2.5G为慢病毒的膜蛋白质粒。
pWPXLd为慢病毒载体（个人理解）。
生物基因题,过程思路
生物基因题,过程思路解:(1)根据题图,目的基因有2个BamH 酶切位点,1个Hind 酶切位点,完全酶切后所有切点都被切开,因此会有4种DNA片段。(2)目的基因插入质粒时,由于目的基因有2个Bst位点,一个Hind位点,所
【高中生物】如题,这四种大肠杆菌含有的基因有什么区别?如何判断得出...
含有环状目的基因的,限制酶将目的基因所在的环一分为二,然后2个目的基因首尾相接构成一环.这些大肠杆菌拥有目的基因,但没有Amp'含有质粒载体,那么就是说2个质粒的粘性末端结合在了一起,这个质粒里面没有目的基因,但有Amp'最后是正确插入目的基因的重组载体,这个菌体里有Amp'也有目的基因 其中第一种仍...
基因工程技术目的基因的两端有
（1）过程②表示获得的目的基因，两侧应含有相关限制酶的酶切位点，两端还必须有启动子和终止子．（2）由图分析，⑤过程在含有卡那霉素的培养基上培养，说明构建的重组质粒上含有的标记基因是卡那霉素抗性基因．（3）过程⑤将受体细胞培养成再生植株，采用的是植物组织培养技术，培养基中必须添加植物激素...
关于基因工程的一道题。
个人认为出题者的意思是目的基因两端有这两种酶切位点，且这些酶切位点可以完全分开。但出题人没有你考虑全面，或者缺乏实际工作经验。因为在实际工作中，你担忧的问题常常出现，并影响工作效率。你比出题人强。青出于蓝而胜于蓝！
高中生物 基因工程题
题目中所述无误 先看目的基因 用2切开后确实为 ↓GATC 和 G↓GATCC CTAG↓ CCTAG↓G 看切开后 目的基因左右所带的碱基 左GATCC 右 G CTAG 再看GeneII的开口处一边G 另一边GATCC CCTAG G 你把插口对好 不正好插进去了吗 ？
一个完整的基因表达载体除了含有目的基因外,一般还必须具有哪三部分
1目的基因 2质粒 3限制性核酸内切酶（限制酶）：用来切割目的基因与质粒，使其产生相同的粘性末端（或平末端）形成氢键 4dna连接酶：使两条dna链间形成磷酸二酯键，形成重组质粒
pcr技术前测定基因两端部分核苷酸序列的目的
1、利用PCR技术扩增目的基因的前提，是要有“一段已经目的基因的核苷酸序列”，根据这一序列合成引物。2、核苷酸序列就是目的基因的序列，根据两端的序列合成引物从而与PCR仪中现存的目的基因互补配对，接着进行扩增。
高中生物选择一道压轴题 非常不解 请指教一二!!【重金悬赏】_百度知 ...
答案是B。此题主要考查基因工程中有关限制酶、连接酶、粘性末端等知识。D①图2中获得目的基因用2种不同的限制酶；②对“对质粒进行了改造，构建新的限制酶切位点”这句话的理解：在质粒中已有PstⅠ酶切位点，但没有MseⅠ的酶切位点，但根据MseⅠ、EcoRⅠ的识别序列及切割位点可知，可对EcoRⅠ...
关于高中生物的基因工程问题
1.两种是指用不同的两种限制酶同时切割目的基因和载体。(比如一端用A酶切割，那么另一端就用B酶切割）当然为了能使目的基因和载体连接，切割他们的两种不同限制酶必须是相同的。（也就是说，用A,B两种酶切割目的基因的话，那么也要用A,B两种酶切割载体） 2.目的基因是指我们需要的那段基因，既...
有关pcr目的基因的计算问题
我们知道总的扩增产物（双链）是指数增长的，N轮后为2^N个（N为循环数）；第三轮才开始目的产物的指数扩增。在最后的产物中可以认为有模板、两端凸出中央互补的产物（实际上很可能模板的链和非特异产物的链互补在一起）以及特异的产物 因此目的产物=总产物-非目的产物-模板=2^N-N-1 经四轮后为16...
戚飘苦黄：[答案] 慢病毒包装简要程序(以六孔板中的1孔为例): 第一天: 1.用无抗生素DMEM+10%FBS铺板293FT细胞,2ml/孔.确保第二天细胞密度达到80%-90%融合度 第二天:\x09\x09\x09 1.转染293FT细胞. 1.500ul Opti-MEM稀释2ug pWPXLd-目的基因+1.5...
永川区13048301787： 293T细胞为什么经常用于转染、蛋白质表达?？
戚飘苦黄： 许多真核表达载体如pcDNA3.1中含有SV40病毒的复制起始位点,可以在表达SV40病毒T抗原的细胞系中复制,从而提高外源基因的表达水平.293T细胞就是一种表达SV40病毒T抗原的细胞系,它来源于人胚胎肾细胞293HEK,经改造后在其中插入了T抗原,因此用293T细胞做转染可以获得较高的表达水平. 293T细胞也可以作为普通的哺乳细胞用于筛选稳定表达的细胞系,不过它贴壁性差,容易脱落,不利于筛选. 3T3细胞是小鼠胚胎成纤维细胞系,它具有明显的接触抑制作用,所以易于识别已发生转化的细胞.
永川区13048301787： 胚胎干细胞(ES细胞)的研究是当前生物技术领域研究的热点之一,尤其是在生产转基因动物方面具有极大的科研及应用价值.下图表示利用胚胎干细胞所... - ？
戚飘苦黄：[答案] (1)过程Ⅰ将胚胎干细胞置于γ射线灭活的鼠胎儿成纤维细胞的饲养层上,并加入动物血清、抗生素等物质,维持细胞不分化的状态.在此过程中,饲养层提供干细胞增殖所需的营养物质,加入抗生素是为了防止杂菌污染. (2)ES细胞能培养成小鼠个...
永川区13048301787： 如何用标记基因筛选含有目的基因的细胞 - ？
戚飘苦黄： 将受体细胞培养在培养基中,后用布覆盖再上,轻压,使细胞附着在布上,将布放到含有标记基因的培养基中,如果不能生长,那么它就是含有目的基因.前提是,含有目的基因的质粒不含有标记基因
永川区13048301787： 目的基因导入受体细胞后会有哪几种情况?受体细胞可能死亡吗? - ？
戚飘苦黄： 表达或者不表达,可能死亡
永川区13048301787： 磷酸钙法转染HEK293T细胞实验方法哪位了解啊?有木有生物论坛有这方面的介绍 - ？
戚飘苦黄： 为什么用这种方法呢,脂质体转染不是很好吗,到处都有的试剂卖,invitrogen的lipofectamine2000就很好用的.
永川区13048301787： 举例说明如何筛选出含有目的基因的受体细胞 - ？
戚飘苦黄： 1.如果是抗性基因之类的可以直接用选择培养基 2.可以分出离缺陷型为靶细胞,并在质粒上串联该抗性基因(如氨苄青霉素, 卡拉霉素等)这样只有转化子才能在选择培养基上长出. 3. 在质粒上串联有标志性产物的基因,用涂布法获得转化子的单菌落进行培养 EG:现在使用的许多载体(如PUC系列)有含有一个大肠杆菌DNA的短区段,其中含有β-半乳糖苷酸基因(lacZ)的调控序列和头146个氨基酸偏码区. 当外源基因插入时,有β-半乳糖苷酶表达, 在生色底物5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷(x-gal)培养基中形成兰色菌落.
永川区13048301787： 基因工程第二步基因表达载体的构建: 标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有 - ？
戚飘苦黄： 标记基因是在运载体有的可以识别的基因,之后将目的基因插入运载体构建表达载体,然后将表达载体导入受体细胞.但是在此过程中表达载体不一定导入了受体细胞于是就要利用到标记基因所表达的性状来鉴定是否将表达载体导入成功和筛选出导入成功的细胞.如何筛选就要
永川区13048301787： 标记基因怎么鉴别受体细胞是否含有目的基因?讲细一点 - ？
戚飘苦黄： 导入受体细胞的质粒上有目的基因,标记基因,启动子,终止子,若受体细胞表达出标记基因所控制的性状,则表示质粒已经导入受体细胞,所以目的基因也导入受体细胞.但目的基因导入受体细胞后不一定表达.
永川区13048301787： 如何将目的基因载入植物细胞(请详细回答)?？
戚飘苦黄： 将目的基因载入植物细胞有5个步骤1.目的基因的获取 :基因文库中获取,人工合成,逆转录法2. 基因表达载体构建:需要的载体必须具备 启动子 终止子 1步骤中获取的基因 复制原点3.将目的基因导入受体细胞:对于植物细胞的话 最好最广泛的选用 农杆菌转化法 花粉管通道法也可以的4 .检测是否导入表达了目的基因5 根据植物细胞全能性,进行植物组织培养.、 谢谢!
