丙二醛提取的原理
刚做完毕业设计正好也有,就跟你分享吧。希望能帮到你。
丙二醛(MDA)含量的测定
① 测定步骤
称取剪碎的试材1g,加入2ml10%三氯乙酸(TCA)和少量石英砂,研磨至匀浆,再加8mlTCA进一步研磨,匀浆在4000r/min离心10分钟,上清液为样品提取液。吸取离心的上清液2ml(对照加2ml蒸馏水),加入2ml0.6%硫代巴比妥酸溶液,混匀物于沸水浴上反应15min,迅速冷却后再离心。取上清液测定532、600和450nm波长下的吸光度。
② 计算
(3-6)
式中:C—MDA的浓度, ;
A450,A532 和A600—分别代表450、532和600nm波长下的吸光度值。
当然是用5ml来算的,提取液损失的同时也有材料的损失,这些损失是没有办法测量的。虽然有提取液的损失,但实际上损失的量并不大,可以忽略不计。但如果你把提取液从离心管中转移出来再测定其体积的话,离心管上也会沾有提取液,这样也有损失,所以一般都采用提取开始时放入的提取液的体积算的。
无色针状晶体,熔点 72~74℃,一般含两个结晶水,60℃下真空干燥可得无水物,易潮解,纯的丙二醛在中性条件下稳定,但在酸性条件下不稳定。
由乙醛和甲酸乙酯在碱作用下缩合而得,可在高真空下升华精制,主要用于医药中间体、感光色素的原料。与蛋白质不相容,有潜在的致癌性。
生物体内,自由基作用于脂质发生过氧化反应,氧化终产物为丙二醛,会引起蛋白质、核酸等生命大分子的交联聚合,且具有细胞毒性。
丙二醛(MDA)
脂质氧化终产物丙二醛(MDA)在体外影响线粒体呼吸链复合物及线粒体内关键酶活性。
MDA是膜脂过氧化最重要的产物之一,它的产生还能加剧膜的损伤因此在植物衰老生理和抗性生理研究中MDA含量是一个常用指标,可通过MDA了解膜脂过氧化的程度,以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。
植物组织中的丙二醛(MDA) 在酸性条件下加热可与硫代巴比妥酸(TBA) 产生显色反应,反应产物为粉红色的3,5,5一三甲基恶唑2,4一二酮(Trimet—nine)。该物质在539nm波长下有吸收峰。由于硫代巴比妥酸也可与其它物质反应,并在该波长处有吸收,为消除硫代巴比妥酸与其它物质反应的影响,在丙二醛含量测定时,同时测定600nm下的吸光度,利用539nm与600nm下的吸光度的差值计算丙二醛的含量。
植物组织丙二醛含量测定
植物叶片在衰老过程中发生一系列生理生化变化,如核酸和蛋白质含量下降、叶绿素降解、光合作用降低及内源激素平衡失调等。这些指标在一定程度上反映衰老过程的变化。近来大量研究表明,植物在逆境胁迫或衰老过程中,细胞内活性氧代谢的平衡被破坏而有利于活性氧的积累。活性氧积累的危害之一是引发或加剧膜脂过氧化作用,造成细胞膜系统的损伤,严重时会导致植物细胞死亡。活性氧包括含氧自由基。自由基是具有未配对价电子的原子或原子团。生物体内产生的活性氧主要有超氧自由基(O-2)、羟自由基(OH·)、过氧自由基(ROO·)、烷氧自由基(RO·)、过氧化氢(H2O2)、单线态氧(O21)等。植物对活性氧产生有酶促和非酶促两类防御系统,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶POD和抗坏血酸过氧化物酶(ASA—POD)等是酶促防御系统的重要保护酶,抗坏血酸(ASA)和还原型谷胱甘肽(GSH)等是非酶促防御系统中的重要抗氧化剂。
丙二醛(MDA)是细胞膜脂过氧化作用的产物之一,它的产生还能加剧膜的损伤。因此,丙二醛产生数量的多少能够代表膜脂过氧化的程度,也可间接反映植物组织的抗氧化能力的强弱。所以在植物衰老生理和抗性生理研究中,丙二醛含量是一个常用指标。
[材料、仪器、药品]
1.材料:植物抗逆性鉴定实验中的四种菠菜样品,即绿色和黄色叶片的高温处理和室温对照。
2.仪器:(1) 分光光度计;(2) 离心机;(3)水浴锅:(4) 天平;(5) 研钵;(6) 剪刀;(7) 5ml刻度离心管;(9) 刻度试管(10ml);(10) 镊子;(11) 移液管(5ml、2ml、1ml);(12)冰箱。
3.药品:(1) 0.05mol/L pH7.8磷酸钠缓冲液;(2) 石英砂;(3) 5%三氯乙酸溶液:称取5g三氯乙酸,先用少量蒸馏水溶解,然后定容到100ml;(4) 0.5%硫代巴比妥酸溶液:称取0.5g硫代巴比妥酸,用5%三氯乙酸溶解,定容至100ml,即为0.5%硫代巴比妥酸的5%三氯乙酸溶液。
[方法]
1.丙二醛的提取:取0.5g样品,加入2ml预冷的0.05mol/L pH7.8的磷酸缓冲液,加入少量石英砂,在经过冰浴的研钵内研磨成匀浆,转移到5ml刻度离心试管,将研钵用缓冲液洗净,清洗也移入离心管中,最后用缓冲液定容至5ml。在4500转/min离心10min。上清液即为丙二醛提取液。
2.丙二醛含量测定:吸取2 ml的提取液于刻度试管中,加入0.5%硫代巴比妥酸的5%三氯乙酸溶液3ml,于沸水浴上加热10min,迅速冷却。于4500转/min离心10min。取上清液于532、600nm波长下,以蒸馏水为空白调透光率100%,测定吸光度。
3.结果计算:
(A532—A600) ×V1×V
1.55×10-1×W×V2
丙二醛含量(nmol/g)=
式中:A为吸光度;V1为反应液总量(5m1);V为提取液总量(5ml);V2为反应液中的提取液数量(2ml);W为植物样品重量(0.5g);1.55×10-1为丙二醛的微摩尔吸光系数(在1升溶液中含有1µmol丙二醛时的吸光度)。
4.注意事项:
(1) 0.1~0.5%的三氯乙酸对MDA—TBA反应较合适,若高于此浓度,其反应液的非专一性吸收偏高;
(2) MDA—TBA显色反应的加热时间,最好控制沸水浴10~15min之间。时间太短或太长均会引起532nm下的光吸收值下降;
(3) 如用MDA作为植物衰老指标,首先应检验被测试材料提取液是否能与TBA反应形成532nm处的吸收峰。否则只测定532、600nm两处A值,计算结果与实际情况不符,测得的高A值是一个假象;
(4) 在有糖类物质干扰条件下(如深度衰老时),吸光度的增大,不再是由于脂质过氧化产物MDA含量的升高,而是水溶性碳水化合物的增加,由此改变了提取液成分,不能再用532nm、600nm两处A值计算MDA含量,可测定510、532、560nm处的A值,用A532一(A510—A560)/2的值来代表丙二醛与TBA反应液的吸光值。
洋葱能去甲醛吗?
洋葱根本就不能除甲醛,它并不具备这个功效。甲醛超标对人体危害很大,长期处于甲醛超标的环境里会引起很多疾病,比如白血病。洋葱是不能除甲醛的。利用洋葱除甲醛的方法是错误的、是徒劳无功的。要想有效除醛还需用正确方法,如开窗换气、活性炭吸附、光触媒净化等。
什么能除甲醛最快最好?
如果选择空气净化器,则应在每个房间放置一个空气净化器,并根据房间平方米和空气净化器净化能力放置相应数量的空气净化器。值得注意的是,以上几项除甲醛的东西,只有在甲醛略高于标准的情况下,即超过国家标准值小于10% 的情况下,才能通过它们起到有效的除醛作用。一旦甲醛浓度超过10% ,这些物品就不...
治理甲醛用什么方法更有效
优点:由于生物酶是从植物里面提取的蛋白质,而甲醛等有害气体是溶于蛋白质的,利用其相似相溶原理将甲醛生成水和二氧化碳,整个过程无毒、无腐蚀、无刺激,无二次污染。缺点:酶是有寿命的,那么使用了生物酶就要隔一段时间进行反复治理,它不可能“长命百岁”,且自身不消耗。生物酶原作用于污水处理的,后来发展到用于除...
对于甲醛的一些基本知识
如果从根本上解决甲醛问题,就需要停止使用脲醛树脂作为胶黏剂。由于技术和成本的原因,短期内在国内难以实现。而甲醛造成了大量的恶性疾病,因此处理甲醛污染成为很多老百姓关注的焦点。 2 、甲醛气体普遍存在于空气中,问题在于浓度要在安丨全范围内。国,际标准WHO空气质量指南和我国国标18883设定了一个限值0.1mg\/m3...
简述中草药有效成分提取和分离方法
1、超临界流体萃取 利用超临界状态下的流体为萃取剂,从液体或固体中萃取中药材中的药效成分并进行分离的方法。原理是以一种超临界流体在高于临界温度和压力下,从目标物中萃取有效成分,当恢复到常压常温时,溶解在流体中成分立即以溶于吸收液的液体状态与气态流体分开。2、膜提取分离技术 分离基本原理是...
执业药师考前辅导——药物分析(五)
2、硫酸盐的测定:在冰醋酸介质中只能被滴定至硫酸氢盐。 3、硝酸盐的测定:在冰醋酸中为弱酸,但具有氧化性,使指示剂变色,故用电位法。 9、 磷酸盐的测定:酸性极弱,10、 可按常法测定。 2、 提取中和法:原理:利用生物碱盐类溶于水,而3、 生物碱不4、 溶于水。 1、碱化:氨水为常用的碱化试剂。 2、...
除醛板可以完全去除甲醛?
什么净醛板、除醛板、抗菌板都是不实际的;● 首先,我们了解下所谓的“除醛”是什么原理;“除醛”功能是因为板材表层植入纳米二氧化钛Tio2;纳米二氧化钛,亦称钛白粉,在可见光照射下可以对依附于板材表面的碳氢化合物作用,利用光催化反应分解表层有机污染物为二氧化碳CO2和氧气O2;● 划重点 分解...
可溶性糖含量的测定蒽酮法
关于可溶性糖含量的测定蒽酮法的解释如下:一、实验目的。掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。学习植物可溶性糖的提取方法。二、实验原理 糖在浓硫酸作用下,可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物,在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比...
光触媒分解甲醛的原理到底有多神奇
光触媒[Photocatalyst]是光[Photo=Light]+触媒(催化剂)[catalyst]的合成词。光触媒是一种以纳米级二 光触媒除甲醛反应原理 氧化钛为代表的具有紫外线光催化功能的光半导体材料的总称。光触媒在紫外线光的照射下,会产生类似光合作用的光催化反应,产生出氧化能力极强的自由氢氧基和活性氧,具有很强的...
醇跟醛、酮怎么鉴别出来?
鉴别醇、醛、酮的方法如下:【方法1】取三支试管,分别加入丙醛、丙酮、丙醇。然后向每支试管中加入一小块用滤纸吸干煤油的金属钠。观察到有气泡生成的是丙醇,因为只有醇类能够与金属钠反应产生氢气。【方法2】另取两支试管,分别加入丙醛和丙酮。然后向试管中分别加入新制氢氧化铜,并进行加热。观察...
应促司莫: [原理]植物组织中的丙二醛(MDA) 在酸性条件下加热可与硫代巴比妥酸(TBA) 产生显色反应,反应产物为粉红色的3,5,5一三甲基恶唑2,4一二酮(Trimet—nine).该物质在539nm波长下有吸收峰.由于硫代巴比妥酸也可与其它物质反应,...
和平区17053152368: 丙二醛的提取及含量测定的方法 - ?
应促司莫: 刚做完毕业设计正好也有,就跟你分享吧.希望能帮到你. 丙二醛(MDA)含量的测定 ① 测定步骤 称取剪碎的试材1g,加入2ml10%三氯乙酸(TCA)和少量石英砂,研磨至匀浆,再加8mlTCA进一步研磨,匀浆在4000r/min离心10分钟,上清液为样品提取液.吸取离心的上清液2ml(对照加2ml蒸馏水),加入2ml0.6%硫代巴比妥酸溶液,混匀物于沸水浴上反应15min,迅速冷却后再离心.取上清液测定532、600和450nm波长下的吸光度. ② 计算(3-6) 式中:C—MDA的浓度, ;A450,A532 和A600—分别代表450、532和600nm波长下的吸光度值.
和平区17053152368: 什么是硫代巴比妥酸法 - ?
应促司莫: 硫代巴比妥酸比色法1、原理样品中的山梨酸在酸性溶液中,用水蒸汽蒸馏出来,然后用K2Cr2O7氧化成丙二醛和其它产物,丙二醛与硫代巴比妥酸反应,生成红色物质,颜色的深浅与山梨酸含量成正比.(530nm下测定)2、操作方法⑴ 样...
和平区17053152368: 丙二醛的介绍 - ?
应促司莫: 英文名:Malondialdehyde;malonic dialdehyde;Propanedial简称:MDACAS:542-78-9结构式:OHC-CH2-CHO分子式:C3H4O2 (同丙烯酸)分子量:72.0634无色针状晶体,熔点 72~74℃,一般含两个结晶水,60℃下真空干燥可得无水物,...
和平区17053152368: 油脂TBA值测定方法的公式? - ?
应促司莫: 丙二醛含量(nmol/g)==(A532-A600)*V1*V*1.55*1/10*W*V2 A为吸光度;V1为反应液总量(5m1);V为提取液总量(5ml);V2为反应液中的提取液数量(2ml);W为植物样品重量(0.5g);1.55*10-1为丙二醛的微摩尔吸光系数(在1升溶液中含有1µmol丙二醛时的吸光度). 就知道这点了. 顺便问下,你是做油脂的抗氧化吗?TBA值多用于肉类测定,油脂一般测POV值.
和平区17053152368: 再求饲料中TBA值的测定方法一个 - ?
应促司莫: 植物组织中丙二醛含量的测定植物器官衰老或在逆境下遭受伤害,往往发生膜脂过氧化作用,丙二醛(MDA)是膜脂过氧化的最终分解产物,从膜上产生的位置释放出后,与蛋白质、核酸起反应修饰其特征;使纤维素分子间的桥键松驰,或抑...
和平区17053152368: 丙二醛提取液可以放多久 - ?
应促司莫: 当然是用5ml来算的,提取液损失的同时也有材料的损失,这些损失是没有办法测量的.虽然有提取液的损失,但实际上损失的量并不大,可以忽略不计.但如果你把提取液从离心管中转移出来再测定其体积的话,离心管上也会沾有提取液,这...
和平区17053152368: 请教油脂TBA中丙二醛的配制方法 - ?
应促司莫: 配制方法?检测方法吧?简单的说,就是用三氯乙酸溶解提取丙二醛,然后双层滤纸过滤,取虑液,加入tba,在90摄氏度水浴中保温40min,再用三氯甲烷,萃取.取上层液离心,上机检测!具体方法,参考相关资料.
和平区17053152368: 如何测定丙二醇含量 - ?
应促司莫: 1原理 过碘酸及其盐类与二醇作用,生成碘酸.丙二醇被氧化为丙二醛.生成的 碘酸及过量的过碘酸与碘化钾作作,可析出碘,析出的碘以淀粉为指示剂,用硫 代硫酸钠标准滴定溶液直接滴定.2试剂与仪器 ①0.5%过碘酸钠溶液,②20%碘化...
和平区17053152368: 不同植物同一逆境的丙二醛含量为什么不同 - ?
应促司莫: 植物器官衰老或在逆境下遭受伤害,往往发生膜脂过氧化作用,丙二醛(MDA)是膜脂过氧化的最终产物,其含量可以反映植物遭受逆境伤害的程度.MDA从膜上产生的位置释放出来后,可以与蛋白质、核酸反应,从而丧失功能,还可使纤维素分子间的桥键松弛,或抑制蛋白质的合成.不同植物体内,各个反应进行的程度不同,因而最终的丙二醛含量会有所不同;这与植物的耐受程度也是有关系的.