微生物实验 水体中细菌总数的测定和大肠菌群的测定。
用稀释涂布平板法
1．样品稀释液的制备 准确称取待测样品l0g，放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置摇床上振荡20min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1ml无菌吸管，吸取10-1稀释液lml，移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液。
用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。通常测定细菌菌剂含菌数时，采用10-7、10-8、10-9稀释度，测定土壤细菌数量时，采用10-4、10-5、10-6稀释度，测定放线菌数量时，采用l0-3、10-4、10-5稀释度，测定真菌数量时，采用10-2、10-3、10-4稀释度。
2．平板接种培养 平板接种培养有混合平板培养法和涂抹平板培养法两种方法。
（1）混合平板培养法 将无菌平板编上10-7、10-8、10-9号码，每一号码设置三个重复，用无菌吸管按无菌操作要求吸取10-9稀释液各1ml放入编号10-9的3个平板中，同法吸取10-8稀释液各lml放入编号10-8的3个平板中，再吸取10-7稀释液各lml放入编号10-7的3个平板中（由低浓度向高浓度时，吸管可不必更换）。然后在9个平板中分别倒入已融化并冷却至45—50℃的细菌培养液，轻轻转动平板，使菌液与培养液混合均匀，冷凝后倒置，适温培养。至长出菌落后即可计数。
（2）涂抹平板计数法 涂抹平板计数法与混合法基本相同，所不同的是先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，待凝固后编号，然后用无菌吸管吸取0.1ml菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上（每个编号设三个重复）。再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀，每个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。在由低浓度向高浓度涂抹时，也可以不更换刮铲。将涂抹好的平板平放于桌上20—30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至长出菌落后即可计数。
全部按照10版国家标准进行比较。
菌落总数平板法：培养基为PCA；培养条件为，36摄氏度48小时；计数有效范围，30—300CFU/皿；计数方法为，直接计数。
大肠菌群平板法：培养基为VRBA；培养条件为，36摄氏度24小时；计数有效范围，15—150CFU/皿；计数方法为，需“证实实验”再计数。
这是为了保证在接种完水样之后，其浓度接近于单料的浓度。而单料的浓度是最适宜大肠菌群生长的。
例如：100ml水样+50ml三倍浓缩料，最后体积是150ml，三料被稀释了3倍，最后的浓度恰好是单倍料。
10ml水样可以加5ml单料也可以加10ml双料
1ml水样对浓度影响不大，就直接加单倍料里了。
主要是根据添加样品的量决定的，样品的量大的情况下，培养液稀释大，各种成分的相对浓度就会不足，就不能满足细菌的生长要求。所以就要用3倍乳糖蛋白胨液体培养基。
为什么乳糖胆盐培养基分单料和双料就是这个原因。楼上的同学说的比较具体。
村详健白： 3倍乳糖胨液体培养基(三倍料)是用来接种100ml或者10ml的水样,而普通浓度的乳糖蛋白胨液体培养基(单倍料)是用来培养接种1ml及以下体积的水样.这是为了保证在接种完水样之后,其浓度接近于单料的浓度.而单料的浓度是最适宜大肠菌群生长的.例如:100ml水样+50ml三倍浓缩料,最后体积是150ml,三料被稀释了3倍,最后的浓度恰好是单倍料.10ml水样可以加5ml单料也可以加10ml双料1ml水样对浓度影响不大,就直接加单倍料里了.
城阳区19887805955： 测定水中微生物(包括细菌真菌等)数量的方法怎样准确测定一定水质中微生物的数量?微生物的含量能否反应水的营养化程度? - ？
村详健白：[答案] 器材及培养 材料和试剂 蒸馏水, 自来水, 取自儿童公园的湖水, 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基. 仪器或其他用具 灭菌三角烧瓶, 灭菌带玻璃塞瓶, 灭菌培养皿, 灭菌吸管, 灭菌量筒. 研究方法 采用平板菌落记数技术测定水中细菌总数. 水样的采取 自...
城阳区19887805955： 细菌总数是怎么检验的? - ？
村详健白： 细菌总数是水质参数之一,指单位体积水中的细菌总量.其检验方法是:在玻璃平皿内,接种一毫升水样或稀释水样于加热液化的营养琼脂培养基中,冷却凝固后在37°C培养24小时,培养基上的菌落数或乘以水样的稀释倍数即为细菌总数.有...
城阳区19887805955： 测定水样是否符合饮用水的卫生标准,常用滤膜法测定大肠杆菌的总数.大肠杆菌在含有伊红美蓝的固体培养基(EMB培养基)上长出的菌落呈黑色.如图所... - ？
村详健白：[答案] (1)过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶,这些实验仪器都需要经过灭菌处理,与过滤有关的操作都要在酒精灯火焰旁进行,防止杂菌的污染. (2)待测水样过滤完之后,还有部分细菌吸附在滤杯杯壁上,此时可以在无菌条件下,用无菌水冲洗滤...
城阳区19887805955： 水中细菌如何测定 - ？
村详健白： 比浊法或血球计数法.
城阳区19887805955： 如何检测水中的细菌? - ？
村详健白：[答案] 如果水中细菌密度较小,就该应用无菌技术将待测水样通过专门过滤细菌的滤纸,这样细菌就都留在滤纸上了,再将滤纸铺到倒好平板的培养基中培养,长出菌落后数菌落数,数量除以过滤水的体积,就得出单位水样里的细菌数
城阳区19887805955： 液体如何测定细菌总数 - ？
村详健白： 不同的水是有不同的检测标准的. 如果是生活饮用水,则应该按照国家标准GB/T5750.12-2006上面的方法进行检测. 简单地说,就是吸取1ml水样注入无菌平皿中(如果水样比较脏,则需要做10倍、100倍……稀释),然后倾注灭菌好的并冷却到45度左右的营养琼脂15ml左右,经过48h培养,计算所生长的菌落总数,即为测得的每毫升菌落数(稀释者需要乘以稀释倍数). 具体您应该看标准GB/T5750.12-2006
城阳区19887805955： 细菌的测定和计量方式有哪些? - ？
村详健白： 对于生物氧化过程中的细菌,使用时需要知道菌液中所含的细菌数量.测定和计量细菌的数量一般有以下几种方法: (1)比浊法.其原理是因为菌体不透光,利用菌液所含细菌浓度不同,液体的浑浊度则不同,然后利用分光光度计测定菌液的...
城阳区19887805955： 水中细菌总量的测量方法？
村详健白： 就是用平板计数,也有卖测试卡的,就是省去了制作培养基的麻烦 道理是一样的 执行GB 5750.12《生活饮用水标准检验法 微生物指标》 计数是没问题的 简单的原理就是,通过培养,让单个菌繁殖成菌落,个头大了就看得清了,就可以肉眼读数了. 关键是选择稀释倍数, 具体您看看标准吧 方向是正确的 多做几个吧,至少也得从5~10, 要是实验室小就多培养几批 反正两天就出结果了 这和使用的语言关系 这是国标 并且是强制的 应该没问题 你好,晃荡匀了静止,取水样就行了 这个标准您看过吗? 您单位有实验室吧 要是有邮箱我可以发给你 这里好像不让贴附件 也许有这个功能我还没发现! 收邮件吧 可以这是国标
城阳区19887805955： 我想知道水中细菌总数的测定有什么标准吗 - ？
村详健白： 生活饮用水卫生标准 总大肠菌群(MPN/100mL或CFU/100mL) 不得检出 耐热大肠菌群(MPN/100mL或CFU/100mL)不得检出 大肠埃希氏菌(MPN/100mL或CFU/100mL)不得检出 菌落总数(CFU/mL) 100
