pcr如何实现高效性

作者&投稿:柘齿 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
如何提高PCR的扩增效率~

P不出来,如果引物没有问题那就是反应条件没有设置好了
首先看看你所用的酶的效率(普通Taq酶的效率为0.8~1.2kb/s),延伸时间是不是太短了,再看看酶活性是不是还好,做个阳性对照
其次看看退火温度,是不是过高或者过低
再次看看你的模板,如果是基因组DNA,跑跑胶看看有没有降解,量加的够不够(基因组属于复杂模板,起始量应稍大一点),如果是RT产物,量又不能加太多,RT体系里的成分会抑制PCR反应
最后看看你的时间,一般初始变性2~5min,变性20s~30s,退火20s~30s,延伸视长度而定,终延伸7~10min
以上差不多是做PCR基本的东西,仅供参考

1,科学设计引物,注意末端匹配度,无不必要互补,CG含量,酶切位点等。
2,增加循环数
3,提纯模板
4,用好的taq酶
5,降低退火温度(可能降低特异性)

PCR如何实现高效性?就是如何提高他的扩增效率的方法,一种提高pcr扩增效率方法,就是在反应体系中加入amp缓冲液。作为进一步改进的,所述提高pcr扩增效率方法的反应体系为20μlpcr扩增体系,dna聚合酶0.5μl,dntp为1μl,镁离子为1μl,引物各为1μl,扩增buffer为2μl,基因组dna稀释后浓度为5pg/μl,20μl体系中超纯水加入最大量为13.5μl。
提供一种新型的提高pcr扩增效率方法,能够解决现有的pcr扩增效率低下的问题,即使在比较粗的dna样品,微量dna样品,甚至存在pcr抑制的相关条件下,也能取得较好的扩增效果。
以上答案仅供参考。


CR的成像原理是什么?
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