荧光定量pcr原理
荧光定量PCR原理：
随着PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。
荧光定量PCR最早称TaqMan PCR，后来也叫Real-Time PCR，是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的
一般而言，荧光扩增曲线可以分成三个阶段：荧光背景信号阶段，荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖，无法判断产物量的变化。
而在平台期，扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系，根据最终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。
只有在荧光信号指数扩增阶段， PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系，我们可以选择在这个阶段进行定量分析。为了定量和比较的方便，在实时荧光定量 PCR 技术中引入了两个非常重要的概念：荧光阈值和 CT值。
荧光域值（threshold）
是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上，但一般荧光域值的缺省设置是PCR反应前3-15个循环荧光信号标准偏差的10倍，即threshold。
Ct 值：是指每个反应管内的荧光信号到达设定域值时所经历的循环数。
Ct值与起始模板的关系：
研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。
利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代表Ct值如下图所示。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。
荧光定量检测
荧光定量检测根据所使用的标记物不同可分为荧光探针和荧光染料。荧光探针又包括Beacon技术（分子信标技术，以美国人Tagyi为代表）、 TaqMan探针（以美国ABI公司为代表）和FRET技术（以罗氏公司为代表）等；
荧光染料包括饱和荧光染料和非饱和荧光染料，非饱和荧光染料的典型代表就是现在最常用的SYBR GreenⅠ；饱和荧光染料有EvaGreen、LC Green等。
嵌合荧光染料法（SYBR GreenⅠ）
SYBR Green I是荧光定量PCR最常用的DNA结合染料，与双链DNA非特异性结合。在游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合，其荧光增加1000倍。所以，一个反应发出的全部荧光信号与出线的双链DNA量呈比列，且会随扩增产物的增加而增加。
普通pcr引物设计和荧光定量pcr引物设计的区别
一、方法不同 1、普通pcr引物设计：引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。2、荧光定量pcr引物设计：通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，标记跟踪PCR产物进行实时监测反应，利用与之相适应的软件对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度 二、原理不同 1、普通pcr引物设计：为了找到一对合适的...
荧光定量PCR对初始模板量进行定量分析的原理是什么?
基于以下的理论。1. 每一个循环都会扩增一倍 2. 引物扩增的效率一致 所以，如果结果X循环，产物得到了2的X次方。如果起始模板只有一半量，那产物就是2的（x-1)次方。如果起始模板的量是一倍，那产物就是2的（x+1）次方，以此类推。只要在产物指数增加的阶段测量扩增曲线，就可以计算出起始模板的量...
实时荧光定量pcr仪的技术原理
PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数方式增加的，随着反应循环数的增加，最终PCR反应不再以指数方式生成模板，从而进入平台期。在传统的PCR 中，常用凝胶电泳分离并用荧光染色来检测PCR反应的最终扩增产物，因此用此终点法对PCR产物定量存在不可靠之处。在real-time Q-PCR中，对整个PCR反应扩增过程进行了...
实时荧光定量pcr内参是什么东西
实时荧光定量pcr内参是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。
请问:做荧光定量PCR时,△△Ct值是什么意思,它的计算公式是什么?_百度...
△△Ct是荧光定量计算公式的简化形式，用于比较不同样品之间的差别或变化比率。Ct=-1\/lg(1+Ex)*lgX₀+lgN\/lg(1+Ex)，其中，n为扩增反应的循环次数，X₀为初始模板量，Ex为扩增效率，N为荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量。△Ct(n)=Ct（目的基因）-Ct（内参基因）；△△CT(...
qpcr原理及应用
qpcr原理是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。因而发达国家在相关方法和仪器方面的研发非常快，成为分子生物学诊断的主流。应用行业：各级各类医疗机构、大学及研究所、CDC、检验检疫局、兽医...
一文知晓PCR,定量PCR,数字PCR方法选择
PCR技术在不断地蜕变却从未淡出我们的视野，如今已经渗透到分子生物学领域的各种研究层面。尤其在今年全球大流行疾病中，展现了PCR技术的强大之处。那在科学研究中，我们该如何选择传统PCR 、荧光定量 PCR与数字 PCR呢？首先我们要清楚，三代PCR技术所有的基础源于PCR反应的基本原理和PCR反应的3个重要阶段...
PCR,RT-PCR,实时荧光定量PCR的区别与联系
1、所说的PCR应该就是最常规的PCR，以DNA为模板，通过上下游引物，实现DNA的扩增。2、RT-PCR一般情况下是指反转录PCR（reverse transcription），尽管有些资料上说实时荧光定量PCR也（realtime fluores-cence quantitative PCR）也简称RT-PCR，但是这是不对的，不推荐。基本操作过程是将所提取的RNA进行...
qpcr原理及应用是什么?
PCR，全称为聚合酶链反应，其核心原理是利用DNA的半保留复制特性进行体外扩增。首先，双链DNA在高温下解旋，然后在低温下通过引物的互补配对进行复性。关键的突破是耐热DNA聚合酶Taq酶的发现，它允许在高温下进行反应，无需每次循环都添加新酶，大大简化了过程并降低了成本。PCR技术的三个基本步骤包括变性（...
实时荧光定量PCR的介绍
实时荧光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。·Real-timePCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期...
凭贺复方：[答案] 聚合酶链式反应 ( PCR) 可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增 .在扩增反应结束之后,我们可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析,也可以通过 放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析 .无论定性还是定量分析,分析的...
诸暨市13772223736： 荧光定量PCR对初始模板量进行定量分析的原理是什么? - ？
凭贺复方：[答案] 基于以下的理论. 1.每一个循环都会扩增一倍 2.引物扩增的效率一致 所以,如果结果X循环,产物得到了2的X次方.如果起始模板只有一半量,那产物就是2的(x-1)次方.如果起始模板的量是一倍,那产物就是2的(x+1)次方,以此类推. 只要在产物...
诸暨市13772223736： PCR技术原理是什么? - ？
凭贺复方： 原发布者:yqjklhq 一.简述PCR基本原理?PCR技术的基本原理 类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物.PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右...
诸暨市13772223736： 定量PCR的过程及原理 - ？
凭贺复方： http://baike.baidu.com/view/1478017.htm
诸暨市13772223736： 实时定量PCR基本原理如何? - ？
凭贺复方： 实时PCR(real—time polymerase chain reaction)又称荧光定量PCR或TaqMan PCR,是美国PE公司(Perkin Elmer)于1995年研制出的一种新的核酸定量技术.该技术在常规PCR基础上运用荧光能量传递(fluorescence resonance energy ...
诸暨市13772223736： 实施荧光定量PCR的原理及使用方法？
凭贺复方： 荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种:荧光探针和荧光染料. 原理: PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团.探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'端-3'端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步.
诸暨市13772223736： 实时荧光定量PCR与普通PCR的区别是什么?结果有何异同?能说明的问题是什么? - ？
凭贺复方：[答案] 原理不同:荧光定量pcr实时监测与dna结合的荧光染料激发的荧光;普通pcr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量,一般是紫外光. 反应要求:荧光定量对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp;普通定量可以扩增长点的片段....
诸暨市13772223736： 求荧光定量PCR分析基因多态性原理及举例,谢谢! - ？
凭贺复方： 原理:在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法.举例:临床疾病诊断:各型肝炎、艾滋病、禽流感、结核、性病等传染病诊断和疗效评价;地中海贫血、...
诸暨市13772223736： 荧光定量PCR的 简单解释 - ？
凭贺复方： 荧光定量PCR是( realtime fluores-cence quantitative PCR,RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术,它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度.
