荧光素fitc标记抗体的方法 是什么方法
免疫荧光技术是将荧光素如异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)与相应抗体（或抗原）以化学的方法结合，将荧光标记抗体（或抗原）与标本中相应的抗原结合形成荧光标记的抗体- 抗原复合物，用荧光显微镜观察。在镜下见到有荧光存在即推断有抗原抗体复合物的存在，根据已 知的抗体（或抗原）即可推知另一个未知抗原（或抗体）的存在。直接免疫荧光法 直接免疫荧光法是利用荧光色素标记的特异性抗体直接与相应的抗原结合，以鉴定未知抗原。本法具有操作简单、时程短、特异性高的优点，但也 存在缺点如不能检查抗体，敏感性较差。（1）在标本上滴加荧光素标记抗体，放入湿盒中。37℃温育30min。 （2）PBS 冲洗后，再用PBS分三缸浸泡，每缸3min。（3）PBS浸泡1～2min，风干。（4）缓冲甘油封片。在荧光显微镜下观察。进行直接免疫荧光法时应注意：①温育时一定要将玻片放在湿盒中，以防液体蒸发。②用PBS浸泡时应不断振荡。 2. 间接免疫荧光法 间接免疫荧光法以荧光素标记抗球蛋白抗体，抗体与相应抗原结合后，荧光标记的抗球蛋白抗体与已结合的抗体发生作用，从而推知抗原或抗体的 存在。间接荧光技术可以用已知的抗原检测未知的抗体，也可用已知的抗体测出未知抗原。现以检测流行性热病毒抗体（IgM）为例介绍如下：（1）将待测病人血清加至抗原片（流行性热病毒感染的Vero-E6细胞片）上，每个稀释 度加2孔，最后2孔加PBS做对照。将玻片放置湿盒中，37℃温育 60min。取出玻片，弃去反应液，用PBS洗涤5min，风干。（2）加入1∶40稀释的FITC标记的羊抗人IgM，37℃温育60min。取出玻片，按步骤2洗涤，风干。（3）PBS甘油封片，荧光显微镜下观察。阳性结果：在细胞膜及细胞质中可见颗粒状荧光颗粒，细胞核 呈红色。注意事项：温育时将玻片放在湿盒中，以防液体蒸发。选择低温、干燥、洁净的环境风干。
这四个不是一码事，HRP和AP是酶，二抗上挂了酶，要给相应的底物才能显色，显色方式可以通过发荧光也可以不发荧光（例如给予ECL底物，其中的H2O2和鲁米诺在HRP的作用下，能在黑暗中发出荧光；也可以给予双氧水和DAB，反应产生棕色不溶于水的物质）；FITC为异硫氰酸荧光素，本身就是黄绿色荧光，二抗结合后可直接在荧光显微镜下观察；生物素一般也是挂在二抗上的，利用卵白素分别连接生物素标记的第二抗体和生物标记的酶，由酶催化底物，生成终产物，这个终产物也是不溶于水的。
免疫荧光技术是将荧光素如异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)与相应抗体（或抗原）以化学的方法结合，将荧光标记抗体（或抗原）与标本中相应的抗原结合形成荧光标记的抗体- 抗原复合物，用荧光显微镜观察。在镜下见到有荧光存在即推断有抗原抗体复合物的存在，根据已 知的抗体（或抗原）即可推知另一个未知抗原（或抗体）的存在。
直接免疫荧光法 直接免疫荧光法是利用荧光色素标记的特异性抗体直接与相应的抗原结合，以鉴定未知抗原。本法具有操作简单、时程短、特异性高的优点，但也 存在缺点如不能检查抗体，敏感性较差。
（1）在标本上滴加荧光素标记抗体，放入湿盒中。37℃温育30min。
（2）PBS 冲洗后，再用PBS分三缸浸泡，每缸3min。
（3）PBS浸泡1～2min，风干。
（4）缓冲甘油封片。在荧光显微镜下观察。
进行直接免疫荧光法时应注意：①温育时一定要将玻片放在湿盒中，以防液体蒸发。②用PBS浸泡时应不断振荡。
2. 间接免疫荧光法 间接免疫荧光法以荧光素标记抗球蛋白抗体，抗体与相应抗原结合后，荧光标记的抗球蛋白抗体与已结合的抗体发生作用，从而推知抗原或抗体的 存在。间接荧光技术可以用已知的抗原检测未知的抗体，也可用已知的抗体测出未知抗原。现以检测流行性热病毒抗体（IgM）为例介绍如下：
（1）将待测病人血清加至抗原片（流行性热病毒感染的Vero-E6细胞片）上，每个稀释 度加2孔，最后2孔加PBS做对照。将玻片放置湿盒中，37℃温育 60min。取出玻片，弃去反应液，用PBS洗涤5min，风干。
（2）加入1∶40稀释的FITC标记的羊抗人IgM，37℃温育60min。取出玻片，按步骤2洗涤，风干。
（3）PBS甘油封片，荧光显微镜下观察。阳性结果：在细胞膜及细胞质中可见颗粒状荧光颗粒，细胞核 呈红色。
注意事项：温育时将玻片放在湿盒中，以防液体蒸发。选择低温、干燥、洁净的环境风干。
保凡阿托： FITC 标记抗体-Chadwick氏法 试剂: 抗体球蛋白溶液、异硫氰酸荧光素、3%重碳酸钠水溶液、pH8.0的0.01mol/L PBS、1%硫柳汞; 材料: 离心机及离心管、三角烧瓶(25ml)、冰槽、无菌吸管及毛细滴管、透析袋、玻璃棒、棉线及烧杯(500ml)等; 方法与步骤: 1.
鄯善县13722828791： 搅拌标记法是什么? ？
保凡阿托： 搅拌标记法为:先将待标记的蛋白质溶液用0.5ml/LpH9.0的碳酸盐缓冲液平衡,随后在磁力搅拌下逐滴加入FITC溶液,在室温持续搅拌4~6h后,离心,上清即为标记物.此法适用于标记体积较大,蛋白含量较高的抗体溶液.
鄯善县13722828791： 如何在抗体上标记荧光 透析方法 - ？
保凡阿托： 透析标记法 此法适用于小量抗体的荧光素标记,标记简便,非特异性染色较少.(1)试剂和材料 试剂和材料同改良法.(2)方法及步骤 ①用0.025mol/L碳酸盐缓冲液pH9.0,将欲标记免疫球蛋白稀释成1%浓度,装入透析袋中.②用同一缓冲液将FITC配成0.1mg/ml的溶液,按10mg/ml球蛋白溶液体积的10倍,将FITC稀释液盛于圆柱形容器内,并使透析袋浸没于FITC液中.③容器顶端盖紧,底部放搅拌棒,在4~C电磁搅拌下透析标记24h.取出透析袋中标记液,即刻用SephadexG50凝胶过滤,去除游离荧光素,分装,贮存于4℃中.
鄯善县13722828791： 间接免疫荧光法和细胞转染实验方法的区别是什么 - ？
保凡阿托： 免疫荧光技术是将荧光素如异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)与相应抗体(或抗原)以化学的方法结合,将荧光标记抗体(或抗原)与标本中相应的抗原结合形成荧光标记的抗体- 抗原复合物,用荧光显微镜观察....
鄯善县13722828791： 荧光二抗标记用HRP、AP、FITC、生物素法各发什么颜色荧光? - ？
保凡阿托： 这四个不是一码事,HRP和AP是酶,二抗上挂了酶,要给相应的底物才能显色,显色方式可以通过发荧光也可以不发荧光(例如给予ECL底物,其中的H2O2和鲁米诺在HRP的作用下,能在黑暗中发出荧光;也可以给予双氧水和DAB,反应产生棕色不溶于水的物质);FITC为异硫氰酸荧光素,本身就是黄绿色荧光,二抗结合后可直接在荧光显微镜下观察;生物素一般也是挂在二抗上的,利用卵白素分别连接生物素标记的第二抗体和生物标记的酶,由酶催化底物,生成终产物,这个终产物也是不溶于水的.
鄯善县13722828791： 关于细胞免疫荧光染色的问题 - ？
保凡阿托： (1)你的二抗是用FITC标记的,为避免荧光分解,分装及荧光显微镜观察时均要避光; (2)封片最好用甘油加0.5mmol/L pH9.0-9.5的碳酸氢盐缓冲液,后者能使玻片透明; (3)关于免疫酶染色,如果是用过氧化物酶做标记,就必须用3%H2O2...
鄯善县13722828791： 细胞凋亡的早期检测方法有哪些 - ？
保凡阿托： 1、PS(磷脂酰丝氨酸)在胞外膜分布的检测 PS从胞膜内侧转移到外侧现象是在细胞凋亡的早期即可发生标志.AnnexinV是一种钙依赖性的磷脂结合蛋白,能专一性的结合暴露在胞膜外侧的PS,使用荧光素标记的AnnexinV 蛋白(如Annexin ...
鄯善县13722828791： 细胞可不可以直接用fitc荧光标记 - ？
保凡阿托： FITC只是一种荧光素,细胞并不能特异性地和该染料结合.FITC一般都是先结合到抗体,或者其他可以和细胞特异性结合的物质上,再用后者来标记细胞的.
鄯善县13722828791： 免疫荧光显微技术的检测流程是怎样的呢? ？
保凡阿托： (一)标本的制作 荧光显微技术主要靠观察切片标本上荧光抗体的染色结果作为抗原的鉴定和定位.因此标本制作的好坏直接影响到检测的结果.在制作标本过程中应力求...
鄯善县13722828791： 抗胰导细胞抗体(间接荧光法)具体操作步骤 - ？
保凡阿托： 1,稀释后血清(1:10)加30微升到生物膜上,室温闭光3小时.2,PBS吐温缓冲液震荡洗15分钟.3,加25微升FITC标记的荧光二抗,室温30分钟.3,同上清洗,封片.
