蛋白表达不同检测方式的比较和分析
原理: 免疫组化，是应用免疫学基本原理一-抗原抗体反应， 即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
特点: 是融合了免疫学原理(抗原抗体特异性结合)和组织学技术(组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等)，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色，来对组织(细胞)内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。样本是
细胞或组织，要在显微镜下观察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。
原理: 蛋白质印迹法是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。
特点: 先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体.上，而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。
原理: 酶联免疫吸附剂测定法，简称酶联免疫法，或者ELISA法，它的中心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。
特点: 用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培养上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区别，操作上开始需要将抗原或抗体结合到固相载体表面,从而使后来形成的抗原抗体-酶底物复合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。
免疫组化和elisa所用到的原理大致相同，只是因为所检测的样品不同，从而在操作方法上有所不同。Elisa多用于定量分析，其灵敏度非常高。
以下是western和ELISA的区别:
检测组织细胞中的蛋白表达的方法有哪些
抗原-抗体杂交，以及对RNA进行分子杂交。
如何检测一个细胞中的蛋白质表达量?
实时荧光定量PCR检测mRNA的表达，然后westernblot检测蛋白表达量。
检测蛋白质表达除了Western blot,还有什么方法?
如果是体内的，western是比较好的方法；如果是分泌蛋白，则可以用ELISA；如果是外源转染进去的，则可以融合一个GFP什么的进去，看荧光就行了。还是得看你想怎么做，还有你的蛋白是什么状态的。上面
各种白介素测定量的区别
1、检测方法不一样：免疫学检测是通过化学发光或者酶联免疫等方法，检测IL-6、IL-8等因子的含量水平；而生物学检测则是通过细胞培养等方法，检测IL-6等因子的生物学活性。2、检测范围不同：免疫学检测一般只能检测单个白介素的水平，如IL-6、IL-8等；而生物学检测可以同时检测多个白介素的活性。3...
尿微量白蛋白的尿微量检测
应用较多的是免疫透射比浊法，但报告方式不一，有的以每升尿中白蛋白量表示，有的以24小时排泄量表示，常用的报告方式是以白蛋白\/肌酐比值报告。我们以不同表示方法对正常人尿白蛋白的正常值进行了统计分析，并对部分高血压、糖尿病患者进行测定，现报告如下。 1.仪器与方法：尿微量白蛋白测定试剂盒，...
动物实验,Western blotting和免疫组化,选择哪个检测蛋白表达?
免疫印迹如果结合凝胶成像的话（带相关分析软件），他是可以定量的，但多用来做体外培养的细胞；免疫组化就是针对组织切片的，可以定性、半定量（即看出个大小的关系）。如果你要是做动物实验组织的话，最专业也是最对口的还是做免疫组化。这个两种方法检测出来结果的意义是一样的，都能说明抗癌的具体通路...
常见的融合蛋白表达标签——总结
在生物药研发生产过程中，融合蛋白表达常常通过将目的蛋白与特定的标签蛋白结合，以增强其特性并便于纯化。本文将介绍一些常见的融合蛋白标签及其应用。纯化标签 His标签：以六个组氨酸组成的轻质标签，能用于检测和纯化，特别适用于疏水性强或包涵体蛋白的分离。其优点包括：不影响蛋白功能，能在非离子和变...
Label Free(非标记蛋白质组学技术)
定量蛋白质组学是研究基因在不同条件下的表达情况。鸟枪法蛋白质组学及多维蛋白质鉴定成为研究复杂生物样本中大规模蛋白质表达和定性定量分析的有力工具。非标记策略的定量模型涉及两种算法：基于肽段色谱峰积分面积比较蛋白质丰度，或通过归一化表示蛋白质相对丰度。非标记技术认为肽段在质谱中的检测频率与其...
从转录水平检测甲胎蛋白基因表达情况的方法有哪些
1 western bloting a.将编码目标蛋白基因通过载体进行体外重组，然后导入宿主细胞表达 b.将目标蛋白注入兔子或其他动物体内获得一抗 c.将样品蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳、转移、吸附固定 d.用一抗与之杂交再用二抗检测其是否表达 2 fluorescent real-time PCR a.提取样品总RNA，再通过超速离心获得mRNA b...
检测基因表达的方法有哪些
2、免疫学检测法：通过目的蛋白（抗原）与其抗体的特异性结合进行检测，具体方法有Western杂交、酶联免疫吸附法（ELISA）及免疫沉淀法；3、生物学活性的检测。Western杂交是将聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳分离抗原（Antigen）固定在固体支持物上（如硝酸纤维素膜，NC膜）。不同分子量大小的蛋白质在凝胶中...
姜霭艾附： 流式细胞仪当然可以检测细胞内蛋白,这一点,并不是很难,当然要比检测细胞表面抗原复杂些,好在都已经有现成的方法,不成问题. 不过流式的应用原理主要还是抗原和抗体反应和western、免疫组化没有本质差别,但是由于免疫组化和...
昌邑区17341335371： 请问用免疫组化半定量分析某组织中某种蛋白的表达,优缺点是什么? - ？
姜霭艾附： 这三个方法检测蛋白灵敏度不同,逐渐增高,免疫组化理论上可以半定量,但是得看你检测的指标敏感度如何,如果本来表达就低,根部定不了量,WB可以定量,建议如果做科研建议先做组化,在做wb
昌邑区17341335371： 说明常用蛋白质测定方法的原理,并对各种方法加以比较 - ？
姜霭艾附： 1、凯氏定氮法 准备4个50mL凯氏烧瓶并标号,想1、2号烧瓶中加入定量的蛋白质样品,另外两个烧瓶作为对照,在每个烧瓶中加入硫酸钾-硫酸铜混合物,再加入浓硫酸,将4个烧瓶放到消化架上进行消化.消化完毕后进行蒸馏,全部蒸馏完...
昌邑区17341335371： 蛋白质含量测定的不同方法比较 - ？
姜霭艾附： 蛋白质含量测定法,是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一.目前常用的有四种古老的经典方法,即定氮法,双缩尿法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法.另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法,即...
昌邑区17341335371： 检测蛋白质表达除了Western blot,还有什么方法 - ？
姜霭艾附： 你能否说的详细一点呢?你想要怎么做?至少说,你想看的蛋白是体内的,还是外源转染进去的质粒表达的? 如果是体内的,western是比较好的方法;如果是分泌蛋白,则可以用elisa;如果是外源转染进去的,则可以融合一个gfp什么的进去,看荧光就行了.还是得看你想怎么做,还有你的蛋白是什么状态的. 上面有人说rt-pcr,检测mrna是一种间接的途径.如果此蛋白有转录后调控的机制,则mrna的量不能反应蛋白的量.
昌邑区17341335371： 检测组织细胞中蛋白表达的方法?各自有何优缺点? - ？
姜霭艾附： 直接检验产物或者检验mRNA 没啥优缺点 产物比较好检验吧
昌邑区17341335371： 目前常用的检测基因mRNA蛋白表达的方法有哪些? ？
姜霭艾附： 检测基因蛋白表达的方法有:免疫印迹法.免疫组织化学法.ELISA法.流式细胞术检测法.这在实际的操作过程中要注意使用.
昌邑区17341335371： 如何检测一个细胞中的蛋白质表达量 - ？
姜霭艾附： 实时荧光定量PCR检测mRNA的表达,然后westernblot检测蛋白表达量. 首先你确定拿到了这两种细胞系,通过PCR反应证明一个是野生型一个是突变型,即snp.然后用试剂盒提取RNA,设计引物,采用半定量或绝对定量的方法,测定mRNA表达水平;然后另取细胞裂解,提取总蛋白,用特异性抗体检测蛋白表达量.
昌邑区17341335371： 比较分光光度法测定蛋白质含量与其他几种常用蛋白质测定方法的优缺点?很急!在线等答案! - ？
姜霭艾附：[答案] 优点:1、测量灵敏度高,快速,方便. 2、低浓度蛋白质含量可检测. 缺点:1、容易受溶液中杂质的影响. 2 、标准曲线不易做准确.
昌邑区17341335371： 各种蛋白互作检测方法有哪些优缺点? - ？
姜霭艾附： 双杂交技术 原理基于真核细胞转录因子的结构特殊性,这些转录因子通常需要两个或以上相互独立的结构域组成.分别使结合域和激活域同诱饵蛋白和猎物蛋白形成融合蛋白,在真核细胞中表达,如果两种蛋白可以发生相互作用,则可使结合域...
