某细菌在培养过程中菌体数量急剧减少如何证明该细菌感染了噬菌体如何筛选该细胞的抗噬菌体突变珠

作者&投稿:刁杭 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
某细菌在培养过程中菌体数量急剧减少如何证明该细菌感染了噬菌体如何筛选该细胞的抗噬菌体突变珠~

做一个电镜检测,可以看到噬菌体就是。筛选时,先涂布细菌,再涂布噬菌体悬液,能长成菌落的就是抗噬菌体的。

噬菌体有烈性的和非烈性噬菌体。烈性的噬菌体侵染细菌后会快速造成细菌菌体裂解,培养液呈现清凉透明有破碎残渣。非裂解性的可以铺顶层琼脂板(可以查阅噬菌体滴度的测试实验方案),培养后看顶层琼脂层中有没有噬菌斑,也可以在底层培养基中加些IPTG/X-gal若噬菌体带有lacZ的还有蓝白斑筛选的作用(如M13KE的噬菌斑显现蓝斑)。

证明方法如下:

方法一:利用噬菌体与细菌的个体差异(优点是简单高效,无需高精尖设备)

     噬菌体是细菌的病毒,噬菌体分为烈性噬菌体和温和型噬菌体,具有以下特性,个体非常小,一般为纳米级别,而细菌一般为微米级别,可以用滤膜将噬菌体从含有噬菌体的细菌培养液/细胞悬液中分离出来,具体操作如下:

  • 将怀疑有噬菌体污染的细菌培养液(液体培养基)/细胞悬液(固体培养基上刮取样品于无菌水/生理盐水/PBS缓冲液中悬浮)用无菌注射器通过0.22微米无菌水性滤膜,因为细菌是无法通过滤膜的,而噬菌体可以通过。

  • 将滤液接种到无噬菌体污染的已经培养过一段时间的细菌培养液或固体培养基上,如果有噬菌体则细菌培养液因噬菌体而裂解后有浑浊变澄清,或者固体培养基上的细菌菌落因噬菌体裂解出现菌落变透明(噬菌斑),那么就证明该细菌感染了烈性噬菌体。反之,可能是感染了温和型噬菌体,噬菌体整合到了细菌的染色体或质粒上了,这个时候需要提取细菌的总DNA,设计能够检测噬菌体的引物通过PCR来进行检测(噬菌体一般通过重复回文序列插入到细菌的基因中,具体可以查文献看该细菌一般有什么噬菌体,怎么检测)。

方法二:分子生物学方法(核酸检测是金标准,需具备分子生物学实验室条件)

    直接设计能够检测噬菌体的引物通过PCR来进行检测(噬菌体一般通过重复回文序列插入到细菌的基因中,具体可以查文献看该细菌一般有什么噬菌体,怎么检测)。

    方法三:电镜检测法(电镜直接检测,这个需要实验室具备电镜这样的设备)

    关于筛选抗噬菌体突变株,这个就比较简单了,简述步骤如下:

  • 首先建立突变体系获得诱变菌种,比如加入诱变剂、紫外诱变、高温诱变等等,诱变方法有很多种,可以根据实验室的实际情况选择。

  • 将通过过滤分离的到的噬菌体接种到已经培养过一段时间的突变细菌培养液或固体培养基上,如果细菌培养液的浑浊度没有收到影响(与没有接种噬菌体的细菌培养物对比,比如测OD值),或者固体培养基上的细菌菌落也没有受到影响,那么恭喜你,你筛选到了噬菌体抗性菌株。

  • 这里可以采用固体培养涂布筛选法,也可采用液体培筛选法,或者边突变边筛选,很多方法都可以组合,最好能设计高通量筛选方法,这方面可以去查相关文献。




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2的10次方

细菌的菌落特征
2、形状:细菌菌落的形状可以反映细菌的种类和生长特性。不同种类的细菌在生长过程中会形成不同的菌落形状,如圆形、椭圆形、不规则形等。此外,一些细菌在生长过程中还会形成特殊的结构,如芽孢、荚膜等,这些结构也可以通过菌落特征观察到。3、隆起度:细菌菌落的隆起度可以反映细菌的代谢活动和培养基...

如果为接种大肠杆菌的用于对照的培养基在培养过程中长出菌落,可能原因...
1、你说的对照指的是未接种细菌的空白对照么?如果是的话就说明操作的整个环节的至少一个地方存在污染,比如灭菌不彻底,操作不规范等等。2、接种大肠杆菌的培养基,除了接种大肠杆菌是否还有其他添加物?有的话其他菌落就是在添加物里的,没有添加物则是接种的时候本来就存在其他杂菌。

拜泉县15535794302: 细菌培养较少时用什么方法增加数量 -
伍祁乙酰: 可以通过离心浓缩菌液.

拜泉县15535794302: 培养酵母菌时酵母菌的数量先增加后减少的原因是什么? -
伍祁乙酰: 先增加是因为酵母菌在不断繁殖而此时酵母菌总量较少环境压力小呈J型增长曲线.后减少是因为酵母菌数量增多的同时营养物质被消耗,单位面积内的酵母菌数量达到了饱和.当营养完全被消耗时酵母菌将全部死亡.

拜泉县15535794302: 细菌的死亡菌数远远大于活菌数的阶段是 -
伍祁乙酰: 细菌培养的第四个时期:衰亡期.进入这一时期营养物质消耗基本完毕,有害次级代谢产物积累,菌体形变或自溶,细菌数量急剧减少.

拜泉县15535794302: 如果在一个培养基中,细菌数量如何变化 -
伍祁乙酰: 空白的培养基中,接种后,细菌发展时期为:迟缓期(调整期)、对数期、稳定期、衰亡期.其中,迟缓期(调整期)是细菌对新环境的适应过程,该时期细菌不进行复制增殖,若环境恶劣,则迟缓期较长,甚至导致菌种死亡.对数期指细菌开始稳定复制增殖,该时期增殖量大于死亡量.稳定期,由于培养基空间、营养物质限制,或细菌增殖过程中产生的毒害物质超过菌体的耐受能力,细菌增殖能力受到抑制,细菌增殖量减少、死亡量增多,稳定期细菌增殖量与死亡量逐渐持平,培养基中活菌数目保持不变.衰亡期,细菌增殖能力进一步减弱,死亡量进一步增多,死亡量大于增殖量,培养基中活菌数目开始减少.微生物培养时,应在对数期将菌种转移至新的培养基中.

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拜泉县15535794302: 某种细菌在培养过程中,每30分钟分裂一次(一个分裂为两个),经过4小时,这种细菌由1个繁殖成多少个. -
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拜泉县15535794302: 细菌生长曲线分为哪四期?各期有哪些特点 -
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