临床生物化学的研究方法

生物化学知识在临床运用有哪些途径~

生物化学所学东西比较广泛，也比较杂，对临床运用很有用处。

————————————上海精锐教育青浦中心

怎么说，不是一句两句啊，随着自动化水平提高现在很多已经淘汰啦，常用的可那还有蛋白电泳，特种蛋白，个别地区的淀粉酶，其他的很少啦。

临床生物化学在方法建立的原理确定后，尚需根据其原理来选择合适的条件，以保证所建的方法可靠。下面以光度法为例介绍其条件选择的主要环节。颜色反应是光度分析的基础，因此，用作光度测定的颜色反应至少要具备以下几条：反应有较高的特异性，从而干扰小；反应产生的有色物质吸光系数要大，大者灵敏度高；有色产物的离解度要小，小则稳定；此外，还要求有色产物有恒定的组成成分，使产生的颜色稳定。由于影响颜色反应的因素很多，如温度、pH、试剂浓度、反应的时间等等。这些因素在建立新方法时都要逐项试验，确定最佳实验条件。
选择合适的吸收光谱
实际上就是测定颜色反应产生的光吸收曲线。方法是在整个可见光区（400-700nm）以10nm（在接近最大吸收波长范围还应再细分）间隔。分为十几个点测定其在不同波长时的吸光度，然后以吸光度为纵坐标，波长为横坐标绘成光吸收曲线。在条件许可的情况下，应采用双光束分光光度计在可见光区进行波长扫描，结果较为可靠。同时，还应以同法分别测定其空白液和标准物颜色产物的吸收曲线。测定光吸收曲线的目的是找出最大吸收波长，作为光度法波长选择的依据。因为在最大吸收波长测定，可获得最大灵敏度，且能更符合比耳定律。然而在实际使用中，不能单纯考虑灵敏度高，还要考虑在测定浓度范围能否符合比耳定律，并能在光度计准确区域内（吸光度0.2-0.85之间）读出读数。有时由于测定的最大吸收波长并不是所要测定物质的特性吸收波长，即同时存在具有相似最大吸收的干扰物质，为了保证实验的特异性，常改用特有而非最大吸收波长进行测定。例如用磷钼酸测定血糖，选用波长420nm，溶液对此波长的吸收比其它波长光线的吸收都低，其目的是使参考值有一个较低的吸收，这样可允许在相同情况下对高出参考值的血糖也能得到准确的读数。因为在这项测定中，高血糖是常见的变化方向。
测定方法适用的浓度范围
根据光吸收定律，溶液的吸光度应与溶液的浓度成正比。但由于有色物质的电离、水解、缔合等原因当溶液稀释或增浓时，有色物质颜色的深浅并不按比例降低或增高，因而也就不符合光吸收定律。测定方法适用的浓度范围是指分析的浓度范围在直线线性段，浓度与吸光度之比为一常数，此时直线上任何一点的斜率tanθ相等，即：
tanθ=A1/C1=A2/C2=A3/C3=……=An/Cn=K
此处K即为校正常数，可用于结果计算。
通常稀溶液都是符合比耳定律的，但在浓度过高和过低时往往都不呈直线，说明低浓度部分亦有仪器的灵敏度和方法的检测能力限制，所以，具体的测定就宜选择在直线段浓度范围内进行。以此还可用于确定标本的用量，使具有临床意义的标本测定结果都落在直线范围内。
观察影响颜色反应的因素
影响颜色反应的主要因素有：溶液pH的影响、杂质的影响、反应的温度和时间、以及颜色的稳定性等。这些都是光度法测定误差的主要来源。都需要通过实验来观察并控制在一个适宜的范围内。从而保证方法的准确性和精密性。
溶液pH的影响有些溶液的颜色对pH值的改变非常灵敏。例如白蛋白在pH4左右可与溴甲酚绿结合后由黄色变成绿色，绿色的深浅与白蛋白浓度成正比，但是溴甲酚绿本身是一种pH指示剂，当pH5.4时即由黄色转变成绿色，在pH3.8时又由绿色变为黄色。在白蛋白与溴甲酚绿结合颜色反应中，如pH控制不好就很容易出现误差，又如每种酶都有各自的最适pH，酶促反应中，只有在其最适pH时才能发挥充分的催化活性。因此，在建立方法时可在不同pH值条件下（其它条件不变）令其反应，以观察颜色反应的吸光度变化，从而选择合适的pH值范围来保证颜色反应，以求较高的灵敏度和较好的线性。有时还需用相应的pH缓冲液来维持反应的pH，以利颜色反应的正常进行。
杂质的影响由于临床生化标本中除含待测物质外，还含有许多非测定物质，成分十分复杂，它们有的可与有色产物作用，使产生的颜色逐渐退去，有的与待测物质相类似，也能缓慢地与显色试剂生成有色化合物或沉淀，有的本身是有色的等，都会影响被测物溶液的颜色。试验方法是将各种可疑物质的纯溶液作标本单独进行测定，如产生颜色反应，这说明该方法的特异性不高。如果将待测物质混入可疑物质作标本测定，改变了被测物质与试剂间的反应，这是干扰。为此就需要进一步改进方法，或设立标本空白，或将标本作适当处理，除去干扰物，或加入合适的干扰物掩蔽剂等，以提高方法的特异性。
反应的温度和时间有些有色物质能迅速反应生成，另一些有色物质须经过相当长时间后反应才能完全。提高反应的温度可以加速化学反应，缩短反应的时间。因此，如果在不恰当的温度和时间内进行比色，将会造成相当大的误差。这可以在不同的温度下（如设定25℃，30℃，37℃）令其反应，通过检测吸光度来观察各自反应终点时间（一般达到反应终点，随后测定的吸光度不再变化），以选定适宜临床应用的反应最佳温度和时间。
稳定性试验待测物质经显色反应产生的有色物稳定与否，关系到测定结果的可靠性。某些有色物质虽然生成很快，但却不太稳定，放置后色泽会逐步消退或起变化，有些干扰物虽不能与被测物质同时发生颜色反应，但当放置一段时间后也能缓慢地与试剂显色，使溶液颜色加深。因此，在方法建立的同时作稳定性试验很有必要。试验的方法是用被测标本、标准溶液、空白溶液按方法要求进行显色反应后，即刻及室温放置不同时间，分别测定其吸光度，根据其吸光度的变化确定方法稳定的时间范围。一般要求有色溶液能稳定二小时以上就能满足临床应用的需要。必要时还要加以注明。

---

武威市17863437013： 临床生物化学的研究方法有哪些? ？
芮侧美普： 临床生物化学抽血化验临床生物化学在方法建立的原理确定后,尚需根据其原理来选择合适的条件,以保证所建的方法可靠.下面以光度法为例介绍其条件选择的主要环节...

武威市17863437013： 临床生物化学的基本概况是怎样的? ？
芮侧美普： 临床生物化学研讨临床生物化学是化学、生物化学与临床医学的结合,已经发展成为一门成熟的独立学科.临床生物化学有其独特的研究领域、性质和作用,是一门理论和...

武威市17863437013： 临床生物化学的发展过程是怎样的? ？
芮侧美普： 临床生物化学显微镜临床生物化学追溯其发展过程,它是与许多相关学科(包括化学、生理学、药物学、病理学、临床医学等等)相互联系、相互渗透的结果.在临床生物...

武威市17863437013： 临床生物化学主要有那些作用? ？
芮侧美普： 第二,开发应用临床生物化学检验方法和技术,对检验结果的数据及其临床意义作出评价,用以帮助临床诊断以及采取适宜的治疗.这部分内容有两方面的侧重点:在阐明疾病生化诊断的原理方面,侧重于论述疾病的生化机制,比较接近化学病理学的范畴;而在技术方法的开发应用方面,偏重于临床生物化学实验室的应用,有人称之为临床化学(clinicalchemistry),其中一部分内容又称之为诊断生物化学(diagnosticclinicalchemistry).

武威市17863437013： 生物化学和生物质化学有何不同? - ？
芮侧美普： 生物化学,用化学的原理和方法,研究生命现象的学科.通过研究生物体的化学组成、代谢、营养、酶功能、遗传信息传递、生物膜、细胞结构及分子病等阐明生命现象.是分子水平的研究生物质,农林业生产过程中除粮食、果实以外的秸秆、树木等木质纤维素(简称木质素)、农产品加工业下脚料、农林废弃物及畜牧业生产过程中的禽畜粪便和废弃物等物质.生物质化学,可以认为是一门能源科学,主要是生物能源的开发、利用 .完全不涉及分子水平

武威市17863437013： 临床生物化学与检验中,电泳技术的分类,及其影响因素有哪些? - ？
芮侧美普： 一般临床上应用的分为对流电泳,(包括对流免疫电泳),扩散法电泳方试方法各自差不多,影响电泳结果的因素很多,基本以时间,温度,PH,介质,电流,电压为主导影响因素

武威市17863437013： 请举例说明生物化学原理和技术在临床医学上的应用(至少5项). - ？
芮侧美普： 生物化学原理在临床的应用举例: (一)P53基因对于防治癌症的重要作用 (二)临床上用生物活性肽作为治疗药物 (三)利用维生素A对于夜盲症的治疗与防治有重要作用 (四)铁元素是人体必须的微量元素,参与红细胞的构成,参与免疫,肝脏解毒等重要功能. (五)人体缺碘会导致甲亢,使用加碘食盐可以有效防治大脖子病!

武威市17863437013： 何谓生物化学,其主要研究内容有哪些 - ？
芮侧美普： 生物化学 (自然科学) 运用化学的理论和方法研究生命物质的边缘学科.其任务主要是了解生物的化学组成、结构及生命过程中各种化学变化.从早期对生物总体组成的研究,进展到对各种组织和细胞成分的精确分析.目前正在运用诸如光谱分析、同位素标记、X射线衍射、电子显微镜以及其他物理学、化学技术,对重要的生物大分子(如蛋白质、核酸等)进行分析,以期说明这些生物大分子的多种多样的功能与它们特定的结构关系. 生物化学主要研究生物体分子结构与功能、物质代谢与调节以及遗传信息传递的分子基础与调控规律.