请问real-time方法在检测细胞的凋亡过程中,大概需要花费多少钱呢?
Real-time PCR中文译作“实时聚合酶链反应”,是一种最新发展的定量PCR技术。该技术借助于荧光信号来检测PCR产物,一方面提高了灵敏度,另一方面还可以做到PCR每循环一次就收集一个数据,建立实时扩增曲线,准确地确定CT值,从而根据CT值确定起始DNA拷贝数,做到了真正意义上的DNA定量,较以往常用的终点定量的方法更加准确。根据所使用的技术不同,荧光定量PCR又可以分为TaqMan探针和SYBR Green I荧光染料两种方法。Real-time PCR所采用的专用PCR仪能够自动在每个循环的特定阶段对反应体系的荧光强度进行检测,实时的记录荧光强度的改变,从而对样品的浓度进行精确的定量。
RT-PCR是Reverse transcription PCR的简称,中文译作“逆转录聚合酶链反应”,是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组DNA的污染。用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA,三种都可。
Real time RT-PCR是将Real time-PCR的方法用于RT-PCR中,目的也是为了对样品浓度进行精确控制。
RT-PCR和Real time-PCR是没有必然联系的,两种技术可以一起使用,就是Real time RT-PCR;也可以单独使用。就是名称有点绕,逆转录PCR先出现,所以占用了RT-PCR这个简写,等Real time-PCR技术出现后,本来按照惯例,简写也是RT-PCR,但为了与逆转录PCR相区别,还是写成Real time-PCR。
Q-PCR就是定量的PCR,这其中包含real-time PCR
real-time PCR指的是用可以实时检测信号的机器来做PCR,最常用的是roche的light cycler和applied biosystems的机器,一般就是在PCR反应中加dye或者probe,每一个cycle都读一下荧光强度
Q-PCR还可以用其他的方法做,大部分其实都算作semi-quantitative,比如用普通的PCR机器做,保证在PCR的反应的线性区域的时候停止反应,这个时候得到的DNA的量应该是比较能够定量的(也经常有人添加含反射性元素P32的dCTP到反应中,敏感度比一般的PCR高)
至于RT PCR,就是指reverse transcription的PCR,就是从RNA得到cDNA以后进行的PCR,跟real time没有什么直接关系
至于absolute,其实就是在做Q-PCR的时候做一个已知浓度的DNA/RNA/cDNA的standard curve,然后根据未知浓度的样品PCR的结果在这个strandard curve的位置来估计未知样品的浓度
花多少钱主要看你实验所需的用量和是否能一下就搞定
用SYBR的话,一个200次的试剂大概一千多,
而Taqman探针的试剂稍稍贵点,而且得自己设计探针(探针弄弄少少也要一千多)
一两天就行。只要循环三十到四十次,出现倍增就行了。试剂的话用现成的试剂盒就行了,这个价格网上都有,主要是你自己的引物,得你自己准备好。这个要是有现成的就便宜了
1200
...biosystems quantstudio64 6 7 flex real-tim
1、在 控制面板,卸载程序,里面找到apple software update,右键单击选择修复,修复后重新安装官网上下的itunes安装包。2、如果是首次安装iTunes,用WINRAR把iTunes 的安装包解压,单独安装解压出来的AppleSoftwareUpdate.msi,然后再通过Apple Software Update安装iTunes。
情书里面一首歌曲的名字~
57、Brian McKnight - Back at One:韩彩英那期TIM唱的歌 58、Usher - Caught Up:ANDY跳过这支曲子 59、全慧彬 - 2 AM:全慧彬带着2个Dancer跳舞的歌曲,这首歌可能有下载时限,要下的快点 60、free storm:The red的裴涩琪跳的复古舞曲 61、Real To Me Brian - McFadden :柳敏那期情书,李辉才给她带项链时...
STM32开发 -- RTC详解(上)
精确利用RTC进行IWDG(独立看门狗)超时计时,需要通过以下步骤实现:配置TIM5为输入捕获,将LSI连接到TIM5_CH4;测量LSI频率,设置20位预分频器;然后,根据供电条件选择RTC时钟源,如HSE\/128、LSE或LSI。RTC的寄存器操作涉及CRH\/CRL、CNT\/ALR\/PRL等,注意写入规则、RTC_PRLH\/RTC_PRLL的写保护,以及在...
现在最流行什么歌,有哪些最多人看的电影
歌曲 •一路歌唱 - 阿宝vs张冬玲 阿宝•Just Go(抢听版)谭杰希•爱本无罪 - 汤潮&岳思思 汤潮•结婚那件事 - 江若琳&阿牛 2012新歌速递•牵牛花 赵晨妍•忧伤倒数 - 小昔米 夫妻那些事•爱情密码 刘栀铄•终于 李立崴•寂寞的夜和谁说话 ...
批处理复制文件至指定文件夹,并自动重命名。
F:\\合并\\黑色\\*.*') do (move %%i F:\\合并\\%%~ni黑%%~xi)for \/f %%i in ('dir \/s \/b F:\\合并\\透明\\*.*') do (move %%i F:\\合并\\%%~ni透%%~xi)rd F:\\合并\\黑色\\rd F:\\合并\\透明\\上面只考虑了主图里没有子文件夹,副图里只有两个子文件夹。 如果与实际不符请说明 ...
bat命令、全一点的、给加分
delims= 表示vivtim.txt中的内容是一空格来分隔的。我想看到这里你也一定明白这victim.txt里的内容是什么样的了。应该根据%%i %%j %%k表示的对象来排列,一般就是 ip password username。 代码雏形: --- cut here then save as a batchfile(I call it main.bat ) --- @echo off @if "%1"=="" goto...
我想知道韩国综艺节目情书和X-Man中出现的歌曲
57、Brian McKnight - Back at One:韩彩英那期TIM唱的歌58、Usher - Caught Up:ANDY跳过这支曲子59、全慧彬 - 2 AM:全慧彬带着2个Dancer跳舞的歌曲60、名字不清楚:The red的小妹跳的复古舞曲61、Real To Me Brian - McFadden :柳敏那期情书,李辉才给她带项链时放的62、Seasons In The Sun - Westlife:...
整点报时程序DELPHI
新建一个顺序,并在窗体中参与以下元件: Timer1: TTimer; Image1: TImage;。。时钟的表盘 Edit1: TEdit; 。。日期框 Label1: TLabel; PopupMenu1: TPopupMenu; 然后在 {$R *。DFM} 下面参与这么一句 {$R CLOCKSOU。RES} <--时钟的声响文件, (注:CLOCKSOU。RES 是先用windows的记事本...
想用delphi编一个闹钟程序?
tim1,tim2,tim3,tim4:real;dtme: TDateTime;timini:tinifile;dtim,textdef,tmfilename:string;implementation {$R *.DFM} {$R LL1.RES} \/\/时钟的发声文件 procedure tform1.tiniwr();begin timini:=TIniFile.Create(tmfilename);with timini do begin WriteString('内容','文字',textdef)...
<情书>中的音乐
Mixtapeusa TIM & Soojin在DanceBattle环节舞曲http:\/\/www.sbg.at\/dit\/Newstyle_Mixtape-2006.mp3Baby Got Back 传单Boys在DanceBattle环节舞曲http:\/\/61.152.95.140\/midi\/real\/Angels\/6.rmLondon nights 成民在DanceBattle环节舞曲http:\/\/www.late-xxx.com\/latex_london_nights.mp3HomeRun MC梦&玉珠玄 26代情书...
依龙醋酸: 现在最常用的real-time试剂是SYBR和Taqman探针 花多少钱主要看你实验所需的用量和是否能一下就搞定 用SYBR的话,一个200次的试剂大概一千多,而Taqman探针的试剂稍稍贵点,而且得自己设计探针(探针弄弄少少也要一千多)
白云矿区18593993478: Real - time PCR为什么不用吸光度法检测 - ?
依龙醋酸: Real-Time PCR结果不齐,建议使用多种方法多次尝试.一般出现不齐是因为加样量不一致,相差少许是由于实验误差. Real-Time PCR 技术,又称实时定量荧光PCR,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个...
白云矿区18593993478: 在real - time PCR中如何检测DNA污染 - ?
依龙醋酸: 既然把DNA叫做污染,那应该是对RNA反转录后进行Real-time了. 你用未进行反转录的RNA作为模板,跑一次检测Real-time.如果没有DNA污染,这次RT是不会得到扩增结果的,因为RNA不能作为普通Taq酶的模板;一旦RNA样品里面有DNA污染,那检测RT出现扩增产物的可能性非常高. 只要RNA作为模板的Real-time PCR得到了扩增结果,那就是存在DNA污染. PCR产物的融解曲线必须做,而且你也必须得知道这对引物二聚体的融解峰,防止引物二聚体误导结果.
白云矿区18593993478: Real - time PCR的原理及优点是什么? - ?
依龙醋酸: real time PCR,即实时监测PCR扩增产物并进行解析的方法,它是在PCR反应体系中加入荧光物质,并通过real time PCR检测系统对PCR反应进程中的荧光信号强度进行实时监测,最终对实验数据进行分析处理的方法.描述 PCR动态进程的曲...
白云矿区18593993478: real - time RT - PCR是什么意思 - ?
依龙醋酸: real-time RT-PCR 实时荧光定量RT-PCR 双语对照词典结果: 网络释义 1. 荧光定量RT-PCR 2. 实时定量RT-PCR 3. 荧光RT-PCR
白云矿区18593993478: real timepcr的意义检测基因表达水平需要多少样本 - ?
依龙醋酸: 细胞按要求培养,抽RNA, 反转录为cDNA. 有细胞计数,测RNA 浓度(分光光度计)等环节. 选择反应物, 待测样本:0hr, P4, L4, P12, L12, P24, L24, P36, L36 九种 阴性对照:即无模板对照, NTC 作为标准的样品:如果有必要...
白云矿区18593993478: 逆转录PCR的逆转录PCR - ?
依龙醋酸: 由一条RNA单链转录为互补DNA(cDNA)称作“逆转录”,由依赖RNA的DNA聚合酶(逆转录酶)来完成.随后,DNA的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖DNA的DNA聚合酶完成,随每个循环倍增,即通常的PCR.原先的RNA模板被RNA酶H...
白云矿区18593993478: 荧光定量PCR RT - PCR - ?
依龙醋酸: RT可能含义: reverse transcribe 是逆转录,那么相应pcr应该是由rna凡转录cdna过程 real time 实时定量 那么就是荧光定量pcr了
白云矿区18593993478: real - time pcr 能测相同个体不同基因之间的的表达差异吗 - ?
依龙醋酸: 可以放在一起比较,同一组织中有一些特定表达的基因如β-actin、GAPDH之类的,你可以选择合适的一种作为内参基因,同一个样品的cDNA或者RNA进行目的基因(一个或多个)和内参基因RT-PCR后比较你的目的基因和内参基因的Ct值,使用△△Ct法计算出目的基因与内参基因的比例,这样也就可以比较出你的不同目的基因之间的比例