技术分享 | 5分钟掌握免疫组化实验

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一、免疫组化技术简介

免疫组化（Immunohistochemistry, IHC），作为基于抗原抗体特异性结合原理的显微技术，其核心是通过化学显色，揭示组织中目标蛋白的分布、定性和定量信息。通过提取组织蛋白作为抗原，与抗体结合后，再与荧光或酶标记的二抗反应，显微镜下的清晰图像，为我们揭示了细胞内的抗原秘密。

二、免疫组化技术分类

IHC技术有多种分类，如免疫酶标法、免疫荧光法、亲和组织化学法等。其中，免疫荧光法以荧光素标记的抗体为探针，荧光信号直观显示抗原位置；免疫酶标法则通过酶标记的抗体和底物反应，生成可视的有色物质，用于细胞内抗原定位。

三、免疫组化应用广泛

免疫组化在病理学诊断中扮演重要角色，如细胞类型辨识、病变性质鉴定、肿瘤起源分析等，它就像细胞的“指纹”，使组织鉴别更为精准。其特异性强、灵敏度高和定位准确的特点，使它在生物学和医学研究领域大放异彩。

四、材料准备与实验流程

1. 切片选择：石蜡切片（保持形态和连续观察）与冰冻切片（保持免疫活性）各有优缺点。根据实验需求选择合适的切片方法。

2. 抗体选择：单克隆与多克隆抗体各有特点，选择时考虑抗体来源、种属特异性及实验目的。

3. 实验步骤：包括组织固定、包埋、切片、脱蜡水化、抗原修复、封闭非特定位点，再到一抗、二抗孵育、底物显色和封片处理。

五、常见问题及解决策略

• 过深显色：一抗浓度过高或孵育时间过长，调整浓度和时间；过高温度，选择4℃或室温孵育。


• 非特异显色：加强脱蜡处理，充分封闭非特异性位点；匹配一抗与二抗。


• 显色弱或无染色：调整一抗浓度和孵育时间，确认抗原表达情况和抗体匹配性。

六、注意事项

操作过程需细致，确保脱蜡和水化彻底，加液时覆盖组织；一抗冲洗要彻底，避免交叉污染；及时拍照并妥善保存样本。

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海丰县14736082733： 免疫组化的实施方法!!急!!!？
尧怀复方： 1. 常规切片脱蜡,水化; 2. PBS漂洗切片3次,每次5min; 3. 3%过氧化氢溶液阻断切片上内源性过氧化物酶,常温10min; 4. PBS 5. ph6.05的枸橼酸缓冲液进行100C抗原修复.修复时间15min,然后自然晾干至室温 6. PBS 7. 添加1抗,4度过夜; 8. PBS 9. 添加2抗,37度孵育1小时; 10. DAB显色; 11. 苏木素衬染; 12. 常规切片脱水封片.

海丰县14736082733： 如何正确地判断和分析免疫组化的结果? ？
尧怀复方： (1) 首先要确定免疫组化技术是否合格,合格的染色结果应 该是背景颜色浅淡或无着色,而阳性标志物清晰和定位明确.切 片中的正常组织可以作为最简便的对照来判断染...

海丰县14736082733： 什么是免疫组化检查 - ？
尧怀复方： 免疫组化检查指应用免疫学抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色,确定组织或细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对的定量检查. 免疫组织化学利用抗体...

海丰县14736082733： 什么叫免疫组化 - ？
尧怀复方： 是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry).

海丰县14736082733： 免疫组化基础知识 - ？
尧怀复方： (一)、仪器设备 1)18cm不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉;2)水浴锅 (二)、试剂 1)PBS缓冲液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L,KH2PO4 1.4mmol/L. 2)0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液(CB,pH6.0,1000ml):柠...

海丰县14736082733： 免疫组化抗原热修复的技术要点有哪些?拜托各位大神 - ？
尧怀复方： 楼主你好: 第二节 免疫组化抗原热修复的技术要点(供参考) 1、 抗原热修复温度和时间的关系 我们日常工作中所使用的组织固定液福尔马林会引起组织蛋白内或蛋白之间的亚甲基发生桥连,具体过程如下: 第一步基本反应福尔马林和氢反应...

海丰县14736082733： 什么是免疫组织化学 - ？
尧怀复方： 免疫组织化学(immunohistochemistry)又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术.它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等). 免疫组化技术近年来得到迅速发展.50年代还仅限于免疫荧光技术,50年代以后逐渐发展建立起高度敏感,且更为实用的免疫酶技术.

海丰县14736082733： 免疫组织化学的分析方法 - ？
尧怀复方： 这是一个相当主观的方法,建议不要为此纠结.它的意思就是用0-3的几个数字来打分,评价你染色的深度.为什么3代表最强的染色,因为3是这几个数字里面最大的.为什么用0-3而不用更多的级别,我想是取决于人眼对色彩强度的分辨率.这里已经有4个级别了,再多我看也分不清楚了.我虽然不是非常熟悉免疫组化,但我看过文献的印象里面,这并不是一个常用和广泛认可的权威分级办法.免疫组化技术本身限制了它是难以量化的.

海丰县14736082733： 免疫组化实验染色的注意事项及影响因素有哪些?？
尧怀复方：中洪博元生物技术为您解答:1.假阴性反应可发生在: 1) 组织内待测抗原已被分解破坏,或抗原含量过低; 2) 抗原被遮盖,多由于醛类固定剂的使用,使组织中的大分子蛋白借醛键形成交联而遮盖待检抗原; 3) 抗体质量不佳或稀释度不当...