怎样从细胞中提取核酸论文
乳酸菌细胞中提取了核酸经彻底水解可得到8种产物：5种碱基、磷酸、核糖、脱氧核糖。
（1）病毒核酸进入宿主细胞后，在宿主细胞中复制子代病毒核酸和合成子代病毒的蛋白质，但尚未形成完整的病毒体，此时用血清学方法和电镜检查无发检测到病毒颗粒．
（2）由图可知E和H结果f过程生成子代噬菌体，E是噬菌体的核酸，那么H是病毒的蛋白质外壳．物质D促进物质A进过g过程生成两个．则说明物质D是完成物质A复制所需要的酶．
（3）物质E是由物质A复制而来的，两种遗传信息是相同的，但是它们表达出来的蛋白质是不同的，说明它们转录形成的物质B和F的信息不同．E和H结果f过程生成子代噬菌体，过程f是装配．
（4）因为RNA是单链，碱基数无法确定，所以已确定RNA中碱基总数为X，鸟嘌呤G的数量为Y，不能推断出构成RNA的几种碱基数量．根据中心法则，人体遗传信息的传递过程包括DNA复制、转录和表达过程，但RNA病毒遗传信息的传递过程是RNA的自我复制、RNA逆转录形成相应的DNA、转录和翻译．
（5）根据酶具有特异性可知，DNA酶可以催化DNA水解．RNA酶可以催化RNA水解．如果核酸提取液和DNA酶混合在一起注入进活鸡胚，无病毒A存在，说明核酸提取液是DNA提取液，否则是RNA提取液．如果核酸提取液和RNA酶混合在一起注入进活鸡胚，无病毒A存在，说明核酸提取液是RNA提取液，否则是DNA提取液．
1. 请自行准备：无水乙醇、PBS及1.5mL离心管。
2. 取出析出液和洗涤液，按以下操作：
a) 析出液：4.5mL加入25.5mL无水乙醇；9mL加入51mL无水乙醇。
b) 洗涤液：9mL加入21mL无水乙醇；18mL加入42mL无水乙醇。
c) 配制好的析出液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。
3. 细胞处理：a) 培养板培养的单层贴壁细胞，弃培养基，PBS清洗一遍，弃PBS；
b) 培养瓶培养的贴壁细胞应先用胰酶消化，处理为细胞悬液，细胞量在105-106为佳， 1,000 rpm 离心 5分钟，彻底弃去上清，加入100μL PBS振荡至细胞悬浮；
c) 培养的细胞为悬浮细胞，1,000 rpm 离心 5分钟，彻底弃去上清，加入100μL PBS振荡至细胞悬浮。
4. 加入200μL裂解液，20μL消化液A，振荡混匀，室温放置5分钟。
5. 加入20 μL 消化液B，充分振荡混匀，56℃水浴10 分钟至细胞完全裂解。
6. 加入500μL析出液，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响DNA的提取与后续实验。
7. 将吸附柱放入收集管内，将上述溶液转入吸附柱内，静置2 分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。
8. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。
9. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，离去残留的洗涤液。
10. 取出吸附柱，放入新的1.5 mL 离心管内，加入50-200 μL 洗脱液，静置3分钟，12,000 rpm 4℃ 离心2分钟，收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。
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核酸类药物是骗人的吗
我以为他之所以采用“核酸”是因为核酸可直接从各种生物的细胞中提取。并且提取低浓度的核酸是不需要什么先进技术的，普通的高三学生都能作到；但生产核苷酸就须水解核酸或用微生物发酵法，这样会增加成本。还有核酸是大分子物质，“保健品”中的核酸浓度必然大大高于我们的日常食物中的核酸浓度，它进入人体...
抗体检测怎么检测(核酸、抗原、抗体检测)
接下来的工作,就是从获取的那一点点标本中提取核酸。由于样本中病毒的数量级很小,不足以拿来分析,还需要将其扩增并标记。需要用到的同样是高中学过的知识:聚合酶链式反应(PCR)——这一步看起来麻烦,但由于它的原理和工序已经研究成熟,实际操作中只需要加好试剂送机器,整个核酸检测的过程里最麻烦的还是让待测者...
改变自己获得成功的名人例子
中国黄页”。据《纽约时报》报道，这是他首次尝试互联网业务，也是中国最早的商业网站之一。从那几年开始，阿里巴巴积累了数百万客户，并成为全球最大的科技公司之一。如今，阿里巴巴是一个拥有广泛业务的科技投资巨头：与其主要竞争对手亚马逊一样，它已扩展至视频数据流、在线支付平台和云服务等领域。
pbr322的发展史,有知道的朋友告知,越具体越好……
尽管那时酶学知识已得到相当的发展,但没有任何一种酶能对DNA进行有效的切割。 直到1970年,Smith和wilcox在流感嗜血杆菌中分离并纯化了限制性核酸内切酶Hind ...一般认为基因工程是指:把体外核酸分子(无论采取什么方法从细胞中取得)组合到任何病毒、细菌质粒或其它载体系统(分子),形成遗传物质的新组合,并使之进入到原来...
介绍一下 PCR
聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个试管内将所要研究 的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断;可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增...
基因过表达的原理 步骤 应用?
基因工程的核心技术是DNA的重组技术,也就是基因克隆技术。既然基因工程这么重要,那么什么是基因工程呢? 基因工程是指在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其它载体分子,构成遗传物质的新组合,并使之参入到原先没有这类分子的寄主细胞内,而能持续稳定地 繁殖。根据这个概念,人们可以从一个生物的基因中提取有用的基因...
关于困境的名人故事200字
到了晚年,他和美国坦普恩大学牛满江教授合作研究起细胞核和细胞质的相互关系,他们从鲫鱼的卵子细胞质内提取一种核酸,注射到金鱼的受精卵中,结果出现了一种既有金鱼性状又有鲫鱼性状的子代,这种金鱼的尾鳍由双尾变成了单尾。这种创造性的成绩居于世界先进行列。 九 在困境中成长的名人故事 .陈景润 小时候,教授送我...
聚合酶链式反应简介
研究表达基因的细胞比例等 臆断PCR 鉴定细菌或遗传作用 通用引物PCR 扩增相关基因或检测相关病原 信使扩增表型分型(mapping) 同时分析少量细胞的mRNA 6 其它扩增技术 与PCR及其相关技术发展的同时,新的扩增技术也不断诞生。这些技术各有利 弊,与PCR互为补充,有的可结合应用,共同构成了核酸体外扩增技术的大家族...
ctab溶液的配制
ctab溶液的作用：1、细胞膜裂解剂：CTAB可以破坏细胞膜，使细胞内容物释放出来，从而方便对细胞进行进一步的实验操作。2、核酸提取剂：利用CTAB与核酸的结合能力，可以有效地从细胞中提取出DNA或RNA。同时，它也可以用来去除溶液中的蛋白质。3、蛋白沉淀剂：CTAB可以与蛋白质结合，形成沉淀，从而去除溶液中...
购买核酸提取仪应注意哪些问题
核酸提取仪 主要应用在核酸提取，核酸蛋白的提仪以及分离类，但是，像这种比较的高端一点的核酸提取仪在购买的时候一定要注意几点，我这边给广大使用者提供几点购买的建议：小型自动核酸提取仪已经有多个国际品牌，国内也有多家公司生产，但是，真正得到应用的非常少，客户购买前，应遵循以下几点原则：一定要求...
愈师赛莫： 一.DNA的提取方法简介 为了研究DNA分子在生命代谢中的作用,常常需要从不同的生物材料中提取DNA.由于DNA分子在生物体内的分布及含量不同,要选择适当的材料提取DNA. 动植物中,小牛胸腺۰动物肝脏۰鱼类精子,植物种子的胚中...
临翔区18936231112： 如何从冻存的细胞提取RNA十万火 - ？
愈师赛莫： 1). 将冻存管从液氮或冰箱中取出; 2). 不待细胞溶解,将Trizol500ul-1ml直接放入冻存管中,此时Trizol会冻成冰状; 3). 将冻存管缓慢融化,并用加样器吹打混匀; 4). 将细胞裂解液移至Eppendorf管中,16000′g离心1min,吸出管底絮状...
临翔区18936231112： 怎样提取细胞核内的RNA - ？
愈师赛莫： 怎样提取细胞核内的RNA 如何分别从细胞浆和细胞核中抽提RNA 操作步骤: 样品处理: a. 植物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混匀. b. 动物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液,...
临翔区18936231112： 细胞DNA的提取一般用什么方法 - ？
愈师赛莫： 高中:原理: 1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA. 2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA. 3.DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色.方法步骤: 1.提取细胞核物质:顺时针方向搅拌,稍快,稍重. 5 min 2.溶解DNA: 3.析出含DNA的黏稠物:蒸馏水...
临翔区18936231112： 根据核酸在细胞内的分布 存在方式及其特性,提取过程中采取了什么相应的措施 - ？
愈师赛莫： 利用苯酚法可以直接从动物组织中提取RNA,组织匀浆用苯酚处理并离心后,RNA即溶于上层被酚饱和的水层中,DNA和蛋白质则留在酚层中,向水层加入乙醇后RNA即呈白色絮状沉淀析出.操作步骤 1 称取3克肝组织,剪成小块,置于研钵...
临翔区18936231112： 请教如何从培养细胞提取mRNA - ？
愈师赛莫： 离心收集细胞. 可用0.5MLltrizol,振荡--- 100微升氯仿 ,剧烈振荡,分层静置,12000RPM台式离心机 4度 10分钟--------取80%上清 ,加500微升异丙醇,沉淀总RNA,12000RPM,4度,5分钟 ----弃上清,加1ML75%冰乙醇洗涤,12000RPM,4度,5分钟------倒去吸边,空气中干燥30分钟-------加20-50微升DEPC处理的消毒三蒸水,溶解,低温保存备用.如果不保留样本,可不用DEPC处理的三蒸水,用消毒三蒸水即可则进入逆转录. 另外液体的体积可按上述比例.
临翔区18936231112： 直接法提取DNA的步骤? - ？
愈师赛莫： 土壤DNA???土壤有DNA??土壤微生物??一样的,用土壤浸出液,照一样的流程一般真核细胞基因组DNA有107-9bp,可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取,常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细...
临翔区18936231112： 怎么从精细胞 卵细胞中提取DNA RNA - ？
愈师赛莫： 怎么从精细胞 卵细胞中提取DNA RNA 缓冲液可以是PBS(无菌),为了保证 RNA 不降解,我们在缓冲液中加入了 RNA 保护液(天根公司的).卵巢取出后,在体视显微镜下(观察很清楚),用0.5ml的医用注射器挑破卵泡,然后用体视显微镜的背光(底部光源)观察,一般情况下,你可以看到中间圆形黑点,外面有透明带(相对卵母细胞是透明的)但是也有些裸卵.另外,要区分脂肪滴,它也是圆形,外围透明,只是与卵母细胞相比,它是飘在PBS(缓冲液)液体表面,而卵母细胞是沉到底部,这时,你可以晃动下培养皿.当观测到的的黑点移动并从其它角度可以的就看到它不再是黑点而是透明的,这就是脂肪滴.
临翔区18936231112： 动物RNA的提取 - ？
愈师赛莫： RNA的提取 一、准备试剂: 氯仿,异丙醇,75℅乙醇,无RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制). 二、操作步骤: 1. 匀浆处理: a. 组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理....
临翔区18936231112： 培养细胞如何提取mRNA,如何逆转录?培养细胞提取mRNA的原理是什么?如何用所提取的mRNA进行逆转录? - ？
愈师赛莫：[答案] 1 细胞总RNA的提取 1)、6孔板细胞(CNE-2)汇合度为90-100%时,取出无菌室,去其上清,用PBS洗两次后,每孔加TRIZOL试剂(Gibco公司) 1 ml,摇匀,无菌罩内消化3-5分钟(观察:液体变粘稠,细胞脱壁). 2)、将各孔内消化好的细胞裂解液...
