如何选择合适的细胞培养板

如何选择合适的细胞培养基~

（1）培养基的组成。培养基主要是由水（通常用重蒸馏水）、大量元素、微量元素、维生素、生长调节物质、蔗糖、琼脂等组成。这些物质都是供植物细胞、组织、器官再生时所必需的营养物质。
（2）培养基的种类和成分。一般应根据不同的植物和不同的培养部位以及不同的培养目的选用不同的培养基。最常用的是MS培养基。这一培养基包含的营养成分比较全面，所以适合一般花卉生长。

一个T25的细胞瓶相当于6个培养板，所以需要大量扩增细胞的时候用细胞瓶啊，以细胞为载体或者对象的实验用培养板比较好，因为用的量比较少节约细胞，而且培养板好做对照实验和梯度实验（每个板子的量或者浓度不一样），比如6孔板，可以拿1个做对照，另外5个孔做不同的实验嘛（比如接不同浓度的病毒），不过培养板相对更容易污染，所以操作要小心

细胞培养板是细胞培养实验中常用和重要的耗材，主要形状有U型和V型、规格也有多重96孔、48孔，24孔，12孔，6孔等，不同的实验需要细胞培养板的规格、形状各不相同，大家是否怎么选择细胞培养板、如何使用细胞培养板、不同的细胞培养板各有什么用途呢？
细胞培养板的选择：
细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底(U型和V型);培养孔的孔数有6、12、24、48、96、384、1536 孔等;根据材质的不同有Terasaki板和普通细胞培养板。具体选择时根据培养细胞的类型、所需培养体积及不同的实验目的而定。
(一)平底和圆底(U型和V型)培养板的区别和选择：
贴壁细胞一般用平底培养板。
悬浮型细胞的培养一般用V型。
U型培养板亦多用于培养悬浮型细胞 。
V型培养板有时用做免疫学血凝集的实验。
不同型状的板子自然有不同用途。平底的什麼类型的细胞都可用﹐但当细胞数目较少﹐如做克隆时﹐就用96孔平底板﹐另外﹐做MTT等实验时﹐无论贴壁和悬浮细胞﹐一般均用平底板。至於U或V型板﹐一般在某些特殊要求时才使用。如在免疫学方面﹐当做两种不同淋巴细胞混合培养时﹐需要二者相互接触以刺激﹐因此﹐一般需要U型板﹐因细胞会由於重力的作用而聚集在一个很小的范围内。V型板的用途更少﹐一般用于细胞杀伤实验时﹐为了使效靶细胞紧密接触﹐常使用V型板﹐但这种试验也可用U型板替代(加入细胞後﹐低速离心)
如果是养细胞的话， 通常是选用平底的， 另外要特别注意材质， 标示%26quot;Tissue Culture (TC) Treated%26quot;就是养细胞用的。
圆底的好像没听说过拿来养细胞。 圆底的通常是拿来做分析， 化学反应， 或是保存样品用的， 因为圆底比较好将液体吸得乾净， 如果用平底的就不好吸了。 不过， 如果你是要测吸光值的话， 一定要买平底的才行。
大部分细胞培养都用平底培养板，便于镜下观测、有明确的底面积、细胞培养液面高度相对一致，还便于MTT检测。
圆底培养板主要用于同位素掺入的实验，需要用细胞收集仪收集细胞的培养，如%26ldquo;混合淋巴细胞培养%26rdquo;等。
(二)问题集锦
问：我看到培养板有4、6、12、24、48、96孔几种规格 ，但不知道到底什么实验用哪种规格，请指教。
答：要根据你具体的实验要求，流式一般用6孔，MTT一般用96孔，细胞爬片一般用24孔等!要具体根据你实验来定!
问：请问哪位高手知道Terasaki板是什么培养板，与普通细胞培养板有什么区别?谢谢!!
答：Terasaki plate主要是用于晶体学研究，产品设计便于对晶体的观察与结构分析。有两种sitting 和handing drop两种方法，两种方法应用产品的外形结构也不同。材料上选择crystal class polymer ，特殊的材料有利观察晶体结构。
细胞培养板主要是PS材料。材料是treated sufface。便于细胞贴壁生长与伸展。当然还有浮游细胞的生长材料，同时还有low binding surface，有关更多实验材料上的应用与对材料的选择。
问：我想测吸光度用酶标仪，用多孔细胞培养板行吗?请问酶标板 多孔细胞培养板有什么区别?
答：用多空细胞培养板测吸光度肯定可以拉，我们经常用它来做样品的蛋白定量和MTT检测。
区别：酶标板一般要比细胞培养板贵，细胞板主要做细胞培养，但也可以用来测蛋白浓度;酶标板包括包被板和反应板，一般不能用做细胞培养，它主要做免疫酶联反应后的蛋白检测，它需要更高的要求还需要特定的酶标工作液。如下是个用酶标板检测冠状病毒IgM/IgG抗体例子：
【操作步骤】
1.加样品：将标本稀释液100ul(或2滴)加到包被板内(预留阴阳性及空白对照2-5孔)，将待检血清用PBS或生理盐水按1：20稀释后取10ul加入反应孔内。
2.加对照：加入阴性对照1-3孔，阳性对照1孔，各100ul对照血清。空白对照1孔空置。
3.温育：将反应板震荡使样品混匀后，置37℃温箱或水浴反应20分钟。
4.洗板：用蒸馏水将浓缩洗涤液15ml稀释至300ml。
(1)手洗：将反应板孔内容物倾出，将洗涤液注满反应孔，放置30秒钟后用力甩去，如此重复5次后拍干。
(2)机洗：5次，每孔注入洗涤液200ul或注满，停留30秒钟后吸尽拍干。
5.加酶标工作液：每孔加入100ul(或2滴)酶标工作液，置37℃温箱反应20分钟后，洗板5次，洗板操作同步骤4。
6.显色和终止反应：将底物A、B液各50ul(或1滴)加到反应孔内，37℃避光显色10分钟。每孔加入终止液50ul(或1滴)混匀终止反应。
【结果判定】
1.酶标仪设定波长450nm，先用空白调零，然后测定各孔OD值;如果选用双波长测定，不必设置空白对照孔。
2.当阴性对照平均OD值小于0.08，阳性对照(pc)OD值大于0。30时，说明试剂盒有效且实验操作正确，否则应当重复试验。
3.临界值(CUT%26mdash;OFF VALUE)=0.15+阴性对照平均(NC)OD值(当阴性平均OD值小于0.05时，按0.05计算;当阴性平均OD值大于或等于等于0.05时按实际值计算)。
4.标本OD值%26le;临界值为阴性，标本OD值%26gt;临界值为阳性。
常用不同培养板的孔底面积及推荐加液量：不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2-3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量。若加液量过多会影响气体(氧气)交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。
培养器皿 面积(cm2)培养液量(ml) 细胞量
96 孔培养板 0.32 0.1 10e5
24孔培养板 2 1.0 5%26times;10e5
12孔培养板 4.5 2.0 10e6
6孔培养板 9.6 2.5 2.5%26times;10e6
3.5 cm 培养皿 8 3.0 2%26times;10e6
6 cm 培养皿 21 5.0 5.2%26times;10e6
10 cm 培养皿 55 10.0 13.7%26times;10e6
25cm2 培养瓶 25 5.0 5%26times;10e6
75cm2 培养瓶 75 15～30 2%26times;10e7

培养基的选择：
细胞培养是实验室里最常见和最基本的实验了，但却不是最简单的。别小看细胞培养，这里可蕴含着大学问。有时候细胞状态不好，转染、药筛这些实验根本就没办法做。影响细胞培养的因素很多，让我们先从培养基和血清说起。
◆ MEM是由Eagle’s基础培养基(BME)发展而来的，其中增加了组分的范围及浓度。
◆ 改良的BEM(DMEM)培养基是为小鼠成纤维细胞设计的，现在常用于贴壁细胞的培养。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L，后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L，这就是大家常说的低糖和高糖了。
◆ aMEM含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸，它可广泛应用于各种细胞类型，包括对营养成分要求苛刻的细胞。
◆ Ham’s F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的，现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM等体积混合使用，得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物，这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。
◆ RPMI 1640培养基是专为淋巴细胞培养而设计的，现在已广泛应用于悬浮细胞的培养。
准备几种培养基，然后花大约两周的时间做一个简单的细胞生长实验，来选择其中最适合的。
以前大部分实验室都是用干粉培养基，但配制过程就较为繁琐，要溶解、调pH值，过滤，过程中可能会产生一些浓度误差，而且有些实验室的水质并不理想，所以培养的效果会有差异。

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西塞山区17863556088： 细胞培养板 - 搜狗百科？
朱蚁滨欣：[答案] 看你的工作量了,如果是属于高通量的话,一般会用孔数比较多的.如果只是人工筛选而且需要看细胞表型的话,可以选择稍微直径大一点的板子

西塞山区17863556088： 如何选购transwell培养板 - ？
朱蚁滨欣： 当然根据实验要求来选择了,我以前用的MERK公司的millipore,还不错,不用铺胶,拆开直接用,24孔板的,悬挂式 ,细胞观察前用棉签轻轻拭去那层胶,至于孔径根据你要求及倒置显微镜上下可调节的范围来确定

西塞山区17863556088： 如何选择合适的细胞培养基 - ？
朱蚁滨欣： 培养基的选择:细胞培养是实验室里最常见和最基本的实验了,但却不是最简单的.别小看细胞培养,这里可蕴含着大学问.有时候细胞状态不好,转染、药筛这些实验根本就没办法做.影响细胞培养的因素很多,让我们先从培养基和血清说起...

西塞山区17863556088： PK - 15细胞在96孔培养板上看样才能长得好?用进口板还是国产板? - ？
朱蚁滨欣： 培养板对细胞系的生长有一定的影响,主要是影响是在于细胞系的贴壁情况.一般来说进口的板子要比国产的板子更好些,据说进口板子表面做了特殊的化学包被,使细胞生长状态更好.首选品牌是丹麦NUCK,其次是美国Corning,但是名牌假货太多,购买时请咨询厂家指定的代理商.PK-15这类细胞在生长过程中要求渗透压较高,但是在细胞培养中很少有人关注渗透压的问题,渗透压的高低主要取决于培养基,推荐invitrogen公司的DMEM高糖培养基. 最后祝实验顺利.

西塞山区17863556088： 如何选择合适的培养基? - ？
朱蚁滨欣： 选择培养基没有一定的标准,有几点建议可供参考: (1 )建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基.可以查阅参考文献,或在购买细胞株时咨询. (2) 其它实验室惯用的培养基不妨一试,许多培养基可以适合多种细胞. (3) 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基.如小鼠细胞株多选 RPMI1640 . (4) 用多种培养基培养目的细胞,观察其生长状态,可以用生长曲线、集落形成率等指标判断,根据实验结果选择最佳培养基,这是最客观的方法,但比较繁琐.

西塞山区17863556088： 我做的是细胞实验,在做药物实验和细胞介导的细胞毒实验时,我应该选取几孔培养板比较合适呢? - ？
朱蚁滨欣： 看你的工作量了,如果是属于高通量的话,一般会用孔数比较多的.如果只是人工筛选而且需要看细胞表型的话,可以选择稍微直径大一点的板子

西塞山区17863556088： 悬浮细胞用什么培养板 - ？
朱蚁滨欣： 一般表面未处理的细胞培养板(no-treated),不过用表面处理(TC-treated)的也没有问题.差别只是价格上的.

西塞山区17863556088： 悬浮细胞的培养的细节求助 - ？
朱蚁滨欣： 根据材质的不同有Terasaki板和普通细胞培养板,如“混合淋巴细胞培养”等;酶标板包括包被板和反应板. 细胞培养板主要是PS材料.具体选择时根据培养细胞的类型、所需培养体积及不同的实验目的而定,因为细胞会由于重力的作用而聚集在...

西塞山区17863556088： 细胞培养板哪家质量好规格齐全? - ？
朱蚁滨欣： 上海鼎国生物技术有限公司代理greiner细胞培养皿,细胞培养板,细胞培养瓶,酶标板,细菌培养皿,离心管,试管,移液管,吸管,96孔/384孔微孔板系列产品.由高质量的晶体聚苯乙烯(PS)制作,优异的无变形光学表面,可以用于显微...