将得到的阳性克隆大量培养后提取质粒，然后以质粒为模板进行酶切，酶切产物为什么跑不出条带
DNA复制的基本条件是模板（DNA的双链）、能量（ATP水解提供）、酶（解旋酶和聚合酶等）、原料（游离的脱氧核苷酸）；同时遵循碱基互补配对原则．故选：B．
我交给你，你先复制一份图纸以防万一，然后进入“模型”空间，CTRL+A选择模型空间里的所有东西，然后删除，然后进入“布局”删掉你不需要的所有布局，相同的布局仅仅留一个就够了，然后修改自己的公司等等，接下来最好用“文件”——“图形实用程序”——“清理”，全部清理一遍，然后建立自己习惯的图层等等，然后点另存，下面的文件类型选“样板文件”，好了，以后直接新建布局的时候选这个新定义的“样板文件”就好了
酶切后你跑出来了几条条带？单酶切还是双酶切？酶切后电泳时加原质粒对照了吗？
最好发个电泳图给我，我再给你具体分析。
很可能是阳性
好奇你得到的阳性克隆有没有验证过啊？测序或者酶切
从生物体克隆目的基因的方法有哪些?
需预先建立具有目的基因的适宜遗传分离群体（近等基因系或分离群体），将目的基因精确定位在染色体特定的位置之后，用目的基因两侧紧密连锁的分子标记（RFLP标记）为探针，筛选基因组文库，得到阳性克隆，然后以阳性克隆的末端作为探针，获得含有目标基因的大片段克隆，然后以这些新的DNA为探针，获得更趋近目的...
怎样从菌体中克隆目标基因? 怎样把克隆的基因转到质粒上?
一般是大肠杆菌）——过夜培养，挑选阳性克隆——抽提质粒，酶切验证是否重组质粒（即插入了目标基因的质粒）。如果是，则目标基因的克隆成功。原来在该菌体中只占全部基因组的一点点部分，现在经过克隆，以大肠杆菌的形式得到大量携带目标基因的重组质粒（每个阳性菌株含有几十上百个重组质粒拷贝）。
拟南芥蘸花转化前为什么要把盛开的花朵和角果剪掉
具体来说，当拟南芥的花朵盛开时，其生殖细胞已经形成并且开始成熟。如果在这个时期进行转化操作，可能会错过最佳的转化时机，导致转化效率下降。此外，盛开的花朵可能已经受到了环境的影响，例如光照、温度等，这些因素可能会干扰实验结果。另外，角果是拟南芥的种子荚，其中包含了大量的生殖细胞。如果不对角果...
如何筛选出具有突变基因的酵母突变株?
酵母转化则采用NotI内切酶处理质粒，然后将处理过的酵母菌培养至指数生长期，再进行转化。转化过程中，酵母菌与纯化的质粒、变性鲑鱼精子DNA以及转化缓冲液混合，经45℃孵育后，挑选出LacZ基因表达阳性的克隆。这些克隆通过YPAD平板进行筛选，最终得到LacZ表达最强的菌株。实验结果表明，转化株在SC-ura培养基上...
测序结果与目的基因同源性多少判断为阳性
将你得到的基因的PCR产物纯化后克隆入T\/A载体，转化细菌，培养得到阳性克隆。挑取多个阳性克隆，摇菌，得到菌液后用你的特异性引物和载体上的通用引物进行PCR, 选择片段大小符合的菌液送出去测序。一般需要多送几个克隆，可能存在基因亚家族或者不同剪切。得到测序结果后，用ncbi 的 vecscreen去载体，余...
克隆是啥意思
当时认为,这可能是用成年绵羊的细胞克隆“多莉”造成的,使其细胞具有成年细胞的印记,但这一解释目前受到了挑战,美国马萨诸塞州的医生罗伯特·兰扎等用培养的衰老细胞克隆牛,得到6头小牛,出生5～10个月后发现这些克隆牛的端粒比普通同龄小牛要长,有的甚至比普通新生小牛的端粒还长。现在还不清楚这一现象的原因,也...
蓝白筛选的阳性克隆反应什么酶不具有活性
β-半乳糖苷酶。蓝白筛选的阳性克隆反应中，β-半乳糖苷酶不具有活性2。在蓝白筛选中，大肠杆菌的β-半乳糖苷酶缺陷株基因组无法单独编码有活性的β-半乳糖苷酶，当菌体中含有带有lacZ基因的质粒后，质粒lacZ基因编码的α肽链（酶的N端）和菌株基因组表达的β-半乳糖苷酶的C端互补，从而具有与完整...
基于胚胎干细胞的同源重组技术
02 电转导入打靶载体：将重组载体通过电转方法导入小鼠胚胎干细胞中，实现同源重组，筛选阳性克隆。03 ES细胞筛选：由于同源重组率极低，需要通过正负筛选标记确保筛选到正确重组的阳性克隆。04 ES细胞囊胚注射得到嵌合体小鼠：将ES阳性克隆以囊胚显微注射的方式注入特定品系小鼠囊胚中，移植到代孕小鼠子宫中，...
图位克隆法的图位克隆的技术环节
比较各个克隆的插人片段,将它们排列成与原来在染色体中的顺序一样的连续克隆群,即跨叠克隆群(也叫重叠克隆群)。跨叠克隆群的制作方法有三种:1)菌落杂交法。其基本原理是利用基因组某一区域特有的或与所需分离的目标基因紧密连锁的DNA分子标记为探针筛选大片段基因组文库,可以分别得到一系列的阳性克隆,这些克隆之间...
分子杂交的DNA分子杂交探针分类
因此要得到一种特异性DNA探针,常常是比较繁琐的。探针DNA克隆的筛选也可采用血清学方法,所不同的是所建DNA文库为可表达性,克隆菌落或噬斑经裂解后释放出表达抗原,然后用来源细菌的多克隆抗血清筛选阳性克隆,所得到多个阳性克隆再经其它细菌的抗血清筛选,最后只与本细菌抗血清反应的表达克隆即含有此细菌的特异性基因...
文刮藿香： 你说跑出来不是想要的条带,可能是没有切开.另外,你给的信息太少了,不好分析.酶切后你跑出来了几条条带?单酶切还是双酶切?酶切后电泳时加原质粒对照了吗? 最好发个电泳图给我,我再给你具体分析.
临西县18329803516： PCR扩增后的目的基因如何提取分离? 对阳性克隆中的目的基因又如何提取分离? - ？
文刮藿香： PCR扩增的目的基因可以跑电泳后,把目的DNA带纹切下来,回收就可以了; 阳性克隆的目的基因,可以先对这个克隆液体培养后提取质粒(如果是重组在质粒载体上的)或染色体(如果是YAC之类的),酶切后电泳,回收. 这个有专门的回收试剂盒,很方便的.
临西县18329803516： 怎样从菌体中克隆目标基因? 怎样把克隆的基因转到质粒上? - ？
文刮藿香： 1克隆的话只要给予充足的原料和环境,然后刺激进行复制 2用相同的剪切酶在基因和质粒上剪下,因为酶一样,,所以可以把剪下的目标基因接到质粒上,当然需要连接酶的帮助
临西县18329803516： 克隆 测序 - ？
文刮藿香： 如果你只是要部分序列,直接进行PCR,产物送测序公司测序;如果你要得到全长序列,就把PCR产物进行TA克隆,将阳性菌液或者自己提取质粒然后送测序公司测序或者自己把质粒PCR后再交给测序公司测序.
临西县18329803516： 简述基因克隆的基本步骤 - ？
文刮藿香： 1. 扩增目的基因,比如通过PCR的方法. 2. PCR扩增的序列可以通过酶切或者TOPO TA的方法插入到载体质粒. 3. 转染大肠杆菌 4. 筛选阳性克隆一般常采用蓝白克隆方法,就是在载体上,序列的插入位置本来是一个完整编码β-gal这个酶的序列,如果不被破坏,产生的酶可以降解细菌培养盘上的底物,形成蓝色产物.如果有目的序列插入,这个酶就不能表达,形成的克隆就是白色的.5. 挑取阳性克隆,测序确认无变异和方向后,扩增质粒,提纯质粒.
临西县18329803516： 转基因棉花的实验流程 - ？
文刮藿香： (1)首先要设计带特定酶切位点的引物,PCR扩增含目的基因的cDNA样品进行基因克隆;(2)其次,目的基因片段和克隆载体分别进行双酶切并回收,电泳检测,吸光度测定浓度;(3)第三,载体连接并转化大肠杆菌,挑选阳性克隆;(4)第四,提取质粒,电泳检测,吸光度测定浓度;(5)第五,转化.可以直接用PEG介导法和基因枪法转化棉花细胞.如果用农杆菌介导法,质粒需要转入农杆菌并筛选阳性单克隆,然后再转化诱导的棉花愈伤组织;(6)第六,通过抗生素抗性筛选阳性细胞筛选;(7)第七,通过细胞和组织培养获得阳性植株,PCR检测目的基因的表达水平,并收种子;(8)分离能够稳定遗传且基因表达水平适中的纯合体株系.
临西县18329803516： 质粒转化感受态细胞的原理是什么(原理,感 - ？
文刮藿香： 不对,通过转化到感受态细菌中,不是细胞.感受态的大肠杆菌,可以自己制作也可以通过购买.之后将细菌凃到含有抗生素的板子上,长出克隆后挑取单克隆,将单克隆加入含有抗生素的细菌培养基中培养,之后提取质粒,提取质粒可以购买相应的试剂盒,按照试剂盒的说明书操作即可.质粒是带有抗性基因的,只有含有该质粒的细菌才能在含有对应抗生素的培养基中存活并增殖,这样就能确保是你的表达载体质粒.当然为了防止杂菌的污染,整个过程中最好是无菌操作.而表达载体质粒有可能出现突变等情况,所以可以在提出质粒之后,取少量质粒送测序,来确保序列的无误.
临西县18329803516： 细菌pcr鉴定的结果存在一定的假阳性,如何进一步确认其阳性 - ？
文刮藿香： 将PCR确定阳性挑选出几个克隆,培养后进行提质粒,酶切,电泳鉴定是否有目标片段插入,可以避免假阳性.另外,最保险的办法就是,酶切确认过的克隆,再送去测个序,保证目标片段的序列是完全正确的.当然,也可以直接取几个单克隆去测序,看哪一个是阳性.
临西县18329803516： 对PCR产物测序需要怎么准备样品 - ？
文刮藿香： 对PCR产物测序需要怎么准备样品 把目的片段连接到T载体上,然后转化到感受态细胞中培养,鉴定阳性菌落,培养转化好菌落,将提取质粒再做一下鉴定(酶切或PCR).把阳性的质粒或菌液寄给测序公司就ok了.
临西县18329803516： 质粒DNA的提取方法总共有哪些,回答的全给高分??? - ？
文刮藿香： 碱裂解法: 此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析.方法如下: 1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基. 2、37℃振荡培养过夜. 3、取1.5ml菌体于Ep管,以4000rpm离心3...
