质粒提取I 液 缺少RNA酶 会有什么现象

提质粒后有RNA污染，可以加点RNA酶处理吗~

实验室一直都是用日常型质粒抽提试剂盒，转染细胞没问题。
我觉得只要是注意以下2点就可以了：
1，注意大肠杆菌(Escherichia coli)本身的污染，收集菌体沉淀时防止菌液散落，经常用75%的乙醇擦拭手套。
2，最后洗脱时最好使用无内毒素的水，我们是用注射用水的。
无论是小提还是大提我们都是用的日常型的，并没有刻意用转染级的，因为转染量大，去内毒素的操作太麻烦，损失太大。

一般在solution I里加入RNase 的。已经提取出来的质粒有RNA污染，如果直接加RNase消化RNA，则在消化后应该使用氯仿抽提去除RNase。然后再使用醋酸钠/异丙醇沉淀回收质粒。
其实现在质粒提取kit很简单、经济，重新抽过质粒就是了。

一般不会有太大影响。只要后面操作不出问题，还是能够提取到不错的质粒的，只是在其中还会混有RNA，完全可以在提取出质粒后再加入RNAase除去RNA。但是，如果质粒最后是用TE溶液溶解的，那RNAase起到的作用有限，因为TE有一定抑制酶活力的作用。
如果有后续试验的话，建议不要用TE溶解。

一般不会有影响，只是电泳时会观察到RNA。
但如果接着做酶切回收，且酶切时间短，回收片段小时有可能会干扰回收。

会在电泳检测的时候看到明亮的弥散状的RNA条带。

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邹平县19592147820： 质粒提取I 液 缺少RNA酶 会有什么现象 - ？
戚黎回生： 会在电泳检测的时候看到明亮的弥散状的RNA条带.

邹平县19592147820： 质粒提取I 液 缺少RNA酶 会有什么现象我用的是碱裂解法.若果不加RNAase 会对下游操作和结果产生怎样的影响?在哪一步会有异常现象出现? - ？
戚黎回生：[答案] 会在电泳检测的时候看到明亮的弥散状的RNA条带.

邹平县19592147820： 在碱裂解法提取质粒DNA实验中,RNA酶可以不加入Ⅰ液,而在最后加入质粒溶液吗?如何获得更多的超螺旋质粒? - ？
戚黎回生：[答案] 若无特殊考虑,Rnase加入到Buffer 1,并低温保存是最好的.在最终收获的质粒中加入,会带来RNAase的污染,并会有寡核苷酸的带入,并可能降低你质粒的得率,你需要考虑是否对你后续实验有影响(是否还要去RNAase?).另一种情...

邹平县19592147820： RNA酶对质粒DNA有没有影响 - ？
戚黎回生： 去RNA的过程当中就有很大可能会降解DNA 这与加入RNA酶的量也是有关系的 一般情况下提出质粒后可以37度水浴半个小时 大部分RNA就会被自动降解掉了 另外附送 所有DNA接触的环境体系 必须是偏碱性的,因为DNA易被酸水解.仅供参考 谢谢

邹平县19592147820： 提取质粒还没加Rna酶为何电泳中不见Rna - ？
戚黎回生： 一般来说,提取质粒所用的试剂盒已经加入了RNase,所以电泳跑胶不会出现RNA条带.即使是采用的人工方法提取,也不可避免的空气中,汗液,唾液等中丰富的RNase的降解.此外,按照你的问题来看,你应该是再提取质粒,提取质粒然后电泳渴望观察到RNA的条带,殊不知质粒分子一般较大,其所用的琼脂糖胶浓度一般小于1%,这种浓度的胶是检测不出RNA条带的,细胞总RNA条带在跑胶时是以tRNA(约占细胞总RNA的80%)条带形式展现的.而tRNA电泳所用的胶浓度在2%左右,是不可以同质粒电泳同时在一块胶上检测的.

邹平县19592147820： 质粒提取的11个为什么 - ？
戚黎回生： 1.溶液I—溶菌液:溶菌酶:它是糖苷水解酶,能水解菌体细胞壁(cell wall)的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键,因而具有溶菌的作用.当溶液中pH小于8时,溶菌酶作用受到抑制.葡萄糖:增加溶液的粘度,维持渗透压,防止DNA受机械...

邹平县19592147820： 质粒小提试剂盒中没有RNase A,如何知道是否已经加入到Buffer A1中呢? - ？
戚黎回生： Promega的质粒提取试剂盒只有溶液I,II,III,没有RNase A 和蛋白酶抑制剂,但是Axygen就有,可能是漏发了.看看说明书.这个都是单独发的,因为除了这两个组分,其他的溶液都是室温保存的.

邹平县19592147820： 提取质粒还没加Rna酶为何电泳中不见Rna最近三次都是这样.测出的质粒浓度不是很高,A260/A280比值正常,都在1.6 - 2.2之间,就是电泳中不见rna.有人说... - ？
戚黎回生：[答案] 一般来说,提取质粒所用的试剂盒已经加入了RNase,所以电泳跑胶不会出现RNA条带.即使是采用的人工方法提取,也不可避免的空气中,汗液,唾液等中丰富的RNase的降解.此外,按照你的问题来看,你应该是再提取质粒,提取质粒然...

邹平县19592147820： 质粒DNA提取中,什么原因会导致质 - ？
戚黎回生： 首先是你的质粒拷贝数,多的当然好了.低拷贝的可以在收菌前一小时用氯霉素加压筛选下.第二看你是用试剂盒还是手提了,试剂盒的话基本没什么问题,记住几个要点就行.1)溶液2和溶液3加完后混匀要轻柔,越轻越好,否则由基因组污染.2)溶液2和溶液3最好在冰上操作.3)冷结合热洗脱,上柱时温度4度,洗脱时50度-60度.手提的话除了上述几点还要注意RNA的消除,除了LiCl沉淀以外,RNA酶也必不可少,最好37度消1小时以上.别的网上有很多相关的参考,操作时注意些没问题的.

邹平县19592147820： 刚活化后 提取的质粒(小量试剂盒提取法) 电泳图为什么会出现2、3条带? - ？
戚黎回生： 这是很正常的,质粒提取过程中或多或少会对质粒本身造成一定的损伤,根据损伤的不同,质粒通常会出现三种不同的构型,分别是双链环状,线性分子(机械损伤造成质粒链完全断开)和单链开环(双链中只有一条链断开,另外一条是闭合的...