植物组织培养中细菌的去除方法?

在植物组织培养中，微生物污染的途径主要有哪些~

防止污染的主要措施是：

(1 )改善环境条件。接种室与培养室要定期做好消毒与净化，接种前工作台或接种箱要开紫外灯30min以上。培养室的相对湿度应控制在70％左右，相对湿度太高时可以用抽湿机抽湿。

（2）接种人员的培训很关键，应严格执行无菌操作，对接种中所需的工具，必须经严格灭菌后才能使用。在超净工作台的操作区内，不要放入过多的待用材料，避免气流被挡住。还要定期检查超净工作台的工作质量[8]。
(3 )严查接种材料。淘汰被真菌与细菌污染的接种材料。

（4）经常检查消毒锅的灭菌质量，若发现问题要立即检修。消毒锅的压力表降到零后不能马上出锅，因冷热空气作用产生的负压效应，使外界环境的冷空气倒吸入已灭菌的培养瓶内引起真菌污染，为避免该现象的发生，消毒后培养瓶应待锅内稍冷却后才出锅[9]。

（5）检查培养容器是否存在问题。培养容器封口多用塑料盖、胶塞、棉塞、薄膜等，塑料盖用久了易老化，密封性差，也会造成污染。林盛等配制了一种“4号消毒液”对培养瓶瓶口进行消毒处理，可以把培养基污染率控制在0.3％以下[10]。
3 继代培养中污染的防治
初始阶段所获得的无菌材料理论上是无菌的，但在后期或继代培养中也会出现污染，这除了操作不慎带菌外，继代材料在培养室也可能被螨传播的真菌污染。这类污染可从两方面防止：（1）扩大繁殖时应有合理的程序。在获得了最初的无菌培养物之后应将其中一部分作为“原种”保存起来，分批繁殖和复检后再提供给大规模生产。（2）可通过在培养基中加入抗菌剂来防止[3]。许婉芳等将多菌灵用于金线莲组织培养的抑菌促生长，效果明显优于甲霜灵、甲基托布津及混合物，在含有多菌灵的培养基中生长的金线莲，不受微生物污染，灭菌率达100%，无白化苗，苗健壮[11]。

对植物中的内生细菌，由于它潜伏得较深，表面消毒方法无法将其消除，有时在外植体的初期培养中，包括前几代的继代培养，往往在培养基上不易被肉眼察觉，随着继代次数增加，菌量逐渐累积发展，才在培养基上显现出来[12]。黄小荣等则认为植物组培中细菌污染的原因是休眠细菌芽孢萌发的结果[13]。可以通过在培养基中添加抗菌素、茎尖培养、降低PH值等措施防止和减少细菌等内生菌污染。

王亦菲等在彩色海芋快速繁殖至4～5代时，添加200mg/L的青霉素GK，能有效抑制内生菌的生长，且不影响繁殖系数[14]。翟建中等在长春蔓的组织培养中，对了抑制内生细菌 Xanthomonas sp.，使用链霉素的作用大于庆大霉素和头孢唑林钠，培养基中同时使用二种抗菌素，有利于防治细菌的抗药性，能较长时期地控制细菌污染的发展，但链霉素剂量增高，会对植物产生毒性[15]。

在培养基中添加抗菌剂，选择合适的浓度非常关键，浓度低了效果差而浓度高又容易对植物产生毒害，影响增殖或使培养的材料变黑，出现死苗、白化苗等。两种或两种以上的抗生素结合使用可以防治细菌的抗药性。抗生素和多菌灵等一般不耐高温，需要采用过滤灭菌，在生产中添加起来很不方便，而苯甲酸钠、山梨酸钾、丙酸钠等常用作食品中的防腐剂，能耐高温高压，在组培生产中使用比较方便。

植物材料中的内生菌也可采用反复茎尖培养的方法来脱除。因为致病菌在植物体内的分布是不均匀的，通过维管束传播，茎尖分生组织是不带菌的，通过反复的茎尖培养既可脱除内生菌又可脱病毒。

除了欧文氏菌属外，大多数细菌在介质PH小于4.5时不能生长。在紫苑属、鸢尾属、蔷薇属植物组织培养中，将培养基的PH值由5.8调至3.9～4.3，可防止大量的细菌污染[7]。胡庆等用低PH值（3.10）水培并改善容器通气条件，能使严重细菌污染的绿巨人团块正常增殖，对单株的生长无害，可生根的苗的比例比常规固培要高，基本解决了遭严重细菌污染后仍能带菌生产的问题[16]。

对已污染的培养物，有时因植物材料难得或重新发生要花费很多时间，也可切取较大的植株重新消毒接种。李春燕等用400或600万单位/L的青霉素无菌水溶液分别浸泡银白杨组培细菌污染苗60min或40min，可有效防治组培中的细菌污染。经处理过的苗继代培养时，不再重复出现细菌污染现象，且苗分化能力强，生根培养时，根系发达，移栽成活率高[17]。李颖等的实验研究证明，如果继代培养中只有真菌污染，采用3%的多菌灵无菌液浸泡0.5h以上即可，用无菌水冲洗后接种或不用无菌水冲洗直接接种都可消除真菌污染。如果在细菌污染和细菌、真菌同时污染的情况下，可采用 HgCl2消毒法，把污染的培养苗切割成较长的茎段作外植体，用自来水冲洗0.5h，再在超净工作台上用乙醇和HgCl2进行短时间的处理即可再度建立无菌苗培养体系[18]。

4 减少培养基中的有机成分
培养基中有机物的存在是污染产生的重要原因，去除有机物也是减少污染的一条途径。宋锋惠等在阿月浑子的组织培养中，除去培养基中的VB1、VB6、烟酸等（保留肌醇）有机成分，经 2～3代培养后，能抑制细菌生长，对丛生芽生长增殖没有影响。原因是这些都是某些细菌生长的必需物质，除去这些有机物后，细菌无法生长发育，逐渐死亡减少[19]。由日本的古在丰树教授首创的植物无糖组培快繁技术则完全除去了培养基中的有机成分，输入可控制量的CO2气体作为碳源，并通过控制环境因子，促进植株光合作用速率，使之由异养型转变为自养型，因而植株长势良好，污染率明显降低[20]。由于去除了糖，组培苗由玻璃瓶内培养改为箱式大容器培养，也可以整个培养室作为培养容器，甚至不需要严格的无菌操作，也极少污染，这项技术至少在许多植物组培苗的促根阶段应用是十分成功的。
美国进口普卫欣天 猫有效防雾霾出门做好防护
口罩的阻尘效率的高低是以其对微细粉尘，尤其对 2.5微 米以下的呼吸性粉尘的阻隔效率为标准。因为这一粒径的粉尘能直接入肺泡，对人体健康造成的影响最大。纱布口罩，其阻尘原理是机械式过滤，就是当粉尘冲撞到纱布时，经过—层层的阻隔,将一些大颗粒粉尘阻隔在沙布中。对于一些微细粉尘，尤其是小于2.5微米的粉尘，就会从纱布的网眼中穿过去，进入呼吸系统。防尘口罩，其滤料活性炭纤维毡垫或无纺布组成，那些小 于 2.5微米的呼吸性粉尘在穿过此种滤料的过程中。

1.湿热灭菌法
通过加压提高蒸汽温度，用高压蒸汽灭菌，穿透力强，温度高，灭菌效果最好。
注意事项：1.完全排除高压灭菌器内的冷空气。有冷空气存在时，在同一表压下所达到的温度值要低，而冷空气排出越少，温度就低得越多。在高压蒸汽灭菌时，为保证达到规定的温度，必须将冷空气完全排除。否则，虽然压力达到，而温度达不到规定的要求，灭菌就不彻底。
2.紫外线 杀菌谱广，但穿透力弱，影响因素多，杀菌效能受到一定限制。
紫外线消毒效果与紫外线强度、照射时间、温度与湿度等因素有关。
我国规定紫外灯照射强度距离1m处不低于70μw/cm2。一般紫外灯使用超过100h，则应更换。表面有尘土，降低灭菌效果。紫外灯杀菌的温度以20~40℃，相对湿度40%~60%为宜。

3干热灭菌法。灼烧与火焰灭菌：灼烧主要是用于工具灭菌，在火焰上灼烧即可达到彻底灭菌，火焰灭菌通常用于无菌操作中，将试管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等反复通过火焰数次，利用火焰对管口等进行灭菌，阻止管口污染，作为无菌操作过程中的辅助灭菌手段。
4干烤灭菌：利用热辐射及干热空气进行灭菌。一般将待检灭菌的物品如金属、玻璃、陶瓷制品包装后，均可在烤箱内干热灭菌。通常加热至160℃，保温2h可完全灭菌。但不宜超过170℃，玻璃量具易变形。降温过速，骤冷易引起玻璃器皿炸裂。干热灭菌时装入干烤箱内的物品切勿紧密，应有空隙，利于热空气流动，过密，致使温度不均，部分物品灭菌不彻底

组培的灭菌是有很严格的要求的，这里我大致说下

实验用具；培养皿、镊子、玻璃棒等能经受高温高压的物件用高压蒸汽灭菌，120度灭菌半小时。实验台酒精擦拭，紫外光等照射至少15 min
外植体：首先取材上就要注意避免含病毒和微生物多的部位，一般选择正的萌动的茎段，芽，幼叶等，顶端分生组织培养也是植物脱毒的重要手段。采集的外植体首先要取出杂质，用洗衣粉或者稀释的84消毒液进行初步的洗脱尘土等附着物，之后放在清水中冲洗15 min，然后把植物体分段，剪成小段放入灭菌好的洗涤瓶，加入酒精，摇晃冲洗2遍，再加入升汞洗涤，最后用水清洗干净。放入培养基。

实验用具；培养皿、镊子、玻璃棒等能经受高温高压的物件用高压灭菌，121度灭菌40min。实验台酒精擦拭，紫外光等照射20~30 min
外植体：天气连续晴2天以上，首先取材上就要注意避免含病毒和微生物多的部位，还要无病菌，一般选择正的萌动的茎段，芽，幼叶等，顶端分生组织培养也是植物脱毒的重要手段。采集的外植体首先要取出杂质，用洗衣粉进行初步的洗脱尘土等附着物，之后放在清水中冲洗1~2h，然后把植物体分段，剪成小段放入灭菌好的洗涤瓶，加入75%酒精，30s，无菌水冲洗，再加入0.1%升汞洗涤，一般4~8min，最后无菌水清洗干净。接入培养基。有内生菌的在酒精后可用青霉素或其他抗生素溶液，然后再用升汞消毒。植物体表面绒毛较多的，消毒时加吐温。

首先是取材，取根尖分生区的细胞，这区域的细胞分裂速度快，基本不含任何细菌和病毒；至于之后的灭菌，可以使用紫外照射的方法

对培养液进行高温杀菌处理。 还可以加个紫外线照射。

你这个问题太大了，有没有具体的阶段？

对于用到的工具，如三角瓶、培养皿等当然是高压灭菌，而一般的解剖刀等直接酒精灯上烧就行。
对于一般的培养基也是需要高压灭菌后才能使用，另外，需要注意的是，有些植物激素不能直接高温，需要过滤灭菌。
至于材料，也就是外植体，也要看不同的材料，一般的用70%酒精泡1-2分钟，无菌水洗3次，再2%次氯酸钠10分钟左右就行了，当然，得在超净工作台中操作

---

登封市13436697012： 植物组织培养中 灭菌的方法主要有哪些 - ？
牧张复方： 1.湿热灭菌法 通过加压提高蒸汽温度,用高压蒸汽灭菌,穿透力强,温度高,灭菌效果最好. 注意事项:1.完全排除高压灭菌器内的冷空气.有冷空气存在时,在同一表压下所达到的温度值要低,而冷空气排出越少,温度就低得越多.在高压蒸...

登封市13436697012： 在植物组织培养中,微生物污染的途径主要有哪些 - ？
牧张复方： 防止污染的主要措施是: (1 )改善环境条件.接种室与培养室要定期做好消毒与净化,接种前工作台或接种箱要开紫外灯30min以上.培养室的相对湿度应控制在70%左右,相对湿度太高时可以用抽湿机抽湿. (2)接种人员的培训很关键,应...

登封市13436697012： 植物组织培养常用哪些消毒剂? - ？
牧张复方： 植物组织培养第一步是外植体消毒灭菌诱导愈伤组织,用的消毒剂有酒精,次氯酸钠,升汞等,如果在培养过程中发现细菌,可加入一定量的医用青霉素或链霉素,抑制细菌繁殖基数,使植物体得到正常生长.

登封市13436697012： (4)在植物组织培养过程中,为什么要进行一序列的消毒、灭菌,并且要求无菌操作?如何进行消毒、灭菌? - ？
牧张复方：[答案] 消毒杀菌是为了防止细菌也在培养基里生长,消毒一般用酒精,的要用酒精灯烧,还有的用高压锅.

登封市13436697012： 植物组织培养是否需要无菌操作?应怎样做到无菌 - ？
牧张复方： 需要.详细过程为:1.制备MS固体培养基;2.外植体消毒(将材料置于体积分数为70%的酒精中浸泡30秒,用无菌水清洗,用无菌吸水纸吸干水分,再放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2-4分郐,再用无菌水冲冼3-5次.)3.接种(所有操作均在酒精灯火焰旁进行,工作人员带囗罩,不说话等)4.培养 5移栽

登封市13436697012： 植物组织培养无菌操作技术包括哪些? - ？
牧张复方： 1外植体消毒 2培养基高压灭菌 3无菌接种技术 4培养室环境消毒技术

登封市13436697012： 组织培养中污染的主要类型,特点和控制方法有哪些 - ？
牧张复方： 组培中的污染主要是细菌污染和真菌污染.细菌污染的主要特点是在材料附近的培养基中出现浑浊和云雾状痕迹.一般在接种后的1~2天即可发现.真菌污染的特点是培养瓶内往往会出现白,黑或绿等不同颜色菌丝块.一般在3~10天就能发现.控制的话,无非就是要在组培过程中要求严格的无菌条件和无菌操作.一般来讲组培污染无非以下几点原因:1,培养基灭菌不彻底.2,外植体消毒处理不完全.3,接种操作不规范,接种器械消毒不彻底.4,培养环境不清洁等.所以,如果注意以上几点,应该能够改善.

登封市13436697012： 植物组织培养污染问题 - ？
牧张复方： 染原因1.1 外植体 ①年龄、种类和大小.成年植株带菌多;生理年龄老的材料带菌多;杂菌和内生菌多的外植体、有病虫害的植株,均易污染;室外生长的材料带菌多;表面有泥土的材料、地下器官均带菌多;表面积大的材料比表面积小的材料...

登封市13436697012： 植物组织培养过程中主要是指对什么进行灭菌消毒 - ？
牧张复方： 培养基、接种器械和器皿、蒸馏水和滤纸、无菌室、超净工作台、接种工作者自身的消毒和灭菌、外植体的消毒、被污染的组培苗和培养瓶的处理

登封市13436697012： 除了表面消毒之外,对于植物内生菌该如何处理? - ？
牧张复方： 表面消毒能杀死植物内生菌吗?表面消毒的常用方法有70~75%乙醇浸泡、0.1%升汞浸泡、次氯酸钠浸泡、氯气消毒你没有提供是什么植物的什么部位,那么消毒方法、试剂、时间都是不同的哟.