以基因为模板，pcr方法获得基因，运用puc18载体说明克隆和筛选过程
pUC18是适合于双脱氧法DNA测序的载体，通常运用于重组dna的分子克隆中，首先我们制备大肠杆菌的感受态细胞（能接受外来重组的dna），这种感受态菌株必须不同外来DNA分子发生遗传重组，通常是rec基因缺陷型的突变体，同时它们必须是限制系统缺陷或限制与修饰系统均缺陷的菌株，即具有这三种缺陷（rk mk rec ），同时对氨苄青霉素敏感（ap）。
液体发酵每毫升200-300亿，液体发酵增加活菌含量，不太可能。
只有加入载体烘干，再次加入菌液，烘干。
这样重复就可以增加含菌量。
不过这些都不是活菌，基本都是芽孢。
进入肠道需要激活。能够激活成活菌的数量就很难说了，没有人做过这样的实验。
pcr扩增出来的东西与模版dna完全一致吗?还是说只扩增出模版中的某一段...
真核生物DNA里边是有非基因序列的,如果你不想要这些非基因序列,就用mRNA做模板,然后做反转录,得到cDNA, 再用PCR扩增(设计引物时要根据cDNA序列),得到的产物中间应该是不会有非基因序列的。关于反转录:http:\/\/baike.baidu.com\/view\/540413.htm如果要和模板一样,需要用保守的DNA聚合酶,一般的Taq酶会有错配。
pcr的产物可以不可以直接拿来做模板再进行pcr
一般不建议这样做。除非你做巢式PCR。以PCR产物作为模板，首先必须保证你的PCR产物经过纯化，成分单一，因此，无论怎样，第一轮PCR产物都要进行纯化，并且必须使用高保真酶以减少碱基错配的可能。这样才能以第一轮PCR产物为模板进行第二轮扩增。（用于巢式pcr）....
目的基因pcr检测原理是什么?
目的基因 PCR 检测首先需要选定目标基因的特异性序列，并设计特异性引物。引物分别配对并结合在目的基因的两端，PCR 扩增需要参考目的基因的序列信息，以确保引物特异性和扩增产品的准确性。将待检测的样本 DNA 提取出来，加入 PCR 反应体系中，并进行 PCR 扩增。在高温下，DNA 双链解旋，形成单链模板；...
应用RT-PCR研究外源基因转录表达的优缺点
和Southern杂交相同，Northern杂交包括斑点杂交和印迹杂交。也可用RT-PCR（reverse transcribed PCR）方法检测外源DNA在植物体内的转录表达。其原理是以植物总RNA或mRNA为模板进行反转录，然后再经PCR扩增。如果从细胞总RNA提取物中得到特异的cDNA扩增条带，则表明外源基因实现了转录。此法简单、快速，但对外源...
PCR技术的原理是什么?
PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板...
由PCR技术复制的基因由于引物与模板的随机结合,那它扩增的目的基因与模...
引物和模板不是随机结合的。我们要扩增目的基因时，会设计和目的基因特异性结合的F\/R两个引物，大小20bp左右，然后去跑PCR。扩增产物去跑电泳检测目的基因是否被扩增出来。如果没有扩增出来则需要通过改变PCR程序、重新设计引物等方法重新扩增，直至目的基因被扩增出来，如果目的基因过长，可以通过把目的基因...
荧光定量PCR的模板可以是DNA吗?内含子对其有无影响?
在实时荧光PCR中。模板的定量有2种方法：绝对定量和相对定量。绝对定量一般通过已知的标准曲线来确定我们所感兴趣基因的拷贝数；相对定量指在一定样品中靶序列相对于另一参照序列的量的变化.如果你做的是DNA的定量，可以用DNA 模板。你用质粒作为标准品做标准曲线，最后可以换算出来拷贝数，这是绝对定量。...
融合PCR-基因敲除
步骤揭秘 首先，通过PCR扩增出目标基因（如ADE2）的两端片段，如1.2-1.5kb（P1\/P2和P3\/P4），以及抗性基因片段（P5\/P6）。接着，采用Overlap PCR技术，将这三个片段精确混合，确保体系中DNA总量不超过300 ng，确保了精确的重组。然后，使用Overlap PCR产物作为模板，扩增Split marker片段，这些片段将...
rtpcr和实时荧光定量pcr区别是什么?
2、RT-PCR一般情况下是指反转录PCR（reverse transcription），尽管有些资料上说实时荧光定量PCR也（realtime fluores-cence quantitative PCR）也简称RT-PCR，但是这是不对的，不推荐。基本操作过程是将所提取的RNA进行反转录，然后将所获得的cDNA作为模板，设计引物进行扩增，是一种检测基因表达的常用方法...
简述PCR技术操作步骤
PCR即聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction）的缩写，它是体外酶促合成特异DNA片段的方法。这一方法的要点是合成两个分别互补于待扩增DNA片段两端的小片段引物，在含有引物、待扩增DNA模板核苷酸底物和DNA多聚酶的反应体系中DNA复制反复进行，在短时间内可以取得大量扩增产物。其原理是寡聚核苷酸链引物...
月览康迈： 根据基因,用Primer Premier 5 软件设计引物合成引物.利用高保证酶进行PCR扩增,扩增产物经纯化或胶回收得到目的片段.将目的片段、载体、Buffer按使用说明混合均匀过夜.经转化(重组载体加入感受态细胞,冰浴30min,42度热激90s,加入LB培养1.5--2h,收集菌体涂平板)14-16h后挑取单克隆培养4-6h后即可通过PCR进行阳性克隆的检测.
牟定县17163676827： 设计简单的引物;如何通过PCR获得目的基因 - ？
月览康迈： PCR技术是扩增目的基因的方法.在这个过程中需要模板、原料、引物和酶等条件.包括三个阶段 一、变性:加热到90-95度,目的基因两条链解旋 二、复性:冷却到55-60度,引物结合到模板链上 三、延伸:加热到70-75度,合成子链.
牟定县17163676827： 如图表示在生物体外获取DNA(或目的基因)的两种方式.图一示经PCR技术扩增获取DNA的过程.PCR是聚合酶链式反应的缩写.PCR方法模仿体内DNA的... - ？
月览康迈：[答案] (1)DNA聚合酶的化学本质是蛋白质;PCR扩增DNA片段的DNA聚合酶是耐高温的DNA聚合酶,具有热稳定性.(2)人体内DNA分子复制过程中DNA的解旋过程由解旋酶催化完成,DNA分子复制方式是半保留复制,需要模板、原料、酶...
牟定县17163676827： 怎样从基因文库中提取目的基因 - ？
月览康迈： PCR技术是DNA扩增技术,它能在比较短的时间内产生大量的DNA.在获取目的基因后才使用PCR技术.获得目的基因的方法:一、构建基因文库 提取总DNA.用限制性内切酶将总DNA切成小片段,连到质粒或噬菌体载体上,把这些质粒转化...
牟定县17163676827： PCR扩增技术获取目的基因的原理是? - ？
月览康迈：[答案] PCR技术的基本原理 类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物.PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PC...
牟定县17163676827： 请问用PCR技术获得目的基因的大致步骤是什么? - ？
月览康迈：[答案] 1.DNA变性(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA2.退火(25℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链.3.延伸(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右最佳的活性)的作用下,以dNTP为...
牟定县17163676827： 下列获取目的基因的方法中需要模板链的是() ①从基因文库中获取目的基因 ②利用PCR技术扩增目的基因 ③反转录法 ④通过DNA合成仪利用化学方法人... - ？
月览康迈：[选项] A. ①②③④ B. ①②③ C. ②①④ D. ②③
牟定县17163676827： PCR怎么获得目的基因 - ？
月览康迈： PCR是根据建基互补的原则来进行DNA扩增的.用PCR来获得目的基因,是依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物(即上游引物,下游引物).通过PCR的变性--退火--延伸三个基本反应,在引物区间内的基因就能大量被复制,达到钓取基因...
牟定县17163676827： 如何采用pcr技术从生物材料中分离出目的基因 - ？
月览康迈： PCR 不是分离目的基因的技术,它是从生物体获取目的基因之后快速扩增技术. 获取目的基因:从生物体分离、人工合成.常用方法:基因文库获取、反转录(提取相应的mRNA通过反转录)、人工合成(目的基因片段序列已知)
牟定县17163676827： 如何采用PCR技术从生物材料中分离目的基因 - ？
月览康迈： 利用PCR技术获得基因的话有很多种:1)没有内含子的基因,直接可以设计引物从DNA中扩增出来2)有内含子的,可以利用RNA反转录得到的cDNA为模板,扩增获得3)基因组测序没有完成的物种,可以利用RACE的方法获得相应的基因 除此之外,还有很多方法.
