荧光定量PCR的应用领域
．荧光共振能量传递 (FRET)
某荧光标记基团在激发光刺激下生成某波长的发射光，当另一屏蔽基团与其距离合适时，原发射光将会被屏蔽基团所吸收，并转化为其他波长的发射光或热能，称之为FRET。
2．荧光化学：
荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’－3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
二．实时荧光PCR技术靶基因的确定及引物和探针的设计原则
1．靶基因的确定：选择检测组共有的基因以避免检测的假阴性(漏检)。
2．检测片段的确定：选择检测组内的保守 (突变少)（避免假阴性）、组间特异的序列 (突变多)（避免假阳性）作为引物探针的设计位置。片段长度70-150bp。
3．引物：长度17-25bp;GC含量30-80%;退火温度(Tm值)58-60℃；避免稳定的引物二聚体（特别是多联检测）及发夹结构(自由能大于-3.5kc/m)；序列不能出现连续的G，3’端避免G或C，最后5个碱基内避免两个以上的G或C。
4．探针：长度20-30bp（Taqman)或16-25bp(MGB)；GC含量30-80%；Tm值为68-70℃；避免稳定的二聚体及发夹结构 (自由能大于-3.5kc/m)；5’端不能是G；位置尽量靠近上游引物；选择波长差异较大（多联检测）或Fam(单联检测）的荧光标记。
三.特点和优势
1．特异性强：引物和探针的“双保险”，避免检测的假阳性。
2．灵敏度高：分析PCR产物的对数期，自动化仪器收集荧光信号，避免了许多人为因素干扰。
3．避免污染：全封闭反应，无须PCR后处理。
4．实现定量：运用标准品获得标准曲线，结合Ct值进行准确定量。
5．高效低耗：可实现一管多检。
6．操作简便：在线式实时监测扩增结果，不必接触有害物质。
7．快速：反应时间<1.5小时。
四．实用意义：
1．提高检测效率，缩短检测周期，提高通关速度；
2．降低检测成本，提高经济与社会效益。
1、核酸的基础研究：基因组克隆
2、不对称PCR制备单链DNA用于DNA测序
3、反向PCR测定未知DNA区域
4、反转录PCR（RT-PCR）用于检测细胞中基因表达水平、RNA病毒量以及直接克隆特定基因的cDNA
5、荧光定量PCR用于对PCR产物实时监控
6、cDNA末端快速扩增技术
7、检测基因的表达
8、医学应用：检测细菌、病毒类疾病；诊断遗传疾病；诊断肿瘤；应用于法医物证学。
TL988型实时荧光定量PCR仪应用领域临床疾病诊断：各型肝炎、艾滋病、禽流感、结核、性病等传染病诊断和疗效评价；地中海贫血、血友病、性别发育异常、智力低下综合症、胎儿畸形等优生优育检测；肿瘤标志物及瘤基因检测实现肿瘤病诊断；遗传基因检测实现遗传病诊断。
动物疾病检测：禽流感、新城疫、口蹄疫、猪瘟、沙门菌、大肠埃希菌、胸膜肺炎放线杆菌、寄生虫病等、炭疽芽孢杆菌。
食品安全：食源微生物、食品过敏源、转基因、乳品企业阪崎肠杆菌等检测。
科学研究：医学、农牧、生物相关分子生物学定量研究。
应用行业：各级各类医疗机构、大学及研究所、CDC、检验检疫局、兽医站、食品企业及乳品厂等。
荧光定量pcr与FPKM值有什么差别?
深入解析：荧光定量PCR与FPKM值的差异与联系荧光定量PCR（qPCR）和FPKM值，作为基因表达量测量的两种重要工具，它们在揭示基因表达水平时各有独特的原理和应用场景。首先，让我们来看看FPKM的内涵。FPKM，全称为 Fragments Per Kilobase of transcript per Million mapped reads，是RNA-Seq技术中衡量基因表达...
荧光定量PCR(一)— 基础介绍
荧光淬灭的形式很多，机理也比较复杂。主要有如下几种类型 荧光定量PCR技术是为了测定样本中特异的PCR片段相对及绝对量，是一种测定特异的PCR片段含量的方式。如测定病人样本中病原体的含量、实验样本中某一特定的mRNA的含量等。为了达到高效反应，应将实时PCR应用的引物设计为能生成短的扩增子。常用的方法...
荧光定量PCR技术荧光定量PCR的方法
要了解荧光定量PCR技术，首先需掌握选择合适方法的要点。荧光定量PCR技术主要依赖于两种荧光化学物质：荧光探针和荧光染料。方法上分为特异性和非特异性两大类。特异性方法，如使用基因特异寡核苷酸探针，通过标记荧光染料在PCR反应中检测产物，具有较高的特异性，但过程较为复杂。而非特异性方法则是通过在...
荧光定量pcr原理
传统的PCR进行检测时，扩增反应后需要进行染色处理及电泳分离，并且只能作定性分析，不能准确定量，易造成污染出现假阳性，使其应用受到限制。实时定量PCR技术不仅实现了对模板的定量，且具有灵敏度高、特异性和可靠性更好、自动化程度高和无污染的特点，使得荧光定量PCR逐渐取代常规PCR。在PCR扩增反应的最初...
什么是实时荧光定量PCR?有什么作用?请详细说明。
实时定量PCR (real-time quantitative PCR)是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的基因的初始量，不需要取出PCR产物进行分离。目前实时定量PCR作为一个极有效的实验方法，已被广泛地应用于分子生物学研究的各个领域。实时荧光定量PCR 技术的主要应用：1...
普通pcr引物设计和荧光定量pcr引物设计的区别
2、荧光定量pcr引物设计：在PCR反应体系中加入荧光基团，通过荧光信号不断累积而实现实时监测PCR全程，然后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在实时荧光定量PCR中，对全程PCR扩增过程进行实时检测，根据反应时间和荧光信号的变化可以绘制成一条曲线。三、注意事项不同 1、普通pcr引物设计：引物应用...
实时荧光定量PCR实验数据分析(超全教程)
其基本原理涉及Ct值的计算，它是PCR信号达到阈值时所需的循环数。PCR曲线可分为基线期、指数增长期、线性增长期和平台期，Ct值主要在指数增长期确定模板含量，因为此时扩增效率相对稳定，数据准确可靠。通过Ct值，我们可以计算出初始模板分子数，但需注意，实际应用中需依赖标准曲线来校准，比如建立标准品的...
qpcr原理及应用是什么?
反应的 Cq主要由扩增反应开始时存在的模板量决定。如果在反应开始时存在大量模板，则需要相对较少的扩增循环来积累足够的产物以产生高于背景的荧光信号。因此，反应将具有低的或早期的 Cq。二、应用 实时荧光定量 PCR\/qPCR 检测已成为快速、灵敏地测定和定量各种生物样品中核酸的首选工具，具有多种应用，...
实时荧光定量 PCR
实时荧光定量 PCR ,简称 RT-QPCR, 属于 Q-PCR 的一种,目前该技术已得到广泛应用,如:扩增特异性分析、基因定量分析、基因分型、 SNP 分析等。荧光定量 PCR 常用的方法是 DNA 结合染料 SYBR GreenⅠ的非特异性方法。 SYBR Green I 是一种结合于所有 dsDNA 双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的荧光染料, 可与所...
荧光定量PCR与普通PCR相比有哪些不同?.生意经求助
|||原理不同：荧光定量pcr实时监测与dna结合的荧光染料激发的荧光；普通pcr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量，一般是紫外光。反应要求：荧光定量对扩增片段有较高的要求，一般为100-300bp；普通定量可以扩增长点的片段。如果不需要检测产物分子量大小，荧光定量可以不进行电泳就对产物进行...
撒贩女金：[答案] 1、核酸的基础研究:基因组克隆 2、不对称PCR制备单链DNA用于DNA测序 3、反向PCR测定未知DNA区域 4、反转录PCR(RT-PCR)用于检测细胞中基因表达水平、RNA病毒量以及直接克隆特定基因的cDNA 5、荧光定量PCR用于对PCR产物实时...
通许县15199711173： 荧光定量PCR的应用领域 - ？
撒贩女金： TL988型实时荧光定量PCR仪应用领域临床疾病诊断:各型肝炎、艾滋病、禽流感、结核、性病等传染病诊断和疗效评价;地中海贫血、血友病、性别发育异常、智力低下综合症、胎儿畸形等优生优育检测;肿瘤标志物及瘤基因检测实现肿瘤病诊断;遗传基因检测实现遗传病诊断.动物疾病检测:禽流感、新城疫、口蹄疫、猪瘟、沙门菌、大肠埃希菌、胸膜肺炎放线杆菌、寄生虫病等、炭疽芽孢杆菌.食品安全:食源微生物、食品过敏源、转基因、乳品企业阪崎肠杆菌等检测.科学研究:医学、农牧、生物相关分子生物学定量研究.应用行业:各级各类医疗机构、大学及研究所、CDC、检验检疫局、兽医站、食品企业及乳品厂等.
通许县15199711173： PCR技术应用的领域有哪些 - ？
撒贩女金： 1、核酸的基础研究:基因组克隆 2、不对称PCR制备单链DNA用于DNA测序 3、反向PCR测定未知DNA区域 4、反转录PCR(RT-PCR)用于检测细胞中基因表达水平、RNA病毒量以及直接克隆特定基因的cDNA 5、荧光定量PCR用于对PCR产物实时监控 6、cDNA末端快速扩增技术 7、检测基因的表达 8、医学应用:检测细菌、病毒类疾病;诊断遗传疾病;诊断肿瘤;应用于法医物证学.
通许县15199711173： PCR技术有哪些用途 - ？
撒贩女金：[答案] 1、核酸的基础研究:基因组克隆2、不对称PCR制备单链DNA用于DNA测序3、反向PCR测定未知DNA区域4、反转录PCR(RT-PCR)用于检测细胞中基因表达水平、RNA病毒量以及直接克隆特定基因的cDNA5、荧光定量PCR用于对PCR产物...
通许县15199711173： 实时荧光定量pcr仪的医疗应用 - ？
撒贩女金： 目前,采用荧光定量PCR检测技术可以对淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、结核分枝杆菌、EB病毒和巨细胞病毒等病原体进行定量测定.与传统的检测方法相比具...
通许县15199711173： 数字PCR对比荧光定量PCR有哪些独特的应用领域? - ？
撒贩女金： 单细胞基因表达分析,低拷贝数基因的绝对定量,低丰度及稀有突变检测.
通许县15199711173： 实时荧光定量pcr仪的应用是怎样的? ？
撒贩女金： 由于荧光定量PCR方法的快速、灵敏、定量的特点,其在研究及开发方面的应用是不胜枚举的,如研究个人基因型与药物疗效之间的关系等;研究人员也可以根据自己研究项目开发其新的用途.
通许县15199711173： 请问下在生物中PCR技术是什么,有什么样的现实应用 - ？
撒贩女金： 聚合酶链式反应,相当于体外的人工DNA复制.可用于亲子鉴定、法医鉴定时将样本DNA扩增,还可用于基因工程中目的基因的获取.
通许县15199711173： 荧光定量PCR技术在临床微生物检测中的应用哪里有详细的说明,求生物技术网站 - ？
撒贩女金： 荧光定量PCR技术是近些年来发展起来的一种核酸检测技术,它以灵敏度高、特异性强、重复性好、快速准确定量等特点被广泛应用于各个领域,你可以到生物帮那里查看下荧光定量PCR技术在临床微生物检测中的应用,那里有文档介绍荧光定量PCR技术在病毒、细菌、真菌和寄生虫4个临床微生物检测方面的应用进展,我不久前才看到过的.那里的技术方面的资讯信息挺丰富的. 有时间楼主可以去( YINGG.www.bio1000.com/ )查找一下,希望可以解决你的问题
