谁知道分光光度计的校正方法

分光光度计的校正~

一、分光光度计:又称光谱仪(spectrometer)，是将成分复杂的光，分解为光谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380~780nm的可见光区和波长范围为200～380nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。钨灯的发射光谱：钨灯光源所发出的380～780nm波长的光谱光通过三棱镜折射后，可得到由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱；该色谱可作为可见光分光光度计的光源。原理：分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光线透过测试的样品后，部分光线被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比，其关系如下式：A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc式中:A为吸光度；I。为入射的单色光强度；I为透射的单色光强度；T为物质的透射率；k为摩尔吸收系数；L为被分析物质的光程，即比色皿的边长；c为物质的浓度；物质对光的选择性吸收波长，以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后可用同样条件将该供试品配成溶液，测定其吸收度,即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多，且常使用单色光纯度较差的仪器，故测定时应用标准品或对照品同时操作。

紫外分光光度计的校正方法：分光光度法的最重要的一个物理化学量是吸光度。为了获得准确的研究结果，准确测得样品溶液的吸光度是非常重要的。一般，分析结果的不可靠性与偶然误差和系统误差有关。
偶然误差影响测量的精密度，可通过足够数量测量的统计处理来减少;系统误差影响测量结果的准确度，可在大体相同实验条件下，用比较一种物质的准确测量结果，使系统误差统一起来。
而分光光度计的系统误差(波长校正、分光光度计的慢散光、放大器的线性响应、暗电流和比色皿的光程)和操作误差(温度改变、仪器读数、操作者的改变、使用物质的纯度、称量和浓度、pH)对测量吸光度的影响是可以检查和校正的。
关于操作误差，多数情况下，通过严格按操作程序测量、仪器调零、准确称量等来控制或减少这种误差的产生。关于仪器的系统误差，可通过对分光光度计的定期校正来克服，若所需准确度很高的测量，则必须天天校正。


扩展资料

紫外分光光度计主要应用

1、鉴定物质
根据吸收光谱图上的一些特征吸收，特别是最大吸收波长λmax和摩尔吸收系数ε是检定物质的常用物理参数。这在药物分析上就有着很广泛的应用。在国内外的药典中，已将众多的药物紫外吸收光谱的最大吸收波长和吸收系数载入其中，为药物分析提供了很好的手段。
2、与标准物及标准图谱对照
将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中，在同一条件下分别测定紫外可见吸收光谱。若两者是同一物质，则两者的光谱图应完全一致。如果没有标样，也可以和现成的标 准谱图对照进行比较。这种方法要求仪器准确，精密度高，且测定条件要相同。
3、比较最大吸收波长吸收系数的一致性
4、纯度检验
5、推测化合物的分子结构
6、氢键强度的测定
实验证明，不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同，这可以利用紫外光谱来判断化合物在不 同溶剂中氢键强度，以确定选择哪一种溶剂 。

参考资料来源：百度百科-紫外分光光度计

一、 分光光度计及其分类

利用分光光度法或技术工作的仪器叫分光光度计,可分为如下几类:
一、 分光光度计检定(测试)的主要项目对分析结果的影响

1)波长准确度
分光光度法原理要求照射在样品池上的单色光必须对应于样品吸收光谱中的某一个吸收峰的波长。由于仪器的制造和调整误差，单色光的实际波长与仪器的波长读数值间都存在一定的误差。样品中绝大部分的主要吸收峰都有一定的宽度，对波长准确度要求允许宽些。但是，当吸收峰宽度较小，而且吸收峰两侧边缘比较陡直，此时波长准确度的影响就必须引起注意

2)透射比（吸光度）准确度
很显然,透射比或吸光度的误差越大,测试结果的可信性越差,从而影响到测试数据的准确性.

3)杂散光
杂散光是由于光学元件制造误差以及光学和机械零件表面的漫反射形成的。杂散光是分析样品的非吸收光，随着样品浓度的增加，杂散光的影响也随之增大，将给分析结果带来一定的误差。在紫外的短波区域光源强度和检测器的灵敏度均明显减弱，杂散光的影响更不能忽视。因此，杂散光的大小也是仪器性能的一项重要指标。

二、 与分光光度计正确使用和维护有关的几个注意事项
1） 若大幅度改变测试波长，需稍等片刻，等灯热平衡后，重新校正“0”和“100%”点。然后再测量。

2）指针式仪器在未接通电源时，电表的指针必须位于零刻度上。若不是这种情况，需进行机械调零。

3） 比色皿使用完毕后，请立即用蒸馏水冲洗干净，并用干净柔软的纱布将水迹擦去，以防止表面光洁度被破坏，影响比色皿的透光率。

4） 操作人员不应轻易动灯泡及反光镜灯，以免影响光效率。

5） WFZ800-DA、756型等分光光度计，由于其光电接收装置为光电倍增管，它本身的特点是放大倍数大，因而可以用于检测微弱光电信号，而不能用来检测强光。否则容易产生信号漂移，灵敏度下降。针对其上述特点，在维修、使用此类仪器时应注意不让光电倍增管长时间暴露于光下，因此在预热时，应打开比色皿盖或使用挡光杆，避免长时间照射使其性能漂移而导致工作不稳。
一、 分光光度计及其分类

利用分光光度法或技术工作的仪器叫分光光度计,可分为如下几类:
一、 分光光度计检定(测试)的主要项目对分析结果的影响

1)波长准确度

分光光度法原理要求照射在样品池上的单色光必须对应于样品吸收光谱中的某一个吸收峰的波长。由于仪器的制造和调整误差，单色光的实际波长与仪器的波长读数值间都存在一定的误差。样品中绝大部分的主要吸收峰都有一定的宽度，对波长准确度要求允许宽些。但是，当吸收峰宽度较小，而且吸收峰两侧边缘比较陡直，此时波长准确度的影响就必须引起注意。

2)透射比（吸光度）准确度

很显然,透射比或吸光度的误差越大,测试结果的可信性越差,从而影响到测试数据的准确性.

3)杂散光

杂散光是由于光学元件制造误差以及光学和机械零件表面的漫反射形成的。杂散光是分析样品的非吸收光，随着样品浓度的增加，杂散光的影响也随之增大，将给分析结果带来一定的误差。在紫外的短波区域光源强度和检测器的灵敏度均明显减弱，杂散光的影响更不能忽视。因此，杂散光的大小也是仪器性能的一项重要指标。

二、 与分光光度计正确使用和维护有关的几个注意事项

（在使用仪器前，必须仔细阅读其使用说明书）

1） 若大幅度改变测试波长，需稍等片刻，等灯热平衡后，重新校正“0”和“100%”点。然后再测量。

2）指针式仪器在未接通电源时，电表的指针必须位于零刻度上。若不是这种情况，需进行机械调零。

3） 比色皿使用完毕后，请立即用蒸馏水冲洗干净，并用干净柔软的纱布将水迹擦去，以防止表面光洁度被破坏，影响比色皿的透光率。

4） 操作人员不应轻易动灯泡及反光镜灯，以免影响光效率。

5） WFZ800-DA、756型等分光光度计，由于其光电接收装置为光电倍增管，它本身的特点是放大倍数大，因而可以用于检测微弱光电信号，而不能用来检测强光。否则容易产生信号漂移，灵敏度下降。针对其上述特点，在维修、使用此类仪器时应注意不让光电倍增管长时间暴露于光下，因此在预热时，应打开比色皿盖或使用挡光杆，避免长时间照射使其性能漂移而导致工作不稳。

6） 放大器灵敏度换挡后，必须重新调零。

7） 比色杯的配套性问题。比色杯必须配套使用，否则将使测试结果失去意义。在进行每次测试前均应进行比较。具体方法如下；分别向被测的两只杯子里注入同样的溶液，把仪器置于某一波长处，石英比色杯；220nm、700nm装蒸馏水，玻璃比色杯：700nm处装蒸馏水，将某一个池的透射比值调至100%，测量其他各池的透射比值，记录其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范围内则可以配套使用，若超出此范围应考虑其对测试结果的影响。

四、分光光度计操作中容易出现的几个典型故障及其排除方法

1） 仪器不能调零。可能原因：a）光门不能完全关闭。解决方法：修复光门部件，使其完全关闭。 b）透过率“100%”旋到底了。解决方法：重新调整“100%”旋钮。c）仪器严重受潮。解决方法：可打开光电管暗盒，用电吹风吹上一会儿使其干燥，并更换干燥剂。d）电路故障。解决方法：送修理部门，检修电路。

2） 仪器不能调“100%”。可能原因：a）光能量不够。解决方法：增加灵敏度倍率档位，或更换光源灯（尽管灯还亮）。b）比色皿架未落位。解决方法：调整比色皿架使其落位。c）光电转换部分老化。解决方法：更换部件。d）电路故障。解决方法：调修电路。

3) 测量过程中,“100%”点经常变动。可能原因：a）比色皿在比色皿架中放置的位置不一致，或其表面有液滴。解决方法：用擦镜纸擦干净比色皿表面，然后将其安放在比色槽的左边，上面用定位夹定位。b）电路故障（电压、光电接收、放大电路）。解决方法：送修。

4)数显不稳。可能原因：a）预热时间不够。解决方法：延长预热时间至30分钟左右（部分仪器由于老化等原因，长时间处于工作状态时，也会工作不稳）。b）光电管内的干燥剂失效，使微电流放大器受潮。解决方法：烘烤电路，并更换或烘烤干燥剂。c）环境振动过大、光源附近空气流速大、外界强光照射等。解决方法：改善工作环境。d）光电管、电路等其它原因。解决方法：送修。

五、提高分光光度计透射比检定及使用精度的几种 方法

在分光光度计的使用或检定中,透射比(吸光度)的准确度是衡量仪器工作性能的一项重要指标,它的准确程度直接关系到所测数据的可信性及科学性。所以提高此项指标的使用及检定准确度显得尤为重要。下面结合近年来对分光光度计的检定或修理实践,把如何提高透射比的测试及使用精度的几点方法列表叙述如下：
透射比准确度偏低的原因 相应的解决办法

(1) 通过样品池的光斑 调整光源位置,使 不居中 光斑居中

(2) 样品池架的推拉装置定 测试时反复推拉, 位不精确 (微量杯) 加强定位或修复

(3) 预热时间不够或过长 根据仪器具体情况延长或缩短预热时间

(4) 光源强度不够,使噪声 更换新的光源(尤的影响相对明显,进而影 其是紫外光源)响测试结果

(5)光电转换部分老化 更换新的光电转换装置

(6)计量检定中没有正 在计量检定中,确使用空白比色架 以空气做参比时,使用空白比色架,确保进入样品及参比的光量一致

(7)参比杯与样品杯不 使用透射比之差配套 在0.5%范围内的配套比色杯。

分光光度计关于操作误差,多数情况下,通过严格按操作程序测量、仪器调零、准确称量等来控制或减少这种误差的产生.关于仪器的系统误差,可通过对分光光度计的定期校正来克服,若所需准确度很高的测量,则必须天天校正.
1.配制60mg/L的重铬酸钾溶液　
　　在天平上称取已干燥的重铬酸钾60mg,准确至+-0.1mg.放在烧杯中,用适量蒸馏水溶解,并加入1ml（0.1mol/L）的高氯酸.然后转移到1000ml的容量瓶中,在蒸馏水稀释至刻度.
　　2.浓度为60mg/L的重铬酸钾溶液在各温度下的投射比（光谱宽度为2nm）　
　　波长235350（nm）温度（℃）　　
　　1018.022.6　
　　1518.022.7　
　　2018.122.8　　
　　2518.222.9　　
　　3018.322.9　　
　　3.要有可见中性虑光片（其透过比为10%,20%,30%准确度优于+-0.2%）　
　　4.要有投射比配对误差不打鱼0.1%的石英吸收池一对　
　　5.投射比准确度+-0.5%,重复度+-0.5%　　
　　6.光谱宽度为2nm,按要求校正仪器零点.高氯酸盛于10mm厚的石英吸收池中,调投射比为100%,将经标定过的重铬酸钾盛于另一石英吸收池中,置于光浴,按步骤2提供的数据每个波长测试三遍,三次平均值与标准值之差为其可见光区透射比的准确度.三次测量的最大值和最小值之差为可见光区的重复性.

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金坛市18637621590： 紫外分光光度计如何校正? - ？
代泄统克：[答案] 分光光度计关于操作误差,多数情况下,通过严格按操作程序测量、仪器调零、准确称量等来控制或减少这种误差的产生.关于仪器的系统误差,可通过对分光光度计的定期校正来克服,若所需准确度很高的测量,则必须天天校正. 1.配制60mg/L的重...

金坛市18637621590： 紫外可见分光光度计的波长怎样校正 - ？
代泄统克：[答案] 1.调整(1) 在接通电源前,应对仪器的安全性进行检查,电源线接线应牢固,接地线通地要良好,各个调节旋钮的起始位... [100.0]左右,预热20min . 根据溶液浓度大小,选择液层厚度合适的吸收池. 2.校正(!)打开吸收池暗室盖(光门自动关闭)...

金坛市18637621590： 在使用光度计前,为什么要进行光度计波长校正?校正方法有哪些? - ？
代泄统克：[答案] 分光光度计在使用过程中,由于机械振动,温度变化、灯丝变形、灯座松动或更换灯泡等原因,经常会引起刻度盘上的波长读数与实际通过溶液的波长不符合的现象,从而导致仪器灵敏度降低,影响测定结果的精度,需要经常校正. 校正波长读数的...

金坛市18637621590： 求紫外分光光度计的校正步骤 - ？
代泄统克： 校正吸光度常用一很纯物质 一定浓度的溶液为标准,且此溶液的吸光度系数经不同实验室核对,为了使标准液吸光度不受测定波长的微移动而有改变,常选择具有较平滑吸收高峰的物质. 同时要求溶液稳定,且在相当的波长范围内吸收度的改...

金坛市18637621590： 求紫外分光光度计的校正步骤？
代泄统克： 1.开机预热10分钟足矣 2.放入黑块和标样(没有的自己配),关闭盖子 3.校0: a把灯光对着黑块,把透光度调0, b把灯光对标样,将吸光度调到100%

金坛市18637621590： 721紫外分光光度计怎么校准 - ？
代泄统克： 放入见准物质,比如空白或者水,然后按100%

金坛市18637621590： 4510F原子吸收分光光度计仪器怎样校准 - ？
代泄统克： 校准规程 : 1、基本操作 1.1、连接仪器电源,确保仪器供电电源有良好的接地性能.1.2、接通电源,使仪器最好预热20分钟. 1.3、 用“功能”键设置测试方式:透射比(T),吸光度(A),已知标准样品浓度值方式(C)和已知标准样品...

金坛市18637621590： 如何调校,使用722n可见分光光度计 - ？
代泄统克： 我们是化验:钼、硅、等.方法打开开关预热一会,波长调至自己需要,在有显示器最右边第一个灯亮,再按至显示-00.0.再往外拉一下下面的按钮,显示多少就OK了.