成功的悬浮细胞培养体系需要哪些条件?
人们长期的研究结果表明,离体细胞培养需要的基本条件就是下列细胞生理条件。
(1)温度 温度过低时细胞生长缓慢甚至不生长。利用冷冻保藏细胞可保持细胞的原有分裂分化能力。温度过高导致细胞死亡。这主要是由酶和蛋白质所需要的最适温度决定的。多数生物大分子遇到高温后容易导致空间结构改变或者丧失(变性)。细胞膜遇到高温后容易变态。在自然界,既有耐高温的
恒温培养箱
细胞,也有耐低温的细胞。在极端情况下生长的生物对付极端环境的机制研究在生物进化和农业、环保、发酵工业中意义重大。
(2)pH 过酸或过碱可导致细胞死亡。这主要与蛋白质的变性和细胞膜的结构受损有关。
(3)渗透压 细胞内外可溶于水的物质比例和种类决定细胞的膨胀与收缩程度,因为细胞膜是半透膜,只允许对自己有利的物质通过。同一物质在细胞内外的分布的数量不同,当某一种极溶于水的物质在细胞外浓度过大时,有可能导致细胞干瘪死亡,这些物质在细胞内过多时导致细胞过量吸水膨胀。细胞膜调节渗透压的能力是有限的。
(4)营养物 营养物和水一起,又叫细胞培养液,培养液中含有细胞增殖和生长所需要的各种物质。营养物包括:N 源、C源,这些物质与提供能量有关;无机盐、维生素、激素,这些物质与代谢调节控制有关。细胞培养液的设计一直是细胞离体培养技术的关键。理想的细胞培养液可以同时解决细胞离体培养所需要的pH、渗透压、营养物、调节物质的全部需要。在干细胞分化研究与应用中,关键是找到一种使干细胞分化成为所需细胞和组织的营养液。相同的人干细胞,放在不同的营养液中分化培养出人的各种脏器,这个昔日的梦想已经开始成为现实。植物细胞的组织培养技术已经基本完善配套。名贵花卉、中草药、脱毒马铃薯、组织培养莲菜苗等植物细胞与组织培养技术的不断完善,特别是由于组织培养液的商品化已经被广大农民普遍接受。
(5)水 水是细胞需要数量最大的物质,不同的物种、不同部位、不同生长期的细胞含水量差别相当大。干旱植物细胞的含水量高达90%。水的需求量一般随同细胞培养液一起考虑。
(6)无菌条件 体外细胞培养仅仅是对所需的细胞进行培养,但环境中(如空气)有各种其他微生物,必须对所需细胞进行无杂菌的隔离培养。无菌条件是细胞离体培养最基本的条件。
(7)光 植物细胞和少数细菌需要利用光进行光合作用。
(8)气体 动物细胞需要不断供给氧气和排除二氧化碳,植物细胞与此相反。
二氧化碳的作用:调节pH,有缓冲作用,没有刺激动物细胞呼吸的功能
另外还要看你是培养那种类型的细胞。是植物还是动物。
细胞悬浮于培养基中生长或维持。某些贴壁依赖性细胞经过适应和选择也可用此方法培养。增加悬浮培养规模相对比较简单,只要增加体积就可以子。深度超过5mm,需要搅动培养基,超过10cm,还需要深层通入CO2和空气,以保证足够的气体交换。
通过振荡或转动装置使细胞始终处于分散悬浮于培养液内的培养方法。
这种半固体培养基的用法一般是用来观察细胞的运动滑动等,也可来观察需氧情况。至于你说的细胞要在基于什么样的目的情况下,才可以确定使用什么样的培养基
植物细胞培养的原理
植物细胞培养的原理:在离体条件下,将愈伤组织或其他易分散的组织置于,液体培养基中进行震荡培养,得到分散成游离的悬浮细胞,通过继代培养使细胞增殖,从而获得大量细胞群体的一种技术。植物细胞是植物生命活动的结构与功能的基本单位,由原生质体和细胞壁两部分组成。原生质体是细胞壁内一切物质的总称,...
有关培养基的知识?!
动物细胞培养基 RPMI1640培养基是一个全营养型培养基,广泛应用于哺乳动物细胞和杂交瘤细胞的培养,如人骨髓瘤细胞、鼠杂交瘤细胞、人白细胞以及B细胞和T细胞。最初设计用于悬浮细胞培养和人白血病细胞的单层细胞培养。特殊培养基 选择性培养基 选择性培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的...
动物细胞培养和动物组织培养的联系
组织和器官培养,是指将组织、整个的或部分的器官在体外培养或生长,并保持组织或器官的分化、结构和(或)功能.由于操作和应用上的限制,组织和器官培养应用很少,而广泛应用的是细胞培养技术.细胞培养分为单层细胞培养和悬浮细胞培养.单层细胞培养包括静止培养和使用转瓶旋转培养,使细胞在器皿的表面生长出单层...
悬浮细胞为什么会有贴壁的现象
少数细胞在体外培养是悬浮生长,包括一些取自血、脾或骨髓的培养细胞,尤其是血液白细胞以及癌肿细胞。 二、贴壁细胞与悬浮细胞在培养条件上的区别 贴壁细胞要加血清,不贴壁的可以不加血清。 三、贴壁细胞与悬浮细胞在培养方式上的区别 不贴壁的一般用各种摇瓶和反应器培养,贴壁的一般用方瓶或孔板...
细胞组织的细胞工程在植物方面的应用
另外,在组织培养过程中,如愈伤组织培养、细胞悬浮培养、原生质体培养等,通过pH值、温度、离子浓度等条件的变化,可增加其变异,从中可筛选出优良的突变体,从而为新品种的选育开辟一条崭新的途径。愈伤组织、悬浮细胞、原生质体等是基因转化的良好受体材料,并且在离体培养条件下进行植株再生也是实现植物遗传转化的重要环节...
摇床对细胞培养条件会造成哪些影响?
来自“Eppendorf实验室”公众号的深度洞察<\/: 让悬浮细胞培养如虎添翼的秘密揭晓...在生物工程的精密舞台——细胞培养中,每一步都关乎效率和成果。特别是当哺乳动物细胞在空中起舞的悬浮培养阶段,摇床的存在仿佛调和剂,却也带来了一系列微妙的影响。温度与pH的平衡艺术<\/: 培养基的温度和pH值是细胞...
为什么细胞培养要用生物反应器?
一方面,目前市面上的少数是悬浮培养工艺,而多数则是选择一些载体介质来实现单层贴壁培养工艺,进而实现一定程度的大规模。Eppendorf 生物工艺部开发的Fibra-Cel 片状载体为固体支持材料,适合贴壁的哺乳动物细胞、动物细胞以及昆虫细胞分泌表达蛋白,其低剪切力对细胞实现保护,经验证,搭载Fibra-Cel 片状载体...
悬浮系原生质体为什么比叶片细胞少
悬浮系原生质体比叶片细胞少的原因是因为植物需要大量的叶片细胞来为自己进行光合作用提供能量。而悬浮系的原生质对于植物本身来说,它的作用要小于叶片细胞。
植物愈伤组织如何进行悬滴培养?关于悬滴培养的资料很多都是有关...
②平板培养:将细胞或原生质包埋在固体培养基中,在培养皿中做成平板进行培养。③液体培养:有 3种方式:浸没在培养液中放置不动的静止培养;将器官或组织(例如花药)漂浮在液体表面的漂浮培养;将装有培养液和培养物的培养器置于摇床或转床上的悬浮培养。为了在显微镜下观察和追踪细胞的生长和分裂,可将细胞或原生质体...
细胞功能实验|一文读懂细胞增殖实验
该实验基于CCK-8试剂,其活性成分WST-8在电子耦合试剂存在下,可在线粒体内被还原生成formazan(甲瓒),其生成量与活细胞数量成正比。通过酶标仪在450nm波长下测定光吸收值,间接反映了活细胞的数量,广泛应用于生物活性因子的活性检测、药物筛选、细胞增殖试验等。细胞增殖实验之克隆形成实验 克隆形成实验...
蠹俘尧强: 适宜温度.ph值 无毒无菌的环境.气体环境95%和5%co2混合. 碳水化合物、氨基酸、脂类、无机盐、维生素、微量元素和细胞生长因子等 血清.
江城区17313711330: 一个好的悬浮细胞系有哪些特征 - ?
蠹俘尧强: 一个好的悬浮细胞系有哪些特征 贴壁培养(monolayer culture)是指细胞贴附在一定的固相表面进行的培养.贴壁依赖型细胞在培养时要贴附于培养(瓶)器皿壁上,细胞一经贴壁就迅速铺展,然后开始有丝分裂,并很快进入对数生长期.一般...
江城区17313711330: 植物悬浮细胞的建立需要什么条件 - ?
蠹俘尧强: 实验原理:植物细胞的悬浮培养是指将植物细胞或较小的细胞团悬浮在液体培养基中进行培养,在培养过程中能够保持良好的分散状态.植物离体培养可产生愈伤组织.将疏松型的愈伤组织县浮在液体培养基中并在振荡条件下培养一段时间后,...
江城区17313711330: 哪些类型的细胞可用于悬浮培养 - ?
蠹俘尧强: 高等动物细胞悬浮培养主要是免疫系统的细胞,因为这些细胞不需要细胞间和细胞与培养表面的接触.常见的有Jurkat(人的T细胞),J774 (鼠单核细胞)等等.当然从人或者动物身上提取出来的免疫细胞也可以悬浮培养,不过养这些需要刺激,而且养不长. 细菌细胞也可以悬浮培养,如E.coli
江城区17313711330: 建立悬浮细胞系的关键技术有哪些? - ?
蠹俘尧强: 悬浮细胞的同步化:同一悬浮培养体系的所有细胞都同时通过细胞周期的某一特定时期,保持相对一致的细胞学和生理学状态.
江城区17313711330: 悬浮培养的植物细胞有何特征 - ?
蠹俘尧强: 悬浮培养的植物细胞有何特征 1)主要有单细胞和小细胞团组成; 2)细胞具有量盛的生长和分裂能力,增殖速度快; 3)大多数细胞在形态上应具有分生细胞的特征,它们多呈等径形,核一质比率大,胞质浓厚,无液胞化程度较低.要建成这样的县浮培养体系,首先需要有良好的起始培养物——迅速增殖的疏松型愈组织.然后经过培养基成分和培养条件的选择,并经多次断代培养才能达到.县浮培养细胞经长期继代培养后,染色体常有变异现象,细胞的再生能力也有逐渐降低的趋势,然而对于以上生产有用代谢特质为目的的大量培养,这种再生能力的降低不一定有不良影响.
江城区17313711330: 一个好的悬浮细胞系有哪些特征?用于建立悬浮细胞系的愈伤组织有何要求 - ?
蠹俘尧强: 第一章 细胞培养的基本原理与技术 现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术,而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系,特别是在医药领域的发展,细胞培养更具有特殊的作用和价值.
江城区17313711330: 以动物细胞悬浮培养为例详细说明动物细胞大规模培养的关键技术. - ?
蠹俘尧强: 悬浮培养方法:在悬浮培养前,对动物细胞的生长和生理特性进行充分的考察,是十分必要的,能为悬浮培养提供有益的参考.悬浮培养可以从两个方面入手,一是改变动物细胞的培养环境,实行阶段培养;二是进行代谢调控.(1)阶段培养 :...