求助含SP6，T3 和T7启动子的质粒载体有哪些

质粒上的T7,sp6,t3启动子方向有方向性吗? 还是根据所插入的片段可以灵活的运用?~

启动子都有方向性，一般都是从5‘到3’方向，基因也是这个方向，这样就不会出问题。

　　含有t7或sp6启动子质粒只能在大肠杆菌菌株中发挥作用的原因：
　　T7启动子是当今大肠杆菌表达系统的主流，这个功能强大兼专一性高的启动子经过巧妙的设计而成为原核表达的首选，尤其以Novagen公司的pET系统为杰出代表。
　　1、强大的T7启动子完全专一受控于T7 RNA聚合酶，而高活性的T7 RNA 聚合酶合成mRNA的速度比大肠杆菌RNA聚合酶快5倍——当二者同时存在时，宿主本身基因的转录竞争不过T7表达系统，几乎所有的细胞资源都用于表达目的蛋白；
　　2、诱导表达后仅几个小时目的蛋白通常可以占到细胞总蛋白的50%以上。由于大肠杆菌本身不含T7 RNA 聚合酶，需要将外源的T7 RNA 聚合酶引入宿主菌，因而T7 RNA 聚合酶的调控模式就决定了T7系统的调控模式——非诱导条件下，可以使目的基因完全处于沉默状态而不转录，从而避免目的基因毒性对宿主细胞以及质粒稳定性的影响；
　　3、通过控制诱导条件控制T7 RNA 聚合酶的量，就可以控制产物表达量，某些情况下可以提高产物的可溶性部分。有几种方案可用于调控T7 RNA 聚合酶的合成，从而调控T7表达系统。

这些是常见启动子，具有这些启动子的质粒很多很多。举个例子，用于蛋白原核表达的质粒比如pEG系列，pGEX等系列等都含有这些启动子。

PCS2载体有SP6和T3 promoter~

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泾县13598394290： 含有t7或sp6启动子质粒为什么只能在大肠杆菌菌株中发挥作用?？
爰福世福： 写错地方了吧? 可能是这类 启动子质粒 最初是在大肠杆菌中发现的,其发挥作用也必须要用到一定的条件,估计只有大肠杆菌才具备里面的具体条件吧. 值得实验研究一下.

泾县13598394290： 细菌的启动子有哪些 - ？
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泾县13598394290： rna探针制备时为什么将模板线性化 - ？
爰福世福： 在RNA的杂交检测实验中,应用标记的RNA 探针将获得高灵敏度的杂交检测结果,与DNA 探针相比,检测灵敏度提高10-100倍.因为对于不同的杂交体类型来说,RNA-RNA杂交体的结合强度高于RNA-DNA和DNA-DNA杂交体.对于通过...

泾县13598394290： 如何选择无细胞蛋白表达系统 - ？
爰福世福： 与基于细胞的蛋白表达系统相比较,无细胞蛋白表达系统具有独特的优势,包括节约时间、提高具有功能的、可溶的、全长蛋白的总体产量.此外,无细胞蛋白表达系统更适用于激酶等毒性蛋白的表达、也可使用经过修饰的tRNA来进行标记,...

泾县13598394290： 设计一个体外转录实验,证明rna的合成方向胃5' - 3' - ？
爰福世福： 将一段DNA序列克隆到能够体外转录的载体上,这段序列上游应该有相应的能够启动体外转录的启动子,如T7,SP6等.通过体外转录之后,使用特异的探针杂交来确定生成的RNA是和DNA那一条链一致的,结合载体上启动子的序列和位置,就能说明RNA合成的方向了.

泾县13598394290： 质粒pET的p的含义是什么,ET的含义是什么. - ？
爰福世福： p—plasmid(质粒),一般质粒载体前面都要加一个p E—E. coli (大肠埃希氏菌,通常称为大肠杆菌),为了表明这个载体是用于原核表达的. T—在这里代表T7启动子,该载体含有一个不为大肠杆菌RNA 聚合酶识别的T7 启动子用于诱导表达目的蛋白.

泾县13598394290： 外源基因连接T载体导入到大肠杆菌,那么外源基因能在大肠杆菌中表达吗? - ？
爰福世福： 可以的,因为它上面有启动子T7/SP6(哪个我忘记了). 但是T载体一般不用做表达载体,因为它是靠T-A连接的(T载体上含多个T,PCR产物含多聚A),读码框未必正确,所以一般是用作中间过渡的载体,后续要把这段基因切下来(你的扩增引物上需要设计酶切位点,保证读码框正确),换到专门的表达载体去才行.

泾县13598394290： 原核表达载体序列如何分析,从哪个启动子开始翻译分析? - ？
爰福世福： 简要的说,pet系统的T7启动子最著名,以pet系列来说,找到启动子之后,再找rbs区域,这个是核糖体结合区,找到了之后,从离rbs最近的一个Met开始翻译,3个碱基为一个读码框,遇到UAA,UGA,UAG之后翻译结束,载体一般都由终止密码子,有时候也在引物里人为添加终止子,还有不明白的可继续问,

泾县13598394290： 细菌flag蛋白纯化用什么菌株和载体 - ？
爰福世福： 3,重复(3)的步骤进行SDS-PAGE分析;ml 卡那霉素存储液,若转化DH5α.当需要表达蛋白时.750μl20mMTris-HCl,Western 印迹;ml乙酰BSA(根据需要补足水到30μl2)37℃温浴2-4h3)取3μl样品进行电泳检测消化反应进行的程度4)消...

泾县13598394290： DNA转录时是怎么选定辶吹 - ？
爰福世福： 具有平末端或5'-突出末端的双链线性DNA可作为体外转录模板.线性化的质粒DNA、PCR产物或cDNA只要含有双链RNA聚合酶启动子且方向正确均可用作转录模板. 不同RNA聚合酶的同源启动子序列: T7 TAATACGACTCACTATA (+1)GGG ...