放射性配体的受体结合率怎么判断

作者&投稿:守文 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
如何来做配体受体的结合实验~

衡量受体的存在一个主要标志是受体的饱和性,即绘制出特异性结合的饱和曲线。原理是根据活性物质与标记的活性物质竞争同一受体的原理测定活性物质和含量,属饱和分析法一类。实验中总结合减去非特异就是特性结合,然后绘制出饱和曲线和竞争曲线,算出Bmax和Kd值。
要注意的是放射性标记的配体要纯

受体与配体结合的特点:
受体与配体之间结合的结果是受体被激活,并产生受体激活后续信号传递的基本步骤。在生理条件下,受体与配体之间的结合不通过共价键介导,主要靠离子键、氢键、范德华力和疏水作用而相互结合。受体在与配体结合时,具有饱和性、高亲和性、专一性、可逆性等特性。
1、细胞膜受体
大多数配体信号分子是亲水性的生物大分子,如细胞因子,蛋白质多肽类激素、水溶性激素、前列腺素、亲水性神经递质等,由于不能通透靶细胞膜进入胞内,因此,这类配体信号分子的受体是定位于靶细胞膜上。
2、细胞内受体
大多数配体信号分子的受体是在靶细胞表面上,这是因为信号分子是亲水性的,不能通过细胞膜。但有一些配体信号分子可以直接穿过靶细胞膜的,与细胞质或细胞核受体相互作用。
通过调控特定基因的转录,利用基因表达产物的表达上调或下调,由此启动一系列的生化反应,最终导致靶细胞产生生物效应。这种信号分子包括脂溶性的固醇类激素、甲状腺激素和维甲酸以及气体一氧化氮等。

扩展资料:
雌激素受体包括两大类:
1、经典的核受体,包括ERα和ERβ,它们位于细胞核内,介导雌激素的基因型效应,即通过调节特异性靶基因的转录而发挥“基因型”调节效应;
2、膜性受体,包括经典核受体的膜性成分以及属于G蛋白偶联受体家族的GPER1(GPR30)、Gaq-ER和ER-X ,它们介导快速的非基因型效应,通过第二信使系统发挥间接的转录调控功能。
其中一些似乎只在脑局部起作用。这两类受体在机体内的分布具有组织/细胞特异性,参与了对诸如生殖、学习、记忆、认知等多种功能的调节。
参考资料来源:百度百科——受体

【放射性配体与受体结合率的判断】一般通过放射性配基与受体结合分析,进行判断。放射性配基与受体结合分析简称为受体放射分析,它是应用放射性核素标记配基与特异受体相结合,研究受体的亲和力和受体的数量,以及研究受体亚型的常用方法。
1、原理:
(1)放射性标记配基(激动剂或拮抗剂)和组织、细胞,或含有受体的制剂一起温育,使受体和配基充分结合,形成受体-配基复合物,终止反应后,用过滤或离心的方法除去未被结合的标记物,测定滤膜或沉淀物中的放射性,即可计算出和配基结合的受体的量。 (2)放射配基与受体制备物(含受体的组织或细胞制备物)作用时,其结合形式有两种,一种是配基与受体的特异性结合,其特点是亲和力高;且由于受体有限,故具有饱和性。另一种是配基与受体制备物的非受体分子的结合,称为非特异性结合。其特点是亲和力低但结合点多,不易饱和。用放射性配基研究特异性受体时,必须设法减除非特异性结合。一般采用的方法是制备总结合管和非特异结合管,两者计数之差即为特异性结合量。
2、计算方法:将特异结合计数除以和配基结合的受体的量得到的百分比,就是放射性配体与受体结合率。
(1)总结合管:将放射性配基与受体制备物反应,除去游离的放射性配基,测定结合的放射性配基的计数,(其中包含特异性结合与非特异性结合,称为总结合)。
(2)非特异性结合管:将大量(一般为500-1000倍)非标记特异性配基与标记的放射性配基相混,然后共同与受体制备物反应。由于非标记配基与标记配基两者比例悬殊,所以受体几乎全部被非标记配基饱和,标记配基只能与组织制备物中的非特异结合位点结合。这时测出的标记配基的结合量,反映的是非特异结合量。用总结合管的计数减去非特异结合管的计数,即可得到特异结合计数。


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