小知识 | RNA提取那些事（二）
作者&投稿：郴垂 （若有异议请与网页底部的电邮联系）
在RNA提取的领域，离心柱法凭借其简便性和高效性，已经成为科研实验室中的常用工具。这种方法首先通过RNase抑制剂来保护样品中的RNA，确保其在后续步骤中的完整性。样本中的核酸会在特定膜上结合，然后通过精心设计的清洗和低盐洗脱步骤，将纯净的RNA收集起来。
多种选择，针对不同样本类型
市面上的RNA提取试剂盒针对不同类型的样本进行了分类，如植物、动物组织和细菌等。让我们以植物RNA提取为例，深入了解其详细过程：
1. 精准处理：研磨后的样品中加入Buffer GRL，激活特定的裂解酶，促使RNA释放。随后，样本转移至离心柱，离心后上清液会被收集。
2. 乙醇洗脱与核酸吸附：加入乙醇后，RNA与溶液混合，再次离心，弃去乙醇，将RNA吸附至吸附柱上。
3. 去蛋白与DNase处理：去蛋白液能有效去除蛋白质杂质，而DNase I的加入则确保DNA的去除，这是RNA纯化的关键步骤。经过数次漂洗和重复处理，以达到最佳纯度。
4. 干燥与RNA释放：干燥吸附柱后，用ddH2O洗脱RNA，最后得到纯净的总RNA。
高效磁珠法的新突破
Genesand的高效植物总RNA提取试剂盒采用了磁珠分离技术，利用超磁性纳米磁珠的特性，可有效结合并分离RNA，无论是植物还是多种类型的样本，都能轻松应对。
对于动物RNA提取，磁珠法同样简洁高效：
1. 准备样本：无论是悬浮细胞还是贴壁细胞，只需确保足够的细胞数，如50-100万，然后进行适当裂解或组织研磨。
2. 结合与磁珠分离：与等体积的结合液混合后，RNA会与磁珠结合，磁珠上的杂质则会被吸除。
3. 去DNA和洗涤：磁珠洗涤后，可选择消化步骤去除残留的DNA。再次洗涤确保纯净度。
4. 释放与保存：让剩余液体自然挥发，然后用洗脱液将RNA释放，最后磁珠分离，得到纯净的RNA。
下期内容将深入探讨不同RNA提取方法的比较，以及可能遇到的问题及解决方案，敬请期待！
季养乳疾： 注意枪头管子里的RNA酶,注意你唾沫星子皮肤上存在的RNA酶,注意各种试剂中存在的RNA酶. 重要的事情说三遍. 剩下就是最后一步吸干点,吹干点,但别吹太过了.
宁波市18282065887： 动物RNA的提取 - ？
季养乳疾： RNA的提取 一、准备试剂: 氯仿,异丙醇,75℅乙醇,无RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC处理过的水配制). 二、操作步骤: 1. 匀浆处理: a. 组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理....
宁波市18282065887： 怎么提取RNA? - ？
季养乳疾： 我们实验室用的是TRIZOL试剂盒,原理就是先组织匀浆,然后将RNA与蛋白质等分离,这个用的是戊二醇,然后再用柱子加各种溶剂,各种12000r/min离心,多次离心之后,经过洗涤干燥,再溶于DEPC水就可以冷藏了. 整个实验中要注意尽量避免实验材料与空气接触,以免被RNA酶降解其中的RNA,要知道RNA酶可是无处不在啊,还有DEPC是有毒的(一般分子实验所用的都多多少少有毒...),所以要小心~
宁波市18282065887： RNA提取的关键步骤是??? - ？
季养乳疾： 我只知道DNA的 析出含DNA的黏稠物:蒸馏水300mL,逆时针方向搅拌,缓慢搅拌..朝一个方向..避免DNA折断
宁波市18282065887： 骨组织RNA的提取注意事项 - ？
季养乳疾： RNA提取的时候,一定要注意防止RNA酶作用. 第一点,样本处理和存放最好都放负80冰柜. 第二点,实验过程中你可以使用DEPC水泡过的枪头,离心管,保持手套干净,带好口罩,不要说话. 第三点,假如你用Trizol提取RNA,75%的乙醇也最好采用来菌的DEPC水来配制.晾干酒精这一步时间不要太长. 第四点:琼脂糖凝胶电泳,专漕专用,使用新的电泳缓冲液TBE. 还有呢,也可以在实验前,采用RNase Zap喷喷桌面,也能有一定程度上去除RNA酶的影响. 一般提取的时候多多注意,应该问题不大. 糊弄用可以,但是如果是自己做实验的话最好还是参考一下比较好的文献总结会比较好!
宁波市18282065887： 有关RNA提取的问题 - ？
季养乳疾： RNA极易变性,你那样不可能提到,顶多是DNA.提取RNA需要加入极强的蛋白质变性剂,比如:异硫氰酸胍!目前提取RNA的方法:用酸性胍盐/苯酚/氯仿抽提!注意事项:提取用的玻璃器皿要经过高温焙烧,塑料用具经过高压灭菌,不能灭菌的用0.1%的焦炭酸二乙酯处理,再煮沸以除净焦炭酸二乙酯;在破碎细胞细胞的同时加入强的变性剂使RNase失活;在RNA反应体系中加入RNase的抑制剂.
宁波市18282065887： RNA分离操作注意事项 - ？
季养乳疾： 1.最后RNA是要沉淀下来的,不去也得去掉2.酚会影响下一步反应,比如之后的逆转录3.酚有毒,去掉也好
宁波市18282065887： 酵母RNA的提取方法有哪些?酵母RNA的提取方法有哪些 ？
季养乳疾： 1. 总是要戴着手套.2. 总是要用不含RNA酶的样品管、移液器枪头、塑料容器和溶液.3. 总是要把RNA储藏液分装到不含RNA酶的容器中,这样你才不会污染到储藏液.4. 在处理RNA时,或者保持样品管置于冰盒,或者置于超过50°C的水浴中.一定要几乎所有容器用DEPC水处理,电泳检测槽也不例外. 还要注意溶液pH的控制了,RNA蛋白溶于碱,DNA蛋白溶于酸.提纯的话因为溶液中有DNA,首先要先高温加热且温度要迅速达到80以上使DNA变性,30分钟左右后,拿出来再骤冷防止其复性.
宁波市18282065887： 酵母RNA的提取方法除了稀碱法还有其它什么方法?!!<br/>最? ？
季养乳疾： 实验三 酵母RNA的提制(浓盐法) 一、目的 学习和掌握从酵母中提制RNA的原理和方法,以加深对核酸性质的认识. 二、原理 酵母含 RNA 2. 67%~10.0%,DNA很少...
宁波市18282065887： rna的抽提有什么成功的关键?？
季养乳疾： 实验前选择合适的方法/试剂,这是最重要的一步 还有 纪律一:杜绝外源酶的污染. 注意一:严格戴好口罩,手套. 注意二:实验所涉及的离心管,Tip 头,移液器杆,电泳槽,实验台面等要彻底处理. 注意三:实验所涉及的试剂/溶液,尤其是水,必须确保 RNase-Free. 纪律二:阻止内源酶的活性 注意四:选择合适的匀浆方法. 注意五:选择合适的裂解液. 注意六:控制好样品的起始量. 纪律三:明确自己的抽提目的 注意七:任何裂解液系统在接近样品最大起始量时,抽提成功率急剧下降. 注意八:RNA 抽提成功的唯一经济的标准是后续实验的一次成功,而不是得率.
