RNA mimic细胞转染实验操作步骤

~ 下面以 Entranster-R4000 试剂为例，说一下 RNA

mimic 转染步骤（ 24 孔板）

1. 提前 1 天细胞种植

贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。

悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那么就用2×105的细胞进行转染。

2. 转染过程

⑴取0.67ug(50pmol)的RNA mimic，加入一定量无血清稀释液，充分混匀，制成RNA稀释液，终体积为25μl。

注意：无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。

⑵取1ul的EntransterTM-R4000，然后加入24ul无血清稀释液体，充分混匀，制成EntransterTM-R4000稀释液，终体积为25μl。室温静置5分钟。

⑶将EntransterTM-R4000稀释液和RNA稀释液充分混合（可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上）混合，室温静置15分钟。转染复合物制备完成。

⑷将50μl转染复合物滴加到有0.45ml全培养基（可含10%血清和抗生素）的细胞上，前后移动培养皿，混合均匀。

注意：对本试剂，采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。

⑸转染后6小时观察细胞状态，如状态良好可不必更换培养基，继续培养24-96小时得到结果。

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民乐县18661866402： RNAi 所需试剂及实验步骤?? - ？
须莺法兹： 首先你要先构建含有反向DNA序列的载体,确保其转录产物能形成发卡结构的小RNA前体,然后用该载体转染细胞,观察其表型.

民乐县18661866402： 如何设计mirrna的突变mimics - ？
须莺法兹： miRNA mimic能模拟细胞中内源性成熟miRNA的高水平表达,以增强内源性miRNA的调控作用,是miRNA功能研究的一大利器.miRNA mimic是一种简单高效的miRNA研究工具,只需用转染试剂包裹即可转染进入细胞,无需构建载体的繁琐操作,无需病毒防护方面的担忧,用转染对照即可观察其转染效率.miRNA mimic的转染效果,可从靶基因的RNA表达水平,蛋白表达水平,细胞功能等方面检测.这些实验能够获得miRNA的生物学功能数据,及应用于miRNA的靶基因验证方面.通常这些实验涉及到miRNA mimic的转染,或者与报告基因载体共转

民乐县18661866402： 如何转染miRNA inhibitor到细胞 - ？
须莺法兹： 我觉得你是弄错东西了吧 siRNA和miRNA是类似的 都是用来沉默靶基因的表达 不同的是miRNA是一个调控多个 而siRNA是一个只调控一个 你可能遇到的实验是先验证miRNA通过调控几个基因达到某种效果 然后单独转这几个基因的siRNA 看是否有这种效果 以.

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须莺法兹： 1.配置TBS-D溶液 100mlTBS加入20%葡萄糖溶液0.5ml,至终浓度为1%. 2.配置DEAE-dextran-DNA-TBS-D转染液 DEAE-dextran 1mg/ml DNA(超螺旋) 5-10ug/ml(DNA浓度根据细胞种类、细胞密度及质粒种类决定,最适浓度经预实验确定)...

民乐县18661866402： mRNA/siRNA转染技术哪里有介绍?？
须莺法兹： RNA转染技术是将RNA分子如mRNA、siRNA、病毒RNA等导入细胞并进行表达的过程.RNA转染技术主要用于研究RNA的功能,其中miRNA的转染已经成功应用于抑制目的基因的表达及其功能研究中.不同的实验技术都是为了满足不同的实验...

民乐县18661866402： 在“观察DNA和RNA在细胞中的分布”实验中,正确的操作步骤是()A.解离→漂洗→染色→制片→观察B. - ？
须莺法兹： “观察DNA和RNA在细胞中的分布”的实验步骤:取口腔上皮细胞制片→水解→冲洗涂片→染色→观察. 故选:C.

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须莺法兹：[选项] A. ④①②③⑤ B. ④②①③⑤ C. ④②③①⑤ D. ④⑤①③②

民乐县18661866402： 观察DNA和RNA在细胞中的分布的实验中 ,染色步骤的中是何时对侧引流盖玻片前还是后 - ？
须莺法兹： 观察DNA和RNA在细胞中的分布”实验中. 第一步是取材制片:一般选择易获取的口腔上皮细胞, 第二步是水解:用盐酸处理使口腔上皮细胞膜通透性增大,染色质中DNA和蛋白质分离; 第三步是冲洗:洗去盐酸; 第四步是染色:用吡罗红甲基绿染色剂染色; 第五步是观察:先用低倍镜观察,再用高倍镜观察. 希望能够帮到你

民乐县18661866402： “观察DNA和RNA在细胞中的分布”实验中,下列操作正确的是()A.染色时先用甲基绿染液,再滴加吡罗 - ？
须莺法兹： A、染色时,甲基绿和吡罗红需混合使用,A错误;B、将涂片用质量分数为8%的盐酸处理后,还需用蒸馏水冲洗才能用染色剂染色,B错误;C、观察时,应选择染色均匀,色泽较浅的区域进行,C正确;D、先用低倍镜找到清晰的细胞后,还需移到视野的中央才能转换高倍镜观察,D错误. 故选:C.