MDCK细胞培养流感病毒的特点
细胞培养物污染往往是细胞培养实验室最常遇到的问题,有时会带来十分严重的后果.细胞培养污染物主要分为两类,一类是化学污染物,例如：培养基、血清和水中的杂质、内毒素、增塑剂和去污剂,另一类是生物污染物,例如：细菌、霉菌、酵母、病毒、支原体以及其他细胞系的交叉污染.尽管无法彻底消除污染,但是可以通过充分了解污染源以及采用良好的无菌技术,降低污染发生的频率和严重程度. 细菌是一大类广泛存在的单细胞微生物.细菌直径一般为几个微米,外形多样,例如：球状、杆状和螺旋状.细菌由于分布广泛、生长迅速以及体积大小的特点,与酵母和霉菌一起构成了细胞培养中最常遇到的生污染物.培养物被细菌污染后,几天内即可通过简单的肉眼观察发现；被感染的培养物通常呈云雾状 (即：浑浊状),有时表面会覆盖一层薄膜.另外,经常还会发现培养基的 pH 值突然降低.在低倍显微镜下可见,细菌为细胞之间移动的微小颗粒,在高倍显微镜下观察可以分辨出各个细菌的形状. 酵母是真菌界的一种单细胞真核微生物,大小从数微米 (多见) 到 40 微米 (罕见) 不等.与细菌污染类似,培养物被酵母污染后也会变得浑浊,特别是进入污染后期时.培养物被酵母污染后 pH 值变化极小,污染严重时 pH 值才会升高.在显微镜下,酵母呈单个卵圆形或球形颗粒,有些会芽生出较小的颗粒.霉菌是真菌界的一种真核微生物,以被称为菌丝的多细胞丝状体形式生长.这些多细胞丝状体构成的交联网络含有遗传性相同的细胞核,被称为集落或者菌丝体.与酵母污染类似,霉菌污染初期培养物 pH 值会维持稳定,污染加重后 pH 值会迅速升高,导致培养物浑浊.在显微镜下,菌丝体通常呈细束状纤维,有时呈较为密集的孢子团块.许多种霉菌的孢子在休眠期均可耐受极端严峻、不利的环境,当其遇到合适的生长条件时才会被活化.
有生物安全等级要求的，要注意实验室人员安全。
1∶512副流感病毒感染MDCK细胞后24h即出现明显的细胞病变效应,但病毒的血凝效价有所下降。结论:副流感病毒可以引起MDCK细胞出现细胞病变效应,但在该细胞内不能复制。体外培养获得MDCK细胞，分别用NF-κB免疫组化方法和TransAM P65试剂盒测定血凝滴度1：64的A型流感病毒H1N1和H3N2两种亚型、B型流感病毒、紫外线照射灭活的B型流感病毒NF-κB蛋白表达和活性的动态变化。以细胞激活剂佛波酯刺激后的MDCK细胞为阳性对照，以等量生理盐水为阴性对照。 结果 各组细胞加入不同的流感病毒后，与对照组相比，细胞免疫组化显示NF-κB随流感病毒作用相同时间后结果出现明显差异；各组相比，B型流感病毒作用72h对NF-κB的激活作用最明显，而A型两种亚型之间无显著差异。TransAM P65试剂盒测定也得出相同的结果。 结论 流感病毒可激活体外培养MDCK细胞的核转录因子，且这种作用随时间而增强
适应性
房底海伦： 1∶512副流感病毒感染MDCK细胞后24h即出现明显的细胞病变效应,但病毒的血凝效价有所下降.结论:副流感病毒可以引起MDCK细胞出现细胞病变效应,但在该细胞内不能复制. 体外培养获得MDCK细胞,分别用NF-κB免疫组化方法和...
浙江省19753194080： 怎样培养流感病毒 - ？
房底海伦： 冲冷水,光着身子,吹空调.一个小时左右可以在血液中生成.一般一天左右时间血液中病毒含量达到峰值.如果不吃药人可能会死掉.
浙江省19753194080： mdck细胞体外培养的生物学特性? - ？
房底海伦： mdck细胞特别皮实,挺好养的,只要不染菌一般就不会出意外.mdck显微镜下观察大概是四边形甚至多边形的,有点像正方形,长得挺快.我用dmem培养,长得特别好,但贴壁比较牢,所以建议胰酶新鲜配置.一般传代时先用pbs洗三遍,加胰酶37度5min左右,看细胞都收缩成单个,即可加入培养基,分瓶培养.不用担心,特别好养!
浙江省19753194080： 培养细胞的生物学特点有哪些 - ？
房底海伦： MDCK细胞特别皮实,挺好养的,只要不染菌一般就不会出意外.MDCK显微镜下观察大概是四边形甚至多边形的,有点像正方形,长得挺快.我用DMEM培养,长得特别好,但贴壁比较牢,所以建议胰酶新鲜配置.一般传代时先用PBS洗三遍,加胰酶37度5min左右,看细胞都收缩成单个,即可加入培养基,分瓶培养.不用担心,特别好养!
浙江省19753194080： 感染成功的细胞培养液中会有病毒吗 - ？
房底海伦： 感染成功的细胞培养液中会有病毒1.细胞融合麻疹病毒和副流感病毒等能使感染细胞膜改变,导致感染细胞与邻近的细胞融合.细胞融合是病毒扩散的方式之一.感染的细胞借助于细胞融合,把病毒扩散到未受感染的细胞.细胞融合的结果形成多核...
浙江省19753194080： H5N1的性质有?？
房底海伦： H5N1病毒 H被称为红细胞凝聚素,N被称作神经氨酸苷酶,它们都是糖蛋白,分布在病毒表面.H有1—15个亚型,N有1—9个亚型(在甲型病毒的情况下).由于H和N的组合不同,病毒的毒性和传播速度也不相同. 在过去100年间,给人类带...
浙江省19753194080： 流感病毒 培养特性中的CPA是什么意思? - ？
房底海伦： CPA = Cleaner Production Audit,清洁生产审核,环境领域术语.CPA = Chinese Pharmaceutical Association (CPA) ,中国药学会.
浙江省19753194080： 流感病毒细胞分离培养是根据什么原理?？
房底海伦： 组织培养的原理 组织培养主要是为病毒易感的组织细胞提供一个良好的生存环境,使细胞对环境产生适应性,获得生长繁殖的能力.病毒在敏感细胞中繁殖,常可引起细胞代谢等方面的变化,可出现细胞病变并释放病毒到维持液中,这种情况可用细胞病变、色变法及检测维持液中病毒抗原的方法,判定病毒的存在及滴度.有些病毒不引起细胞病变,有些在核内繁殖不易释放到维持液中,前者可用干扰的方法及免疫荧光的方法来检测病毒,后者常采用冻融破坏细胞获得病毒后检测. 生物帮上面有这方面的详细介绍,干细胞转染试剂/试剂盒(细胞系) http://product.bio1000.com/100076/
浙江省19753194080： 鸽子粪有毒吗种出的菜对身体有害吗 - ？
房底海伦： 你听过H5N1吧~~传播的主体是三鸟~~如果鸽子带有H5N1的话,鸽子屎可以传播的~~~ H5N1病毒 H被称为红细胞凝聚素,N被称作神经氨酸苷酶,它们都是糖蛋白,分布在病毒表面.H有1—15个亚型,N有1—9个亚型(在甲型病毒的情况下)...
浙江省19753194080： 什么杀毒能杀流感病毒? - ？
房底海伦： 具有直接抗流感病毒作用的中药,其中大多数为清热解毒类中药,如金银花,连翘,板蓝根,大青叶,鱼腥草,黄芩,黄连等.另外有些中药可通过调节机体免疫发挥间接抗流感病毒作用,如黄芪,人参等.金银花重要的药理成分主要有绿原酸...
