24孔transwell加多少液体

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24孔板下室一般加入600μl含20S的培养基。取细胞悬液100μl加入Transwell小室。

特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。

培养细胞：

常规培养12-48h(主要依癌细胞侵袭能力而定）。24h较常见，时间点的选择除了要考虑到细胞细胞侵袭力外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。

结果统计：

直接计数法，“贴壁”细胞计数，这里所谓的“贴壁”是指细胞穿过膜后，可以附着在膜的下室侧而不会掉到下室里面去，通过给细胞染色，可在镜下计数细胞。

取出Transwell小室，弃去孔中培养液，用无钙的PBS洗2遍，甲醇固定30分钟，将小室适当风干。

0.1%结晶紫染色20 min,用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞，用PBS洗3遍。

400倍显微镜下随即五个视野观察细胞，记数。

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乡城县13069774301： 巨噬细胞的transwell实验上室放多少细胞 - ？
泷将因特： 有6well、12well、24well、96well,上室大小都不同.还有100mm培养皿的transwell,最大的嵌套膜生长面积是44cm2,你想好要放多少再选型号呗.按生长面积计算最多细胞数量

乡城县13069774301： 24孔板里293细胞转染,总是后面的孔里细胞死亡,何故?？
泷将因特： 博凌科为解答:也遇到过类似的情况,如果你在加DNA-Lipofectamine complex时孔板里是没有液体的,会在风机下风干的,很快的,这样你在加到后面的孔时,部分细胞已经干了,所以你先加的很好,后面的就有问题.解决办 法就是,你不要一起吸净所有孔的液体,6个孔为一个单位,吸弃孔里的液体,在加DNA-Lipofectamine complex,就可以了.

乡城县13069774301： 24孔复音口琴 和音 - ？
泷将因特： 这个其实也没什么,在口琴上要想吹好五度、六度和八度的和声,听觉是很重要的,但你心里也应该明白,口琴的含法并非那么严格,比如五度吹法,要求口含5孔,其实你可以口含7孔来吹奏,而8度吹法要求只含8孔,其实可以含九孔来奏,因为你含7孔或9时,左右两边的孔都不会发声(想想为什么).你之所以说每次那两个音都不能同时发出来,可能就是局限于5度只含5孔,8度只含8孔,而如此实际上有可能含的孔数不够所致,因为你自己在吹奏时是无法看清自己究竟是含了几孔,这时你最好还是用听觉来分辨.多练一练就成,不必着急.

乡城县13069774301： 请问24孔细胞培养板如何收取细胞? - ？
泷将因特： 您好:1. 收细胞的方法直接取决于你下游的检测手段.如果马上测糖原,胰酶消化不应有影响.您甚至可以考虑直接在孔中裂解细胞.2. 如果需要做其他操作,甚至继续传代培养,那就要做实验验证一下,优化一下消化液组成,浓度,消化时间...

乡城县13069774301： 24孔口琴如何压音 - ？
泷将因特： 喔喔! 为何要这样做呢呢?一般24孔口琴吹奏时会压音不是要像十孔口琴一样要得到升降音,有时是因为歌曲型态,或吹奏者的表现方式,让一首歌听起来很悲伤的感觉.口含下排单孔,嘴巴往左打斜,手的拿法像手震音的拿法一样,吹奏时压缩空气,让声音听起来有一点点沙哑、破.

乡城县13069774301： 请教数控高手,车24的孔,切削量保证在0.2 - 0.25 - ？
泷将因特： 请教,用数控车床车24的孔,切削量保证在0.2-0.25,一般都能保证在0.02的精度范围,可是有些时候 x. E2 X6 n+ ]/ p; h做着突然就小了0.06-0.07,这样就超差了,过了一会有回到了原来的正常尺寸了.) v6 f; r' ~1 d, } 0 Y- P) p3 P& y+ P7 f T# J ...

乡城县13069774301： 293T细胞,在24孔板做转染,接多少细胞 - ？
泷将因特： 0.5-2 X 10^5 个细胞 / 每孔 这是lipo2000说明书上给出的建议 如果你用其他的转染试剂,说明书上应该有建议的数量,不过差别不会很大

乡城县13069774301： 关于24孔口琴新式单音奏法的问题? - ？
泷将因特： 口琴吹法分为含多孔法(也称新式单音奏法)和含单孔法(也称老式单音奏法)口琴吹奏不一定要用“含多孔法”,新式的也并不比老式的更科学更先进,如果不加复音伴奏的话,老式的吹奏效果还会更好听些. 世界级口琴大师:拉瑞·阿德勒(Larry Adler)、图斯·赛里曼(Toots Thielemans)、克劳德·加登(Claude Garden)等大多使用含单孔法(旧式单音吹奏法)吹奏.这种吹奏法吹奏出的音厚而结实,音色纯净,力量集中,音量也比较大,对于吐音、滑音等技巧的使用比含多孔法(新式单音吹奏法)更为便捷. 下面给你一份口琴吹奏嘴型图(包含两种吹奏法): 注:含多孔法舌头边缘平平的抵住琴孔即可,不必卷舌.

乡城县13069774301： 24孔复音口琴如何养护 - ？
泷将因特： 1 每次吹前要漱口,2 吹后轻拍出口水3 隔几天用温水清洗并擦干水份4 要滋润嘴唇,使用时才会有润滑流畅

乡城县13069774301： 直径24孔公差 - 0.01+0.03是h几 - ？
泷将因特： 1、首先应明确孔H的下偏差为0,轴h的上偏差为0,这一点要牢记. 2、你叙述的-0.01+0.03不符合H(或h)的基本偏差,而且公差值为0.04,国标的公差等级中没有这个值. 所以,对不起,请核对是否有笔误.