兔场实验室细菌培养技术(兔场真菌感染怎么办)

作者&投稿:郝浅 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
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细菌分离培养是兔场实验室诊断工作中一个十分重要的步骤,通过对细菌的分离和纯培养,可以根据菌落的形态、大小、结构、色泽、气味以及有无溶血等情况进行初步鉴定,然后通过进一步的染色镜检或者是特殊培养进行鉴定或研究,为病原的确诊提供依据。

1.培养基制备培养基是细菌学检查过程中非常重要的材料,它含有细菌生长所必需的营养物质,细菌经过培养基的纯培养,才能够进行准确的检查,得到可靠的结果。

(1)肉水的制作:

①材料:瘦牛肉500克,蒸馏水(或常水)1000毫升。

②方法:取瘦牛肉除去脂肪、肌腱,切成碎块或绞碎,按1千克牛肉2千毫升水的比例,加水浸泡一夜,煮沸一小时,用纱布初步滤去肉渣挤出肉水,再用滤纸滤过,补足原有水量,装入烧瓶中置高压灭菌器中120℃20分钟灭菌,制成肉水。

制作肉水的另一种方法是:取牛肉浸膏0.5-1.0克,加蒸馏水100毫升,加热溶解,滤纸滤过,并同上述方法进行灭菌即成。

③用途:制作各种培养基的基础。

(2)营养肉汤:

①材料:肉水1000毫升,蛋白胨IO克,氯化钠5克。

②方法:将蛋白胨和氯化钠加入肉水中,稍加热溶解,用氢氧化钠溶液调整pH值为7.4-7.6之间,再加温使溶液均匀。滤过分装后高压灭菌备用。

③用途:可供一般的细菌生长需要,检查细菌的生长表现,也可作为制作固体培养基的基础。

(3)营养琼脂:

①材料:营养琼脂粉40克,蒸馏水1000毫升。

②方法:将营养琼脂粉加入蒸馏水中,搅拌浸泡1小时,加热使充分溶解,高压灭菌备用。

③用途:分离细菌纯培养及作为其他特种培养基的基础。

(4)血液琼脂培养基:

①材料:脱纤维血5-10毫升,营养琼脂100毫升。

②方法:准备好灭菌并有玻璃珠的三角烧瓶,无菌采集血液,注入三角烧瓶中,不停地摇动,直至血纤维分离为止,一般需要10分钟。

高压灭菌好的营养琼脂融化后,冷却至55-60℃时加人脱纤维血液,注意必须确保无菌操作,加入血液后轻轻摇动,不使产生气泡,立即倒人无菌平皿或分装于灭菌试管中备用。

③用途:观察细菌的溶血情况,有些细菌的初次分离时需要此种培养基。

(5)厌氧肝片肉汤:

①材料:营养肉汤,动物肝块或肉渣,液体石蜡。

②方法:利用作肉汤的碎肉块、肉渣或者是动物肝脏少许,分装于试管中加营养肉汤5毫升,上层加液体石蜡0.5-1.0毫升.120℃20分钟灭菌备用。

③用途:厌氧菌的培养。

(6)麦康凯琼脂:

①材料:麦康凯琼脂粉38克,蒸馏水1000毫升。

②方法:将麦康凯琼脂粉加入蒸馏水中,搅拌浸泡l小时,加热使充分溶解,高压灭菌备用。

③用途:常用作大肠杆菌类细菌的分离培养。

2.细菌接种方法

(1)平板划线接种法:平板划线接种法是细菌分离培养中最常用的方法,能使细菌分散生长,形成单个菌落。左手持培养皿,用拇指、食指及中指将平皿揭开,角度不要超过20度,右手拿接种环,接种环与琼脂表面约呈45度角。取少许病料涂布于培养基边缘,火焰灭菌接种环,冷却后轻触培养基边缘的病料区,并向一边划出横线,可以连续划出一个小区,火焰灭菌接种环,冷却后将平皿转换角度,从第一个小区再向外划出一个小区,以后再按照同样方法分区将平板划满,注意只能在起始部位与前一个小区交叉。

(2)琼脂斜面接种法:本方法多用于菌种的保存,也可以用于细菌的分离。左手持斜面培养基,右手持接种环,火焰灭菌冷却后挑取所需的菌落,以右手小拇指夹住棉塞或胶塞,轻转后取出,注意不要污染,立即将管口和塞子火焰灭菌,将接种环伸入试管内,自斜面底部向管口方向划曲线,再经火焰消毒管口和塞子后盖严,进行培养。

(3)穿刺接种法:本法适用于半固体、固体培养基以及微量发酵管的接种,用来做细菌的生化和动力学实验。沿培养管中心直刺至距管底约0.5厘米处,然后再沿穿刺线退出接种针。

(4)液体培养基接种法:方法基本同斜面接种法,将接种环在培养管壁的液面下摩擦,然后再在液体中振动几次,塞好塞子。注意塞子和管口的灭菌操作。

3.细菌培养方法

细菌的培养方法根据细菌的生长特性、培养目的、要求等不同而不同。主要分为以下几种:

(1)需氧培养法:即一般培养法。细菌接种培养基后,置于37℃培养箱内培养即可。适用于需氧菌及兼性厌氧菌的分离培养。

(2)二氧化碳培养法:某些细菌要在一定的二氧化碳环境中才能良好生长。

①烛缸法:将接种的培养基置于干燥器内,点燃蜡烛后,密封好,连同容器一起置温箱中培养。

②化学法:每升容器中按照碳酸氢钠0.4克,盐酸3.5毫升的比例,分别装入两个小容器中,置于干燥器中,密封后使两药接触产生二氧化碳。

③二氧化碳培养箱法:将培养基置于特制的二氧化碳培养箱中培养,可以根据需要调节二氧化碳的浓度。

(3)厌氧培养法:

①换气法:将培养基放入干燥器内,将干燥器内抽成真空,然后充入氮气、氢气和二氧化碳的混合气体,放人温箱中培养。

②焦性没食子酸法:焦性没食子酸在碱性溶液中形成焦性没食子酸盐,可以吸收空气中的氧气,从而造成无氧的环境,适合厌氧菌生长。培养方法:将平皿去盖翻转,放置焦性没食子酸1克,再覆上一层脱脂棉,在脱脂棉上滴加IO%的氢氧化钠1毫升,然后将接种好的平皿覆盖在翻转的盖上,迅速用蜡封固,置37℃温箱中培养2-4天,观察结果。接种的培养基如果是试管,可取大试管一支,底部放焦性没食子酸2克,并加玻璃珠10多粒,将培养基试管放在玻璃珠上,再沿大试管壁滴加10%氢氧化钠溶液2毫升,将大试管口用橡皮塞塞紧,置37℃温箱中培养。

③厌氧肝片肉汤接种:因肝片或肉渣内含有谷胱甘肽,可发生氧化反应而降低环境中的氧化势能,以利于厌氧菌的分离。接种方法是用接种环钩取病料,接种于培养基中,在37℃温箱中培养2-4天,观察结果。




微生物的培养方法有哪些?
③深层培养法,适用于好气微生物的大规模发酵培养,在大容积的液体培养基中,通入无菌空气,并不断搅拌,可使微生物充分接触空气,迅速繁殖并积累代谢产物。二是厌气微生物培养法,实验室常用化学还原剂或抽气机吸除培养基中的分子氧,也有用静止状态的深层培养法。在生产中常用密封式发酵罐或不通风的...

微生物接种方法有哪几种?
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微生物的培养技术及应用有哪些?
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实验室常用的培养细菌的培养基是什么培养基
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划线培养的注意事项
培养基选择:选择适合特定细菌生长的培养基是成功进行划线培养的关键。细菌的生长速度和菌落形态会因培养基成分和pH值的不同而有所差异,因此需要根据目标细菌的特性和实验需求选择最适宜的培养基。培养环境:划线培养的环境需要保持清洁和无菌。实验室应进行严格的消毒处理,并使用无菌器材和试剂。在操作过程...

一般细菌培养及鉴定是检查什么
一般细菌培养及鉴定是用于检查细菌和微生物的存在以及它们的特性。详细解释如下:一、检查细菌的存在 细菌培养是一种实验室检测方法,通过收集患者样本,在特定的培养基上培养,以检测其中是否存在细菌。这种方法可以帮助医生确定感染是由哪种细菌引起的,为后续的治疗提供重要依据。二、鉴定细菌的种类 通过...

设计一个如何获得微生物的纯培养的实验
具体看你要培养什么类型的微生物呢?大致就分以下几步吧1.培养基的配制2.菌种的接种操作3,菌种的保藏 以细菌培养为例,实验操作 1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ⑴制备流程:计算→称量→溶化→灭菌→倒平板 ⑵实验注意事项 ①全程要求无菌操作:无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染...

如何培养微生物?
实验四 细菌形态观察及单染色实验五 放线菌及霉菌形态观察实验六 革兰氏染色及芽孢染色实验七 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定实验八 微生物直接计数法及测微技术实验九 大肠杆菌生长曲线的测定实验十 水中细菌总数的测定实验十一细菌细胞的生化反应实验实验十二噬菌体的分离、纯化及效价测定实验一 常用培养基的制备...

LB培养基的配方是什么呢?
LB培养基的配方为:胰蛋白胨10g\/L,酵母提取物5g\/L,氯化钠10g\/L,另外根据需要还可以加入琼脂粉15\\~20g\/L。LB培养基是一种广泛应用于分子生物学实验室的细菌培养基,其名称来源于其组成成分——胰蛋白胨(L)、酵母提取物(B)和氯化钠(S)。胰蛋白胨提供了细菌所需的氮源和碳源...

在微生物实验室中,常用人工培养基来培养细菌,在配制培养基时应满足哪些...
首先试剂要尽量纯,一般分析纯,有杂质对一些特殊菌生长可能会有影响,用的水也要尽量干净,一般都用蒸馏水。然后是天平要准确,尤其是在秤微量元素的时候不能过多,可以想配置微量元素的母液,之后加到培养基中稀释用。当然重点是确定你要养的是什么菌或哪类菌还有用途,找到特定的培养基进行配置。还要...

株洲县18617924411: 根据细菌和真菌培养的一般方法,请你设计出具体的实验步骤; -
针叛樟脑: 实验步骤: 1.配置培养基 2.高温灭菌,防止其他细菌侵入影响实验. 3.为它接种 4.在恒温箱中培养 注意:定期观察并组详细记录

株洲县18617924411: 獭兔皮肤真菌病
针叛樟脑: 症状:真菌感染通常起始于兔的口唇、眼周围,继而传播到肢端、腹部和其他部位.病变表现为不规则的块状或圆形.兔毛脱落或断毛,皮肤表面光滑或呈痂皮样外观,毛囊和毛囊周围炎症.母兔乳房周围首先出现小红点,继而扩大、变硬,...

株洲县18617924411: 在实验室培养细菌和真菌的一般步骤是()A.配制培养基 - 高温灭菌冷却 - 接种--培养B.配制培养基 - 高温 -
针叛樟脑: 培养细菌和真菌的一般方法和实验步骤:(1)配置培养基,首先要配置含有营养物质的培养基,原因细菌的生活需要营养物质,而不是琼脂,琼脂是一种沸腾冷却后能胶化成固体的物质. (2)高温灭菌,对配置的培养基和培养皿进行灭菌,防止其他细菌侵入影响实验. (3)冷却后为它接种. (4)在恒温箱中培养,细菌在温度适宜的地方繁殖速度比较快. 注意:定期观察并组详细记录. 所以在实验室培养细菌和真菌的一般步骤是:配制培养基-高温灭菌冷却-接种--培养. 故选:A.

株洲县18617924411: 在实验室,以及在大规模的微生物工业生产中,如何培养微生物? -
针叛樟脑: 实验室采用恒温培养箱和摇床等实验设备培养,工业上在实验种的基础上,再采取多级扩大培养的方式,比如从摇瓶种接到立方级别的的种子罐,根据生产需要可以采取多级种扩大的工艺.

株洲县18617924411: 细菌培养实验室最少需要多大的面积,主要是细菌,真菌培养,辨别菌落数量. -
针叛樟脑: 一个超净台,1x1.5m 一个小摇床,0.7x0.7m 一个大摇船,1x1.5m 一个二氧化碳培养箱,0.8x0.8m 一个实验台!我想应该差不多了!

株洲县18617924411: 实验室 菌种驯化培养过程 -
针叛樟脑: 是先培养再驯化.培养是指增加嗜热菌生物量的过程,驯化是指筛选所需求的最佳菌种或菌种群.因为嗜热菌并不只是指一个物种,而是根据其生长环境划分的一类细菌,而在不同的营养条件下,嗜热菌的各组成物种之间的活性也会有差异,而污泥的组成往往也比较复杂,需要多种嗜热菌协同作用.菌种的培育过程是先在最适合该类细菌生长的条件下培养,保持一定的菌量之后再进行驯化,在实际条件下通过污泥的组成成分的差异自然选择在该类营养条件下活性最好的嗜热菌种群.保持一定的菌量之后再驯化,是为了防止在驯化过程中,各种原因造成的菌种死亡对实验整体过进程的干扰(如营养未能即时跟上;培菌过程的突发事件造成培菌环境改变;菌种活性恢复慢而被其它劣质菌淘汰等).

株洲县18617924411: 我要建个简单禽病实验室,能做药敏及细菌培养就行,要买啥设备及药品 -
针叛樟脑: 细菌培养箱,通风橱,微波炉(加热培养基用的),酒精灯,接种环.高压蒸汽消毒锅,温控孵育摇床.一次性的培养管.各种培养基,培养液.抗生素.鉴别细菌的染料等等

株洲县18617924411: 观察霉菌的实验现象是什么? -
针叛樟脑: 观察颜色和形态,不同的霉菌有不同的形态和颜色.

株洲县18617924411: 在实验室培养细菌和真菌,首先要配制含有营养物质的___,然后___,最后才是培养. -
针叛樟脑:[答案] 细菌和真菌的生活需要一定的条件,如水分、适宜的温度、还有有机物.因此首先要配制含有营养物质的培养基,可以用牛肉汁加琼脂熬制,然后把培养基和所有用具进行高温灭菌,以防杂菌对实验的干扰,为防止高温杀死细菌、真菌,要等冷却后,...

株洲县18617924411: 跪求 土壤微生物的测定:涂布平板法 测定细菌、真菌和放线菌的实验步骤(详细) -
针叛樟脑: 涂布平板法实验器材 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配制 牛肉膏 0.3g 蛋白胨 1g 氯化钠 0.5g 琼脂 2g 自来水 100mL pH 7.0~7.2 灭菌 1.05kg/cm2,22min 配制具体步骤 1.称量 按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯...

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