干货分享 | 一文读懂流式细胞术

作者&投稿:年严 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
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探索细胞世界的微观世界</: 流式细胞术——细胞鉴定的高科技利器


在生物学研究和医学诊断的前沿,流式细胞术(Flow Cytometry)就像一台精密的分光镜,它能深入剖析细胞表面和内部的分子特性,帮助我们识别各类细胞类型、纯度和大小。其核心原理是通过荧光抗体或配体的结合,将细胞转化为悬浮液,然后通过装载抗体的试管或板,经由流式细胞仪进行检测。仪器分为临床型和科研型,后者凭借其分选功能,为复杂研究提供了强大支持。


高效分析的秘密武器</: 流式细胞仪的工作原理并不复杂,它利用特定荧光染料如FITC和PE,通过光子计(PMT)精确捕捉519 nm和575 nm波长的光。滤光片巧妙地引导和筛选这些光,如BP、SP、LP滤镜和双色向滤镜,使得荧光产生的电压脉冲得以精准测量。ADC以每秒百万次的高速度测量这些脉冲的面积,从而赋予每个细胞一个独特的荧光强度标记,阳性样本与阴性样本由此清晰区分。


染色艺术</: 抗体染色方式包括直接、间接和细胞内染色,PE、APC等荧光染料偶联剂如同调色师的画笔,帮助我们识别目标抗原的表达水平。选择荧光染料时,必须考虑到目标抗原在细胞内的丰度,以确保信号的准确性和对比度。


挑选合适的伙伴</: 选择流式细胞仪时,激光和滤光片的组合至关重要。它们共同决定了分析的速度、灵敏度和分辨率,以及在复杂细胞群体中的分选能力。每一种组合都是为了最大化信息的提取,满足特定研究的需求。


通过流式细胞术,科学家们得以窥探细胞世界的微观奥秘,进行精准的细胞分选和标记,推动了生物学和医学领域的重要发现。这是一项不可或缺的工具,让科研人员在细胞的世界里游刃有余,揭示生命的秘密。




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堂吉清肝: 1. 抽血,抗凝 2. 加一抗:cd62p-fitc单克隆抗体,和抗cd63-非fitc标记(比如apc标记),推荐浓度1:200稀释,室温孵育15分钟.pbs洗2次. 3. 先用一管无标记的血上机,设好pmt和gate 4, 上标记好的样本,先在血小板的gate中划出血小板,然后在historgram 上看fitc和apc的阳性率

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堂吉清肝: 呵呵,分选中性细胞,其实都不用抗体标记的.在FSC/SSC散点图上,可以很清楚的区分淋巴细胞,粒细胞和单核细胞.在粒细胞中,中性占有绝大多数.嗜酸性和嗜碱性细胞可以忽略不计的.只要把中性分选出来就可以了.你把这样分选的细胞用瑞氏染色看一下纯度. 这个可以作为补充,你先用FSC-SSC散点图圈出粒细胞,然后用你选的抗体标记.分出阳性的.但是要注意,这时的阳性比例应该很高了,如果不高,那说明染色有问题

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堂吉清肝: 另外两种是哪两种呢?调节的是后你需要4个样本,一是不带有任何荧光的,一个是只带有GFP的,一个是只带有另外一个荧光中的一个的,另外一个是剩下的那种荧光的.也就是一个无荧光,其他单色荧光.

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