抗氧化活性的实验测定方法有哪些

黄酮抗氧化性活性的测定方法有哪些~

1 抗氧化活性的化学评价方法
1. 1 FRAP 法
1. 2 TEAC 法
1. 3 DPPH 法
1. 4 ORAC 法
1. 5 TRAP 法
1. 6 TOSC 法
1. 7 F - C 法
2 抗氧化活性的生物评价方法
2.1CAP - e 法
2.2CAA 法

　　可以评价抗氧化剂的活性的方法：
　　抗氧化 -评价方法 ORAC

　　ORAC是OxygenRadicalAbsorptionCapacity（氧化自由基吸收能力）的缩写，是一种测试抗氧化能力的评价方法体系。
既然科学已证明抗氧化对人体的重要性，那么对抗
氧化效果进行量化是一个迫切需要解决的问题。只有抗氧化效果可以被量化，才能使企业研发出更好的产品、获得政府的认可、向消费者证明其产品抗氧化的有效性。
在ORAC方法未推出之前，因为抗氧化测试的极其复杂性，商业界（极其复杂的实验方案不可能被商业界所应用，当时一个严谨的抗氧化实验往往需要几个月，且费用巨贵，是商业界无法接受的）无法有效、全面的测试出样品的抗氧化力，然而商业是科技创新的动力，就像苹果公司。
ORAC抗氧化测试包括对：过氧化自由基（含亲水性、亲脂性）、羟基自由基、过氧亚硝基、单线态氧、超氧阴离子这五种人体最主要的活性氧自由基进行全面的分析，能有效得出样品的抗氧化实际能力及分布情况。
ORAC抗氧化生物测试是比普通抗氧化测试的更高一层的测试方案。利用人体细胞有效测试出样品的抗氧化力（生物利用度）。
ORAC已被美国AOAC评定为抗氧化测试标准方法，是国际主流测试方法。

　　其他评价方法
　　抗氧化不仅仅是一个概念，对生物体抗氧化的效果是可以量化测定的，作为动物实验一般是服用抗氧化剂一定时间后，测定血液中的酯质过氧化产物丙二醛变化、以及肝脏匀浆中超氧化物歧化酶SOD和谷胱甘肽过氧化物酶GSH-PX的活力变化。从上述两种酶和MDA的变化状况来判定抗氧化的强度及效果。作为人体不可能测肝脏匀浆，可以测定血液或者尿液中的MDA，以及血液中的SOD、GXH-PX来判定抗氧化的效果。
食物中氧化剂长期以来倍受国内外学者关注，这是因为：
①食物中抗氧化剂能够保护食物免受氧化损伤而变质。
②在人体消化道内具有抗氧化作用，防止消化道发生氧化损伤。
③吸收后可在机体其他组织器官内发挥作用。
④来源于食物的某些具有抗氧化作用的提取物可以作为治疗药品。抗氧化剂的作用机理包括鳌合金属离子、清除自由基、淬灭单线态氧、清除氧、抑制氧化酶活性等。
体外评价方法
虽然很多，但主要基于两类一个是通过测定样品抑制脂类物质氧化的能力来评定被测物的抗氧化能力另一个是用样品对人工合成的自由基的清除能力来反映待测物的抗氧化活性。抗氧化剂在食品和生物体系中的抗氧化活性受很多因素的影响，其中主要包括抗氧化剂在水相和油相间的分配效应，氧化条件和环境，被氧化底物物理状态等。
1．抗油脂过氧化力测定
脂类包括的范围很广，是构成生物膜的主要成分，脂类中的不饱和脂肪酸可以过氧化，脂类过氧化过程中会产生L、LO、LOO-等自由基以及LOOH，这些产物会损伤生物细胞。因此，能够抑制脂类过氧化具有重要的生物学意义。
A硫氰酸铁法FTC：硫氰酸铁盐(FTC)比色法是基于在酸性条件下，脂质氧化形成的过氧化物可将Fe2+氧化成Fe3+，然后Fe3+与硫氰酸根离子可形成在480-515nm内有最大吸收的红色络合物。通常用500nm处吸光值的高低表示物质抗脂质过氧化的能力，吸光值越小，表明物质的抗脂质过氧化能力越强。
B硫代巴比妥酸反应物TBARs法：是评价油脂的氧化程度的常用方法。油脂或者亚油酸氧化后的终产物主要是丙二醛，这些过氧化产物与硫代巴比妥酸作用生成有色化合物，该有色化合物在530nm左右有吸收。
2．清除DPPH能力的侧定
DP是一种早期合成的有机自由基，常用来评估抗氧化物的供氢能力，它在有机溶剂中非常稳定，呈紫色，而且在处有一个特征吸收峰，当遇到自由基清除剂时，DPPH的孤对电子被配对而使其退色，也就是在最大吸收波长处的吸光值变小。因此，可通过测定吸光值的变化来评价样品对DPPH自由基的清除效果。
3．还原能力的测定
还原力的测定是检验样品是否是良好的电子供体的方法，还原力强的样品应该是良好的电子供应者，它供应的电子不仅能使Fe3+还原为Fe2+，也可以与自由基反应。还原力的测定是用来评价抗氧化剂活性的常用方法。
4．抑制LOX酶实验
脂肪氧化酶LOX在植物中分布广泛是一种非血红素铁蛋白，分子量为90一100KD。这种酶蛋白有多个多肤链组成，含有三价铁离子金属辅基则有活性，而包含二价铁离子的金属辅基则缺乏活性。在生物体内的主要作用是，专一催化含有顺，顺一戊二烯结构的多元不饱和脂肪酸的加氧反应，生成具有共扼双键的多元不饱和脂肪酸的氢过氧化物。在生物体内的主耍底物是甘油脂类〔如磷脂）释放的游离不饱和脂肪酸，其中动物体内的主要底物是花生四烯酸，植物体内的主要底物是亚油酸和亚麻酸，主要产物为过氧羚基型脂肪酸。
上述方法是抗氧化剂的应用效果的体内、外测定评价方法。

1、ORAC

ORAC是Oxygen Radical Absorption Capacity（氧化自由基吸收能力）的缩写，是一种测试抗氧化能力的评价方法体系。

ORAC抗氧化测试包括对：过氧化自由基（含亲水性、亲脂性）、羟基自由基、过氧亚硝基、单线态氧、超氧阴离子 这五种人体最主要的活性氧自由基进行全面的分析，能有效得出样品的抗氧化实际能力及分布情况。

ORAC抗氧化生物测试是比普通抗氧化测试的更高一层的测试方案。利用人体细胞有效测试出样品的抗氧化力（生物利用度）。

2、其他评价方法

抗氧化不仅仅是一个概念，对生物体抗氧化的效果是可以量化测定的，作为动物实验一般是服用抗氧化剂一定时间后，测定血液中的酯质过氧化产物丙二醛变化、以及肝脏匀浆中超氧化物歧化酶SOD和谷胱甘肽过氧化物酶GSH-PX的活力变化。

从上述两种酶和MDA的变化状况来判定抗氧化的强度及效果。作为人体不可能测肝脏匀浆，可以测定血液或者尿液中的MDA，以及血液中的SOD、GXH-PX来判定抗氧化的效果。

3、抗油脂过氧化力测定

脂类包括的范围很广，构成生物膜的主要成分，脂类中的不饱和脂肪酸可以过氧化，脂类过氧化过程中会产生L、LO、LOO-等自由基以及LOOH，这些产物会损伤生物细胞。因此，能够抑制脂类过氧化具有重要的生物学意义。

A硫氰酸铁法FTC：硫氰酸铁盐(FTC)比色法是基于在酸性条件下，脂质氧化形成的过氧化物可将Fe2+氧化成Fe3+，然后Fe3+与硫氰酸根离子可形成在480-515nm内有最大吸收的红色络合物。通常用500nm处吸光值的高低表示物质抗脂质过氧化的能力，吸光值越小，表明物质的抗脂质过氧化能力越强。

B硫代巴比妥酸反应物TBARs法：是评价油脂的氧化程度的常用方法。油脂或者亚油酸氧化后的终产物主要是丙二醛，这些过氧化产物与硫代巴比妥酸作用生成有色化合物，该有色化合物在530 nm左右有吸收。

4、清除DPPH能力的侧定

DP是一种早期合成的有机自由基，常用来评估抗氧化物的供氢能力，它在有机溶剂中非常稳定，呈紫色，而且在处有一个特征吸收峰，当遇到自由基清除剂时，DPPH的孤对电子被配对而使其退色，也就是在最大吸收波长处的吸光值变小。因此，可通过测定吸光值的变化来评价样品对DPPH自由基的清除效果。

5、还原能力的测定

还原力的测定是检验样品是否是良好的电子供体的方法，还原力强的样品应该是良好的电子供应者，它供应的电子不仅能使Fe3+还原为Fe2+，也可以与自由基反应。还原力的测定是用来评价抗氧化剂活性的常用方法。

6、抑制 LOX酶实验

脂肪氧化酶LOX在植物中分布广泛是一种非血红素铁蛋白，分子量为90一100KD。这种酶蛋白有多个多肤链组成，含有三价铁离子金属辅基则有活性，而包含二价铁离子的金属辅基则缺乏活性。

在生物体内的主要作用是，专一催化含有顺，顺一戊二烯结构的多元不饱和脂肪酸的加氧反应，生成具有共扼双键的多元不饱和脂肪酸的氢过氧化物。

在生物体内的主耍底物是甘油脂类〔如磷脂）释放的游离不饱和脂肪酸，其中动物体内的主要底物是花生四烯酸，植物体内的主要底物是亚油酸和亚麻酸，主要产物为过氧羚基型脂肪酸。

扩展资料

在机体内抗氧化活性成分发挥作用主要通过两个机制：第一是链的中断机制，主要中断自由基的链式反应，例如多酌类化合物、VE、VC等天然抗氧化物质可向自由基提供一个电子来中断链式反应。第二是促使产生自由基的催化剂失活而达到抗氧化的目的。

抗氧化物质可与超氧化物歧化酶等酶类或抗氧化物质协同构成抗氧化联合系统，增强机体的抗氧化能力，修复损伤的DNA，使体内的基因能够正常的表达。对于食品而言，食品中的抗氧化活性成分不但可以防止食品自身的腐败变质还可以生产加工为抗氧化剂。

田迪英等对41种果蔬进行了抗氧化活性的研究，发现其中大部分果蔬具有较强的抗氧化能力。谢天柱等对添加包括茶多酷在内的多种抗氧化剂的苹果酒的抗氧化能力的比较，结果发现，添加0.1%的茶多酷可提高果酒的抗氧化能力，并可有效减轻果酒的褐变程度。

参考资料来源：百度百科-抗氧化性

参考资料来源：百度百科-抗氧化

抗氧化活性实验方法（体外实验） 

1、清除DPPH自由基能力的测定 

称取一定量的DPPH，用无水乙醇配制成0.04mg/mL的DPPH溶液。分别取2mL不同浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液，加入2mL DPPH溶液，混合均匀，室温放置30min后，5000r/min离心10min。取上清液于517nm处测吸光值。用Vc作为阳性对照。样品对DPPH自由基的清除率用以下公式计算：

2、总还原能力的测定 

在10mL离心管中分别加入0.2mol/L pH 6.6的磷酸缓冲液2.5mL和不同浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液1mL，加入2.5 mL 1%铁氰化钾，混合均匀后于50℃反应20min。取出后加入2.5mL 10%三氯乙酸终止反应，5000r/min离心10min。取上清液2.5mL，加入2.5mL蒸馏水和0.5mL FeCl3，混匀后静置10min，在700nm处检测吸光值。Vc作为阳性对照。

采用邻苯三酚自氧化法测定。取50mmol/L Tris-HCl缓冲液（pH8.2）4.5mL，置25℃水浴中保温20min，分别加入1mL样品溶液和0.4mL 25mmol/L邻苯三酚溶液，混匀后于25℃水浴中反应5min，加入1mL 8mmol/L HCl终止反应，于299nm处测定吸光度（Ax），空白对照组以相同体积蒸馏水代替样品。按下式计算O2-清除率：

A0—空白对照液的吸光度； Ax—加入样品溶液后的吸光度； 

Ax0—不加显色剂H2O2样品溶液本底的吸光度。 

总抗氧化能力的测定、DPPH法、羟基自由基法等等

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岗巴县15639186543： 抗氧化物活性测定方法总结 - ？
尾怨晶妥： 去百度文库,查看完整内容>内容来自用户:elaine_tang抗氧化物活性测定方法(倾向于考虑DPPH法和ORAC法) 1.FRAP法:铁离子还原抗氧化能力测定法[] FRAP(ferric ionreducing antioxidant power)方法,在低pH值的溶液中,Fe3+-TPTz(...

岗巴县15639186543： 黄酮抗氧化性活性的测定方法有哪些 - ？
尾怨晶妥： 1 抗氧化活性的化学评价方法 1. 1 FRAP 法 1. 2 TEAC 法 1. 3 DPPH 法 1. 4 ORAC 法 1. 5 TRAP 法 1. 6 TOSC 法 1. 7 F - C 法 2 抗氧化活性的生物评价方法 2.1CAP - e 法 2.2CAA 法

岗巴县15639186543： 有哪些方法可以评价抗氧化剂的活性 - ？
尾怨晶妥： 可以评价抗氧化剂的活性的方法:抗氧化 -评价方法 ORACORAC是OxygenRadicalAbsorptionCapacity(氧化自由基吸收能力)的缩写,是一种测试抗氧化能力的评价方法体系.既然科学已证明抗氧化对人体的重要性,那么对抗 氧化效果进行...

岗巴县15639186543： 测生物抗氧化性的方法有哪些 - ？
尾怨晶妥： 一般测定抗氧化酶的活性,比较重要而且一般都有明显变化的是SOD,POD,CAT,APX,如果不是特殊的需要,这些酶够用了.还可以测一下H2O2的含量

岗巴县15639186543： 在做抗氧化实验时,dpph是不是必须用99%乙醇溶解 - ？
尾怨晶妥： 抗氧化活性实验方法(体外实验) 1、清除DPPH自由基能力的测定 称取一定量的DPPH,用无水乙醇配制成0.04mg/mL的DPPH溶液.分别取2mL不同浓度(2,4,6,8mg/mL)的溶液,加入2mL DPPH溶液,混合均匀,室温放置30min后,5000r/min离心10min.

岗巴县15639186543： 抗氧化性怎么检验 - ？
尾怨晶妥： 生物学的么 看具体结构啦,比如谷胱甘肽有氧化性,因为半胱氨酸残基中的-SH(巯基)可以被氧化,从而保护其他物质不被氧化,类似的,维C能可逆地加氢脱氢(加氢还原脱氢氧化),也可以抗氧化

岗巴县15639186543： 测定人体抗氧化状态有哪些好点的办法? ？
尾怨晶妥： 其中的一种就是谷胱甘肽过氧化 物酶法.我先给两名健康状况一般的志愿者实施这种价格低廉的血液测定,然 后给其中一名志愿者珍妮特,提供以每日推荐摄入量为基础...

岗巴县15639186543： 几种适合药物筛选的抗氧化实验微孔板测定方法及其稳定性研究 - ？
尾怨晶妥： 摘 要:目的:建立一系列适用于药物筛选的微孔板抗氧化实验方法.方法:采用SpectraMax M5连续光谱酶标测试仪,建立抗DPPH氧化活性、清除羟自由基实验方法(邻二氮菲-Fe2+氧化法)、还原能力测定及抗脂质过氧化微孔板抗氧化实验方法.结果:这四种抗氧化微孔板实验方法具有稳定性好,所需试剂种类少、耗材量少,方法简便及可重复性强等共同特点;相对而言,抗DPPH氧化和还原实验两种实验方法在这几方面更具优势,更适合于作为抗氧化药物的大规模初筛基础试验方法.结论:这四种微孔板抗氧化实验方法,可以广泛应用于药物筛选,特别是高通量药物筛选研究.

岗巴县15639186543： 抗氧化活性与抗氧化作用有何区别 - ？
尾怨晶妥： 抗氧化作用是有没有抗氧化作用 抗氧化活性是比较抗氧化物质的活性高低

岗巴县15639186543： ORAC抗氧化测试包括哪些? - ？
尾怨晶妥： ORAC抗氧化测试包括对:过氧化自由基(含亲水性、亲脂性)、羟基自由基、过氧亚硝基、单线态氧、超氧阴离子 这五种人体最主要的活性氧自由基进行全面的分析,能有效得出样品的抗氧化实际能力及分布情况.