分子杂交的DNA分子杂交发展历程

DNA分子杂交的DNA分子杂交的意义~

DNA分子杂交

DNA分子杂交

总述：
通过碱基对之间非共价键的形成即出现稳定的双链区，这是核酸分子杂交的基础。使单链聚合双链的过程称为退火或复性。核酸杂交技术基本上是Hall等1961年的工作开始的，探针与靶序列在溶液中杂交，通过平衡密度梯度离心分离杂交体。该法很慢、费力且不精确，但它开拓了核酸杂交技术的研究。Bolton等1962年设计了第一种简单的固相杂交方法，称为DNA-琼脂技术。变性DNA固定在琼脂中，DNA不能复性，但能与其它互补核酸序列杂交。典型的反应是用放射性标记的短DAN或RNA分子与胶中DNA杂交过夜，然后将胶置于柱中进行漂洗，去除游离探针，在高温、低盐条件下将结合的探针洗脱，洗脱液的放射性与结合的探针量呈正比。该法尤其适用于过量探针的饱和杂交实验。60年代末，Britten等设计了另一种分析细胞基因组的方法。该法是研究液相中DNA的复性以比较不同来源核酸的复杂度，典型的方法是：从不同生物体（细菌、酵母、鱼和哺乳动物等）内分离DNA，用水压器剪切成长约450核苷酸（nt）的片段。剪切的DNA液（含0.12mol/L磷酸盐缓冲液或0.18mol/LNa+），经煮沸使dsDNA热变性成ssDNA。然后冷至约60℃，在此温度孵育过程中，测定溶液一定时间内的UV260nm的吸光度（减色效应）来监测互补链的复性程度。通常该实验可比较不同来源生物DNA的复性速率，并可建立序列复杂度与动力学复杂度间的关系。 一60年代中期Nygaard等的研究为应用标记DNA或RNA探针检测固定在硝酸纤维素（NC）膜上的DNA序列奠定了基础。如Brown等应用这一技术评估了爪蟾rRNA基因的拷贝数。RNA在代谢过程中被3H尿嘧啶标记，并在过量的情况下与膜上固定的基因组DNA杂交，继而用RNase处理，消化非特异性结合的RNA。漂洗后计数以测定杂交探针的量。通过计算与已知量DNA杂交的RNA量即可评估rRNA基因数。由于当时缺乏特异探针，这种方法不能用于研究其它特异基因的表达，这些早期过量探针膜杂交试验实际上是现代膜杂交实验的基础。进入70年代早期，许多重要的发展促进了核酸杂交技术的进展。例如，对特异基因转录产物的分析和对动力学杂交实验又有兴趣。固相化的PolyU–Sepharose和寡（dT）-纤维素使人们能从总RNA中分离PolyA+RNA。用mRNA的经纯化技术可从网织红细胞总RNA中制备α-和β-珠蛋白mRNA混合物。这些珠蛋白mRNA首次被用于合成特异的探针以分析珠蛋白基因的表达。由于制备cDNA探针很繁琐，所获得cDNA的长度和纯度也不稳定。所以寻求新的探针来源是使分子杂交技术进一步推广的基础。 70年代末期到80年代早期，分子生物学技术有了突破性进展，限制性内切酶的发展和应用使分子克隆成为可能。各种载体系统的诞生，尤其是质粒和噬菌体DAN载体的构建，使特异性DNA探针的来源变得十分丰富。人们可以从基因组DNA文库和cDNA文库中获得特定基因克隆，只需培养细菌，便可提取大量的探针DNA。迄今为止，已克隆和定性了许多特异DNA探针。 由于固相化学技术和核酸自动合成仪的诞生，印迹技术，用数微克DNA就可分析特异基因。特异DNA或RNA序列的量和大小均可用Southern印迹和Northern印迹来测定，与以前的技术相比，大大提高了杂交水平和可信度。
尽管取得了上述重大进展，但分子杂交技术在临床实用中仍存在不少问题，必须提高检测单拷贝基因的敏感性，用非放射性物质代替放射性同位素标记探针以及简化实验操作和缩短杂交时间，这样，就需要在以下三方面着手研究：第一，完善非放射性标记探针；第二，靶序列和探针的扩增以及信号的放大；第三，发展简单的杂交方式，只有这样，才能使DNA探针实验做到简便、快速、低廉和安全。

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雄县13352015336： 分子杂交技术的发展过程是什么样的? ？
止骅健肝： 60年代末,Britten等设计了另一种分析细胞基因组的方法

雄县13352015336： 核酸分子杂交技术是从什么发展而来的 - ？
止骅健肝： 分子杂交(molecularhybridization)不同来源的核酸单链之间或蛋白质亚基之间由于结构互补而发生的非共价键的结合.核酸分子杂交技术是根据这一原理,利用核酸分子的碱基互补原则而发展起来.

雄县13352015336： 分子杂交有什么分法? - ？
止骅健肝： 分子杂交(molecularhybridization)确定单链核酸碱基序列的技术.其基本原理是待测单链核酸与已知序列的单链核酸(叫做探针)间通过碱基配对形成可检出的双螺旋片段.这种技术可在DNA与DNA,RNA与RNA,或DNA与RNA之间进行,形...

雄县13352015336： 什么是DNA分子杂交原理？
止骅健肝： DNA分子杂交 :DNA分子杂交的基础是,具有互补碱基序列的DNA分子,可以通过碱基对之间形成氢键等,形成稳定的双链区.在进行DNA分子杂交前,先要将两种生物的DNA分子从细胞中提取出来,再通过加热或提高pH的方法,将双链DNA分子分离成为单链,这个过程称为变性.然后,将两种生物的DNA单链放在一起杂交,其中一种生物的DNA单链事先用同位素进行标记.如果两种生物DNA分子之间存在互补的部分,就能形成双链区.由于同位素被检出的灵敏度高,即使两种生物DNA分子之间形成百万分之一的双链区,也能够被检出. http://baike.baidu.com/view/778298.htm

雄县13352015336： 分子杂交的DNA分子杂交反应 - ？
止骅健肝： 探针-靶反应 从化学和生物学意义上理解,探针是一种分子,它带有供反应后检测的合适标记物,并仅与特异靶分子反应.抗原-抗体、外源凝集素-碳水化合物、亲和素-生物素、受体-配基(ligand)以及互补核酸间的杂交均属于探针-靶分子反应...

雄县13352015336： DNA杂交指 - ？
止骅健肝： DNA分子杂交的基础是,具有互补碱基序列的DNA分子.生物的DNA单链放在一起杂交,其中一种生物的DNA单链事先用同位素进行标记.如果两种生物DNA分子之间存在互补的部分,就能形成双链区,标记区就能检验出来

雄县13352015336： 生物 - 什么是DNA杂交?DNA杂交概念是什么?DNA探针的原理 ？
止骅健肝： DNA杂交的概念是:用已知DNA分子的一条链作为要配对的新DNA分子的一条,将 要探测的DNA分子与其放在一起,然后用相关酶催化,看是否能配对,或者是配对的完整度是多少.比如:将人的DNA分子与猴子的DNA分子片断放在一起杂交就可以看到是配对率90%多;将已知大肠杆菌的DNA分子的一条链作为＂探针＂检测水中大肠杆菌的DNA分子就可以达到100% 注:DNA探针利用的是DNA分子杂交技术为基础的.

雄县13352015336： DNA分子杂交技术的杂交指的是什么 - ？
止骅健肝： DNA分子杂交技术指的是以一段DNA分子作为探针与相应的DNA杂交,判断是否基因重组成功.DNA分子杂交的基础是,具有互补碱基序列的DNA分子,可以通过碱基对之间形成氢键等,形成稳定的双链区.在进行DNA分子杂交前,先要将两...

雄县13352015336： 基因工程的分子杂交和dna分子杂交有什么区别 - ？
止骅健肝： 依我看,是所包含的范围不同:分子杂交所包括的范围较广,DNA与DNA形成互补链,DNA与RNA形成互补链,甚至蛋白质与其他大分子的特异识别与结合(抗原抗体杂交)都可划为分子杂交;而DNA杂交仅限于指DNA与DNA形成互补链.

雄县13352015336： DNA的变性、复性与分子杂交的过程是什么? ？
止骅健肝： 简单顺序的DNA分子,如多聚(A)和多聚(U)这二种单链序列复性时,互补碱基的配对较易实现.而顺序复杂的DNA,如小牛DNA的非重复部分,一般以单拷贝存在于...