如何获得适合用于制备感受态的菌体细胞
不是。虽然菌体浓度越大，细胞的绝对数量越多，但这只是在一定的范围内，感受态的效率主要和菌体的状态有关。
制作感受态的菌体最好处于对数期，温度不同，处于对数期的OD值也不同，一般37℃摇菌，制作感受态的OD最好在0.4左右，不要超过0.6。
感受态细胞你先用稳定浓度的高纯质粒测一下效率，如果达不到10的5次方就别用了。如果效率挺高有6或7次方而转化子不多，那么就和你构建的质粒有关了。制备感受态，一个要快，二要一直保持细胞在冷冻状态，所有epp管和枪头都提前放在-80度冰箱冷冻。
一.材料E.coli DH5α菌株:Rˉ,Mˉ,Ampˉ；pBS质粒DNA:购买或实验室自制,eppendorf管.
二.设备
恒温摇床,电热恒温培养箱,台式高速离心机,无菌工作台,低温冰箱,恒温水浴锅,制冰机,分光光度计,微量移液枪.
三.试剂
1.LB固体和液体培养基
2.Amp母液
3.含Amp的LB固体培养基:将配好的LB固体培养基高压灭菌后冷却至60℃左右,加入Amp储存液,使终浓度为50ug/ml,摇匀后铺板.
4.麦康凯培养基(Maconkey Agar):取52g麦康凯琼脂,加蒸馏水1000ml,微火煮沸至完全溶解,高压灭菌,待冷至60℃左右加入Amp储存液使终浓度为50ug/ml,然后摇匀后涂板.
5.0.05mol/L CaCl2溶液:称取0.28g CaCl2(无水,分析纯),溶于50ml重蒸水中,定容至100ml,高压灭菌.
什么是标准溶液,其制备方法有几种,各适用于什么情况
2. 标定法 标定法适用于那些不能直接配制成准确浓度的标准溶液。首先配制一个接近所需浓度的溶液，然后使用基准物质进行标定。例如，在配制用于滴定的酸碱溶液时，通常先配制成大约0.1mol·l-1的浓度。在配制过程中，可以使用量筒量取液体或台秤称取固体试剂，但需要注意的是，在标定过程中必须保持高...
适用于熔融法制备固体分散体的载体材料
【答案】：C 脂质类载体材料常用于制备缓释固体分散体，一般药物溶出速度随脂质含量增加而降低，常用熔融法制备；聚维酮用溶剂法制备固体分散体时，对多种药物有较强的抑制晶核形成和成长作用，使药物形成非结晶型无定形物；目前最常用的包合材料是B-CD。
软膏剂的制备方法有哪些?各有何特点?如何选用
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非金属矿物直接制备高性能材料的关键技术及发展方向
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制备纳米金需要何种微乳液
3、其次，纳米金具有良好的光学性质，如局域表面等离子共振效应，可以用于制备高灵敏度的传感器和生物标记物。此外，纳米金还具有良好的热稳定性和抗氧化性，可用于制备高性能的催化剂和电子器件。4、纳米金在医学领域也有广泛的应用。例如，它可以作为一种新型的药物载体，将药物包裹在纳米金中，通过改变...
下列化合物中,可用于制备相应的Grignard试剂的有?
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蛋白质的沉淀方法中哪些可以用于酶的制备过程
蛋白质的沉淀方法中只有盐析法可以用于酶的制备过程。 蛋白质沉淀的概念: 蛋白质分子凝聚从溶液中析出的现象称为蛋白质沉淀(precipitation),变性蛋白质一般易于沉淀,但也可不变性而使蛋白质沉淀,在一定条件下,变性的蛋白质也可不发生沉淀。 定性分析: 蛋白质所形成的亲水胶体颗粒具有两种稳定因素,即颗粒表面的水化层...
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1. 亚麻油是一种优质的油相成分，适合用于制备水包油型乳液。2. 在选择司盘80和吐温80的复配比例时，建议在3：7至1：9的范围内进行试验。3. 实际操作中，应根据实验结果来确定最佳的比例，以达到理想的乳液稳定性。
兽医生物制品的种子批有什么作用?如何制备?
兽医生物制品的种子批是指在工业生产中，用于制备兽用生物制品的原始种子，制备方法是预处理，扩增，检测以及保存。1、选择适合的微生物或细胞系，并进行预处理，如培养基的配制、培养条件的优化等。2、将预处理后的微生物或细胞系进行扩增，促进生长和繁殖。这个过程需要严格控制温度、搅拌、氧气和营养...
混凝土用粗砂和细砂那个好
4. 优质的沙子应当是清洁无泥的，这样的沙子更适合用于混凝土的制备。5. 在选择混凝土用沙时，应当优先考虑中沙，因为它的颗粒大小适中，有助于混凝土的均匀性和强度。6. 沙子的颗粒级配分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级配区，分别对应细沙、中砂和粗砂。7. Ⅱ区砂，也就是中砂，最适合用于制备强度等级在C30至C60...
伊佩安神： 1.将冻存的菌种1:100接种于3ml的LB液体培养基中,37℃摇床过夜震荡培养.2.取1ml活化菌种接种于100mlLB培养基中,37℃摇床培养1.5-2h.3.将菌种在冰上放置10min.4℃、4000rpm下离心10min收集菌体.4.弃上清,用事先冰浴的0.1mol/Lcacl2重新悬浮细胞,冰浴30min.5.收集菌体,条件同上.6.弃上清,在冰浴条件下加入0.1mol/Lcacl2溶液.7.分装保存(40%甘油与感受态细胞1:1混合,使甘油的终浓度为20%).
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木兰县13064296734： 用氯化钙怎样制备新鲜的大肠杆菌感受态细胞? - ？
伊佩安神： 这属于专业问题啦 下面的简单方案是Clhen等(1972)所用方法的变通方案,常用于成批制备感受态细菌,这些细菌可使每微克螺旋质粒DNA产生5x106-2x107 个转化菌落,这样的转化效率足以满足所有在质粒中进行的常规克隆的需要.该方法...
木兰县13064296734： 大肠杆菌感受态细胞的制备方法步骤谁能介绍下!？
伊佩安神：大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl2法) (1) 从新活化的E.coli DH5α菌平板上挑取一单菌落,接种于3~5ml LB液体培养中,37℃振荡培养12h左右,直至对数生长期.将该菌悬液以1:100~1:50转接于100ml LB液体培养基中,37℃振荡扩大培...
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伊佩安神： 此外(1)质粒dna的质量和浓度,环状重组质粒的转化率较分子量相同的线性重组质粒高10~100倍,则会使转化率下降;ml左右,且注意防止被其它试剂.(应注意od600值与细胞数之间的关系随菌株的不同而不同),大于30kb的重组质粒将...
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伊佩安神： 氯化钙法(Calcium Chloride) 本方法适用于批量制备大肠杆菌感受态细胞,所得感受态细胞可以获得5 x 106 到 2x 107 转化克隆/微克超螺旋质粒DNA 材料(MATERIALS) 缓冲液和溶液(Buffers and Solutions) (冰冷的)CaCl2•2H2O (1 M...
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木兰县13064296734： 大肠杆菌在哪个生长时期最适合制备成感受态细胞? - ？
伊佩安神： 对数期 ,OD=0.4-0.6
木兰县13064296734： 制备高效率感受态的方法是什么? - ？
伊佩安神： 楼主你好: 液氮或低温冰箱中取出的大肠杆菌*E.COLI DH5, JM109,HB101等,在LB平板上划线,37度过夜至长出单菌落.挑直径1-3毫米的单菌落*可多个, 接种到250毫升/3升锥形瓶 或80毫升/1升锥形瓶的SOB培养基. 培养基量不可再多,会影...
