某中药含有大黄酚 芦荟大黄素 大黄素甲醚等成分，设计合理的 提取 分...
PH梯度萃取法结合硅胶柱层析法
大黄可减轻内毒素性低血压，消除氧自由基，降低再灌注期血浆、肺、小肠等内源性一氧化氮的水平，降低肠、肝、肺毛细血管通透性，减轻内毒素引起的肠壁血管通透性增加，防止肠道细菌移位及内毒素进入血循环等等。临床可用于严重创伤、感染性休克、MODS等危重病预防及治疗胃肠功能衰竭。我们的经验：生大黄30克煎成100ml，灌肠或口服，100ml,1-3次/日，亦可灌肠和口服并用。直到肠鸣音恢复开始减量 大黄含有蒽类衍生物、苷类化合物、鞣质类、有机酸类、挥发油类等。
1. 蒽类衍生物分为：⑴ 游离蒽醌衍生物，如芦荟大黄素（aloe emodin）、土大黄素（chrysaron）、大黄酚（chrysophanol）、大黄素（emodin）、异大黄素（isoernodin）、虫漆酸D（laccaic acid D）、大黄素甲醚（physcion）、大黄酸（rhein）；⑵ 结合蒽醌化合物，有大黄酸、芦荟大黄素、大黄酚的单和双葡萄糖甙；大黄素、大黄素甲醚的单糖甙；蒽酚和蒽酮化合物：大黄二蒽酮（rheidin）、掌叶二蒽酮（palmidin）以及与糖结合的甙如番泻甙（sennoside）A、B、C、D、E、F等。
2. 苷类化合物：土大黄甙（rhaponticin）、3，5，4’-三羟基芪烯一4’-O-β-D-（6’-O-没食子酰）葡萄糖甙（3，5，4’-trihydroxy-stilbene－4’-O-β-D-（6’-O-gallayl）-glucoside）、3，5，4’-三羟基茋烯-4’-O-β-D-吡喃葡萄糖甙（3，5，4’-trihydroxy stilbene-4’-O-β-D-glucopyranoside）。
3. 萘衍生物：torachrysone-8-O-β-D-glucopy ranoside，torachrysone-8-（6′-oxaly）-glucoside及决明松（torachryson）。
4. 鞣质类：没食子酰葡萄糖、d-儿茶素、没食子酸、大黄四聚素（tetrann）等。大黄四聚苯经水解，得没食子酸、肉桂酸及大黄明（rheosmin）。此外合有树脂。
尚含有有机酸：苹果酸、琥珀酸、草酸、乳酸、桂皮酸、异丁烯二酸、柠檬酸、延胡紊酸等。
大黄中还含有挥发油、脂肪酸及植物甾醇等。本品横切面：根木栓层及皮层大多已除去。韧皮部明显；薄壁组织发达。形成层成环。木质部射线较密，宽2～4列细胞，内含棕色物；导管非木化，常1至数个相聚，稀疏排列。薄壁细胞含草酸钙簇晶，并含多数淀粉粒。根茎髓部宽广，其中常见黏液腔，内有红棕色物；异型维管束散在，形成层成环，木质部位于形成层外方，韧皮部位于形成层内方，射线呈星状射出。粉末黄棕色。草酸钙簇晶直径20～160μm，有的至190μm。具缘纹孔、网纹、螺纹及环纹导管非木化。淀粉粒甚多，单粒类球形或多角形，直径3～45μm，脐点星状；复粒由2～8分粒组成。
取本品粉末少量，进行微量升华，可见菱状针晶或羽状结晶。
取本品粉末0.1g，加甲醇20ml浸渍1小时，滤过，取滤液5ml,蒸干加水10ml使溶解，再加盐酸1ml,置水浴上加热30分钟，立即冷却，用乙醚分2次提取，每次20ml,合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.1g,同法制成对照药材溶液。再取大黄酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶Ｈ薄层板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸(155:1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，置氨蒸气中熏后，日光下检视，斑点变为红色。
【检查】
土大黄苷 取本品粉末0.2g，加甲醇2ml,温浸10分钟，放冷，取上清液10μl,点于滤纸上，以45％乙醇展开，取出，晾干，放置10分钟，置紫外光灯(365nm)下检视，不得显持久的亮紫色荧光。
干燥失重 取本品，在 105℃干燥6小时，减失重量不得过15.0％（附录Ⅸ G）。
总灰分 不得过10.0％（附录Ⅸ K）。
酸不溶性灰分 不得过0.8％（附录Ⅸ K）。
【含量测定】
照高效液相色谱法(附录Ⅵ D)测定。
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1％磷酸溶液(85:15)为流动相；检测波长为254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备 精密称取大黄素、大黄酚对照品各5mg，分别置50ml量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取大黄素溶液1ml、大黄酚溶液2ml，分别置25m l量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(大黄素每1ml中含4μg、大黄酚每1ml中含8μg)。
供试品溶液的制备 取本品粉末(过四号筛)约0.1g[同时另取本品粉末测定水分(附录ⅨH 第二法)]，精密称定，置50ml锥形瓶中，精密加甲醇25ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤5ml，置50ml圆底烧瓶中，挥去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液10ml，超声处理5分钟，再加氯仿10ml，加热回流1小时，冷却，移置分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗中，分取氯仿层，酸液用氯仿提取2次，每次约8ml，合并氯仿液，以无水硫酸钠脱水，氯仿液移至100ml锥形瓶中，挥去氯仿，残渣精密加甲醇10ml，称定重量，置水浴中微热溶解残渣，放冷后，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取上述两种对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，含大黄素(C15H10O5)和大黄酚(C15H10O4)的总量不得少于0.05％。
（1）酸水解
一、实验目的
1、 学习酸水解的方法
2、 得到大黄粉酸水解药渣
二、实验原理
大黄中蒽醌类化合物有结合态和游离态两种形式存在，为得到游离蒽醌类化合物，先酸水解，使蒽醌类化合物以苷元的形式游离出来。
三、方法
10g大黄粉
20%H2SO4直火回流加热1小时，抽滤
滤渣
水洗中性，干燥
滤饼
四、注意事项
1、药粉在水洗中性过程中尽量避免损失；
2、药渣干燥前要松散；
3、水解液酸性强，避免用手直接接触。
五、思考题
1、酸水加热为什么要用回流装置？
2、要得到大黄中的蒽醌苷元，还有什么办法？
（2）总羟基蒽醌苷元的提取
一、实验目的
1、学习连续回流提取方法
2、得到大黄中总羟基蒽醌苷元提取物
二、实验原理
苷元为亲脂性成分，用乙醚提取。
三、实验方法
滤饼
置索氏提取器中，加150ml Et2O,
提2.5hr（提取液无色）
Et2O液（大黄中总羟基蒽醌苷元）
四、注意事项
1、 纸筒的包法：原则是药粉不漏出
2、 提取器的装法
（1）纸筒的高度不超过侧管的高度；
（2）药粉的高度不超过虹吸管的高度；
（3）线头在管内，保持提取器闭封。
3、 溶剂的倒法
50ml由提取器上端倒入，浸泡药粉；100ml倒入平底烧瓶中。
4、 温度的控制
溶剂蒸气至冷凝管第二个球处，水浴温度约60℃。
5、 实验室禁止明火，实验过程中保持通风，尽量避免乙醚挥出。
6、 平底烧瓶要干燥。
五、思考题
1、同回流提取相比，该方法的优点？
2、还可选用哪些溶剂提取？
3、若平底烧瓶中有水，将会有什么结果？
4、为什么温度控制在溶剂蒸气至冷凝管第二个球处？
（3）PH梯度萃取
一、实验目的
1、学习PH梯度萃取的方法和原理
2、得到大黄素粗品
二、实验原理
依据大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的酸性强弱不同，采用强弱不同的碱水萃取，得到大黄素。
三、实验方法
1、 分离方法
乙醚液（T）
↓120ml(40mlX3)2.5%NaHCO3
↓-------------------------↓
乙醚液（1） NaHCO3液
↓120ml(40mlX3)2.5%Na2CO3
↓--------------------------↓
乙醚液（2） Na2CO3液
↓120ml(40mlX3)2.5%Na2CO3 ↓调 pH3
↓－－－－－－－－↓ 沉淀
Na2CO3液 乙醚层（3）
↓100ml(25mlX4)0.5%NaOH
↓－－－－－－↓
NaOH 乙醚层（4）
2、TLC跟踪检查
硅胶-CMC-Na
展开剂：Pet-EtOAc(7:3)
样品：乙醚液（T，1-4）
四、注意事项
1、分液漏斗使用前检查是否漏。
2、乙醚提取液倒入分液漏斗中，若有沉淀留在瓶中，用待萃取的碱液洗后再倒入分液漏斗中，直至沉淀全部被溶解。
3、 产生乳化层，解决的方法是：
（1）轻摇；
（2）长时间静置；
（3）用电吹风加热
（4）玻棒搅动
（5）抽滤
4、待完全静置分层后放出水层。
五、思考题
1、 萃取时碱水层的颜色？
2、 比较五种蒽醌类化合物极性大小、酸性大小。
3、 在TLC中，五种蒽醌类成分Rf值的大小顺序？
4、 萃取大黄素时，碱水中若含少量乙醚，酸化后能得到沉淀吗？
5、 判断各种蒽醌类成分分离的依据是什么？
6、 你能设计出比该方法更完善的实验条件吗？写出实验方法及验证方案。
（4）柱色谱精制大黄素
一、实验目的
1、学习硅胶柱色谱分离方法
2、得到大黄素精品
二、实验原理
依据大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚极性差异分离。
三、实验方法
1、装柱方法：100~200目硅胶10g，用脱脂棉填柱子底端。
要求：均匀，柱面平整紧密无气泡。
干法装柱：小漏斗法，下端活塞打开，硅胶均匀地倒入柱中；
湿法装柱：硅胶用洗脱剂拌均匀至无气泡，下端活塞打开，倒入柱中。
2、加样方法
要求：原始色带小，均匀。
干法上样：样品用少量丙酮溶解后，加少许（半牛角匙）硅胶拌匀，将丙酮挥尽后上于柱顶端。
湿法上样：样品用少量（<1ml）洗脱剂溶解，用吸管移入柱顶端。
3、洗脱收集：加洗脱剂洗脱，待色带冲下时，用瓶子分段收集。
分段标准：（1）色带颜色
（2）10~15ml/瓶
洗脱剂：Pet-EtOAc(7:3)
4、合并浓缩：TLC跟踪检查，合并大黄素液，回收至5ml左右。
5、放置析晶
四、注意事项
1、玻璃器皿干燥，无水；
2、装柱时，下端活塞应打开；
3、洗脱剂不能低于柱平面。
五、思考题
1、 比较湿法装柱与干法装柱的特点？
2、 比较湿法上样与干法上样的特点？
（5）鉴 定
一、实验目的
1、蒽醌类化合物的颜色反应
2、大黄素熔点的测定
二、实验内容
1、熔点：大黄素（256~257℃）
2、颜色反应：比较大黄素与茜草素的颜色区别 ( 纸片反应)
试剂：%NaOH，0.5% MgAc2
三、思考题
1、大黄素、茜草素定性反应后的颜色？结构与呈色的关系？
2、其它鉴别方法
大黄酚：A 芦荟大黄素：B 大黄素甲醚:C
中药
l 乙醇回流
l 浓缩
浸膏
l 乙醚萃取
药渣 乙醚液（A B C）
l 0.5%NaOH水溶液萃取
碱液（B） 乙醚液（A C）
l 盐酸 l 硅胶或磷酸氢钙柱色谱 石油醚-苯洗脱
沉淀（B） 先出A 后出C
这是提取流程，希望对你有帮助！
亥药藏青：[答案] 大黄酚:A 芦荟大黄素:B 大黄素甲醚:C 中药 l 乙醇回流 l 浓缩 浸膏 l 乙醚萃取 药渣 乙醚液(A B C) l 0.5%NaOH水溶液萃取 碱液(B) 乙醚液(A C) l 盐酸 l 硅胶或磷酸氢钙柱色谱 石油醚-苯洗脱 沉淀(B) 先出A 后出C 这是提取流程,
八道江区17615463388： 哪些中药含有有效成分蛇床子素?哪些中药含有有效成分蛇床子素 ？
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八道江区17615463388： 中药大黄有效成分是什么 - ？
亥药藏青： 我查了一下中药的课本,它的化学成分主要是大黄含有蒽类衍生物、苷类化合物、鞣质类、有机酸类、挥发油类等. 1. 蒽类衍生物分为:⑴ 游离蒽醌衍生物,如芦荟大黄素(aloe emodin)、土大黄素(chrysaron)、大黄酚(chrysophanol)、...
八道江区17615463388： 明目上清片的作用是什么? - ？
亥药藏青： 那么明目上清片的作用是什么/ 大黄根状茎含大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚等游离蒽醌衍生物,均无致泻作用.另含以上物质的葡萄糖苷及番泻叶苷A、B、C等结合状蒽醌衍生物,均有致泻作用.此外尚含鞣质等.大黄根...
八道江区17615463388： 止血药血当归的根茎中含有大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、芦荟大黄素等蒽醌类成分及其苷,另含有糖类、鞣质、蛋白质等成分,试设计一个提取分离蒽醌类成分的流程. - ？
亥药藏青： 酸提碱沉,先用硫酸液提取,干燥,再用乙醚提取,在用不同浓度nahco3,na2co3,naoh沉淀,萃取过滤,就可以了,先出来的是大黄酸,再是大黄素,再是芦荟大黄素,再是大黄酚和大黄素甲醚,
八道江区17615463388： 中药标准对照品 有哪些 - ？
亥药藏青： 具体要什么品种的啊,太多了.例如:大黄系列成分对照品:芦荟大黄素(aloe emodin)、土大黄素(chrysaron)、大黄酚(chrysophanol)、大黄素(emodin)、异大黄素(isoernodin)、虫漆酸D(laccaic acid D)、大黄素甲醚(physcion)...
八道江区17615463388： “决明子”的药用价值 - ？
亥药藏青： 决明子的药性 (《本经》) 【异名】草决明,羊明(《吴普本草》),羊角(《广雅》),马蹄决明(陶弘景),还瞳子(《医学正传》),狗屎豆(《生草药性备要》),假绿豆(《中国药植志》),马蹄子(《江苏植药志》),千里光(...
