石房蛤毒素的检测方法

紫石房蛤肉怎么做~

香椿天鹅蛋
材料:
天鹅蛋4只（重约400克），香椿100克，鸡蛋250克。调料盐5克，味精5克，花生油20克，青红椒粒各5克。
做法:
1、天鹅蛋放在流动水中静养2天至其吐尽泥沙，取出后用一薄片刀插入两壳的连接口处，上下撬动使壳张开，然后沿壳四周镟下一片壳上的肉，反过来再镟另一片壳上的肉，将肉镟下后，去其沙袋和内脏，将天鹅蛋两头的老皮撕去后洗净；天鹅蛋的壳洗净留用。
2、香椿洗净后改刀成末；鸡蛋磕入碗中；天鹅蛋肉切成0.5厘米见方的丁。
3、将天鹅蛋肉丁、香椿末、盐、味精放入盛有鸡蛋液的碗中，调拌均匀。
4、锅内放入花生油，烧至七成热时放入用鸡蛋调好的天鹅蛋肉和香椿末中火翻炒3分钟后出锅，装入天鹅蛋壳中，上面撒青红椒粒即可。
小诀窍:
特点
天鹅蛋肉与香椿搭配，鲜味十足。
制作关键
天鹅蛋两头都有一层黄色的老皮，在初加工时一定要去除，否则吃时发韧。

紫石房蛤：软体动物门-双壳纲-帘蛤目-帘蛤科-石房蛤属；俗名天鹅蛋，是一种大型经济贝类，烟台沿海名贵海产品之一。贝壳坚厚，壳体略呈卵圆形，壳表黄褐色，壳内面暗紫色并泛珍珠光泽；成贝壳长6～8厘米、重70～85克，最大者体壳长12厘米、重400克；肉质肥大，味道鲜美，是蛤类上品。
此蛤喜栖水质清晰、潮流畅通的砾石砂泥底质海底。经常埋栖于砂泥中10～25厘米，而将水管稍露海底表面进行水流交换和摄食。长岛沿海4～15米浅海均有分布，尤以烟台市芝罘区崆峒岛、牟平区养马岛周围海域为多。
牟平区对此蛤的开发利用较早，始于60年代。因资源稀少，采捕也较困难，年采捕量仅3～5吨。1981年以来，山东省水产学校、烟台市水产研究所同牟平区海珍品试验场合作进行了紫石房蛤人工育苗试验，已取得初步成功。
取“天鹅蛋”肉质最嫩的斧足部分，用以凉拌制成菜肴，鲜嫩脆爽可口；用于爆、炒、溜、氽汤无不鲜美。烟台的名菜“油爆大蛤”即为天鹅蛋配以应时蔬菜炒、溜烹制而成，是独具特色的名肴。

在食品卫生和安全方面，随着海洋环境的恶化，赤潮的大量发生，世界对贝毒的检验更加重视。美国从1925年就建立了贝毒监测制度，1958年以后，贝产地STX允许量为80μg/100g（相当于400MU/100g）。日本、加拿大等都有类似的规定。饮水中的STX及类似物含量健康警戒线为3μg/L。
生物检测法包括：（1）生物毒性试验法。小鼠生物法是AOAC推广的检测麻痹性贝类毒素的标准方法，是国际上都能接受的唯一的方法。该方法在检测样本总毒性方面相当成功，但是无法准确定性样本中单个毒素。此外，还有家蝇生物分析法、蝗虫生物分析法。上述3种生物分析技术原理相似。（2）细胞毒性试验法。石房蛤毒素具有Na+通道阻滞剂的特性，可拮抗箭毒、藜芦碱的作用，以减少或“解救”细胞形态的改变及细胞裂解死亡，且该拮抗或“解救”作用与毒素的量呈对应关系。根据该对应关系可以计算出毒素的含量。早期建立的方法是用显微镜计数活细胞数以检测PSP毒素的量，但试验时间长，操作繁琐，所需细胞量大。在该原理之上发展起来一种STX的快速诊断装置MIST，已成功用于酸性粗毒中PSP总毒性的测定及STX、neoSTX、GTX和dcSTX相关毒性的测定，该装置的灵敏度高，检测迅速且无需组织培养的设备及专业知识。（3）免疫分析技术。随着抗STX抗体的获得，免疫分析技术如血球凝聚反应、放射免疫分析（RIA）和酶联免疫分析（ELISA）等逐渐发展起来，其中直接竞争ELISA法是最常用的一种方法，检测限可达3pg/ml，间接ELISA的检测限也可达到10pg/ml。免疫方法灵敏度高，方便迅速，但抗体的获得是其关键，各毒素的交叉反应低，不能完全体现样品的毒性来源。（4）受体分析法。即固相受体结合法（solid-phase receptor binding assay），主要是根据PSP毒素能与Na+通道蛋白质结合的特点，应用同位素标记以检测PSP类毒素的量，具有快速、可靠、准确的特点。Llewellyn等以一种特异结合STX的类似转铁蛋白Saxiphilin代替Na+通道蛋白质，其对STX的鉴定具有专一性，从而与TTX的鉴定相区别。
仪器测定法包括（1）HPLC法及其联用技术。HPLC 法灵敏度高，专一性强，检出限量低，分析时间短，能够提供更多的毒素信息，是毒素检测的主要手段。但石房蛤毒素分子本身的生色基团很微弱，不易被检测，因而检测前要将其氧化成荧光生色团，用荧光检测器进行检测。氧化手段主要有柱前氧化和柱后氧化，柱后氧化在分离柱后另加的一个柱上进行，简化了操作步骤。随着质谱技术的发展，液质联用技术成为物质鉴定的一个强有力手段。（2）薄层色谱法（TLC）。TLC法是检测PSP毒素的传统方法之一，使用已较少。但新的检测设备的出现为其发展提供了新的空间。I在层析柱上对STX及其同系物进行棒状薄层层析分离，以火焰热离子检测器（FTID）进行检测，结果STX的检出限为5ng，其余同系物的检出限也均达到ng级。另外，气相色谱、离子交换柱层析、电泳法等均是检测STX毒素的传统技术，方法优劣各异。 小鼠生物测定法（mouse bioassay，MBA）是在STX得到鉴定之前就已经研究出来的检测方法，并且其它的检测方法都以该方法作为参照。MBA用于检测STX已经有很长的历史，是AOAC于1958年确认的法定检测方法。大部分国家依然在使用该方法。该方法技术上简单易行且不需特殊设备。鼠类的神经细胞对STX的反应与人类神经细胞的反应一样，因此，该方法的测定结果直接关系到人类健康的风险评估。多数国家规定海洋贝类产品中STX可接受的最大含量为80μg STXeq/100g，墨西哥控制在30μg STXeq/100g，菲律宾控制在40μg STX eq/100g。但也有人认为80μg STXeq/100g的检测限可以保证人类的健康不受威胁。这类毒素在饮用水中的含量规定也不同。1999年研究人员等通过实验计算出了饮用水中PSTs可接受的最大含量为3μg STXeq/L。后来，澳大利亚将这个浓度应用到了饮用水标准中，巴西将其定为强制性的法规标准，新西兰将这个浓度定为饮用水中可接受的最大含量。但是，MBA对该浓度的敏感度不够，样品不经过浓缩很难检测出来。MBA的最低检测限为40μg STXeq/100g，相当于0.2μg/mLSTX，或200μg/L STX。因此，尽管MBA一直被广泛应用于检测经生物富集作用而STX含量高的海产品中，却不适用于饮用水中STX含量的检测，同时无法准确定性样本中单个毒素，而且实验动物检测方法在某些地区已经被禁止。针对存在的这些问题，逐渐研究出一些新的检测贝毒的方法，如化学、生物化学、毒性测定等方法，同时也可用于检测淡水蓝藻和被污染的水源。
运用细胞生物测定法来检测PSTs含量的方法已经建立，并且可以代替MBA进行毒性检测，该方法专门用于检测像STX这类可以阻断电压门控Na+通道的毒素。神经瘤细胞测定是在神经细胞内的Na+通道水平上检测PSTs。STX是一种Na+通道阻断剂，其功能是可以通过与打开钠通道的藜芦定的拮抗作用检测出来。最初建立的细胞生物测定法是通过鼠神经母细胞瘤的形态学作为端点来评估测定结果，随后Jellet和Manger对这种方法进行了改进，采用色度法显示有更好的选择性。因此，如果实验室能承担得起基于MS的检测方法的仪器费用，那么这种检测方法在将来很可能会代替STX的色谱分析。 通过末点来测定细胞的活力，从而使其更便于自动控制。在这种测定方法中，神经瘤细胞培养于96孔细胞培养板中，用Na+通道激活剂藜芦定处理，增强Na+以及Na+/K+-ATP酶抑制剂乌本甙的内流，从而阻断Na+外流。在PSTs的存在下，通过使用MTT（3-[4，5-二苯基-2羟基]-2，5-二苯基四唑来测定细胞活力。通过使用标准量的藜芦定和乌本甙，细胞受保护的程度可以通过与PSTs的标准量对比，以此来定量PSTs的总量，然后结果转换成STX当量。鼠和人的成神经瘤细胞都可以用于该测定方法。
Saxiphilin是一种结构与转铁蛋白相似的蛋白，研究表明，其与PSTs有很高的亲和力。然而，不同的Saxiphilin对不同的类似物有不同的亲和力。到为止，从热带蜈蚣（Ethmostigmus rubripes）体内分离的Saxiphilin在试验中有最小的选择性。利用这一特性，Llewellyn LE等建立了检测PSTs的特异受体法，该方法的检测限为6.3μg STXeq/L，或1.3μg STXeq/100g贝肉。但研究人员声明，在没有额外的基质干扰下，如果增大样本容量，该方法的检测限会降低。从热带蜈蚣体内提取粗Saxiphilin的程序很简单，制备的产物很稳定，可以反复冻融，在-80℃下可以保存一年以上。编码Saxiphilin蛋白的基因克隆，以及文库的构建已经完成，可以通过真核表达系统表达该蛋白，并且得到的表达产物具有生物活性。更进一步的研究证明，同时采用SCBA 和Saxiphilin受体检测法检测介虫和贝类体内的非PSTs钠离子通道活性，其实用性很好，因为非PSTs如河鲀毒素（TTX）不与Saxiphilin结合，而且检测结果与HPLC和MBA的结果有很好的相关性。
该方法最初是用来监测贝类和鱼类产品中的海洋毒素，并且在检测海洋神经毒素类方面得到了很好的验证。其他的研究人员也运用此法检测在淡水蓝藻细菌中占优势的PSTs的衍生物，进一步对该法进行了的验证。研究表明，神经细胞瘤生物测定法得出的结果与鼠生物法测定的结果很接近（相关系数R2=0.96），而且有敏感性更高的的优点，其检测限为10ng STXeq/mL提取物（相当于2.0μg STXeq/100g 贝肉）。通过细胞生物测定法获得的结果与色谱法得到的结果也有很好的相关性。然而，生物测定法有其独特的优点，即对任何可以抑制Na+通道的毒素，无论是已知的PSTs类似物，还是未知的变异体，都有很好的敏感性。正如Humpage 等所描述，该测定方法可以检测未定性的、不能被色谱法检测出来的很多毒素。细胞生物测定法不能区分相似的毒素，只能提供一个所有毒素的累积效应值，因此与MBA相比，在细胞培养测定中该方法很难确定相关毒素类似物的毒性反应，除非将每个类似物进行单个的分析。然而，Llewellyn等提供的相关数据表明，当使用复杂的PSTs混合物时，细胞生物测定法与MBA相比是一个很好的毒性预测器。Llewellyn等还同时使用MBA、细胞培养测定、HPLC和放射性受体测定对含有复杂的PSTs的21种贝肉提取物进行了分析，在这四种检测技术中，与MBA相关的细胞培养测定法的测定结果与预期的毒性最接近。但是，细胞生物测定法依然存在一些缺点。首先，由于该方法依赖藜芦定和乌本甙的拮抗作用，必须使用适当的浓聚物以使其与PSTs反应敏感。正如Jellet等所讨论的，任何毒素浓聚物浓度的改变都会降低该方法对PSTs检测的敏感性。其次，该方法的标准检测装置运行慢，需要很长的细胞孵育时间（24-48 h），才能对成神经瘤细胞形成细胞毒性作用。 HPLC 被广泛用于有机化合物的分离，同时也是第一种用于检测PSTs的仪器分析方法。然而，该技术也存在一些缺点，首先需要毒素标准品作参照，其次缺少用来制备荧光产物的光反应酶或后置柱衍生物化法的载色体，尤其是在样品制备过程中PSTs可能会发生化学转化。这种转化经常会使低毒的毒素变成毒性强的毒素，导致无法确定原始样品中毒素的真实毒性。因此，毒素的变异促使检测方法也不断发展，促进更精确的抽提和分离方法的发展。最早的STX理化检测方法是由Bates和Rapoport提出的，由于缺乏STX的载色体，这种方法只能在碱性环境下，将STX用过氧化氢氧化成荧光化合物以达到检测的目的。那时，人们认为这种方法的敏感度比鼠生物法的要高，并且建议用这种方法来进行贝类样品的常规检测。然而，这种方法操作很复杂，使用好几种溶剂和10步以上的化学过程。他们对这种方法进行了改进，增加了精确度和可重复性，但这种方法的操作依然很复杂。
在20世纪80年代，许多研究机构使用诸如X射线衍射、薄层色谱-荧光检测、高速液相色谱（HSLC）等方法发现了新的化合物。1975年，Shimizu等第一次描述了gTX1、GTX2、和gTX3的存在。使用葡聚糖凝胶g或生物胶P-2聚丙烯酰胺凝胶柱，通过稀乙酸洗脱，从gTX成分里分离出了STX，然后使用HSLC将gTX的峰值分解成三种不同的毒素。1987年，Oshima和他的合作者开发了一种后置柱氧化法，该方法可以详细地分析天然甲藻、水华、贻贝、牡蛎等抽提物中所含的PSTs。与Oshima的后置柱氧化法相反，Lawrence等研制了使用前置柱氧化的液相色谱法，来产生带荧光的PSTs衍生物。他们证明，使用过氧化氢氧化对分析非羟基化毒素的敏感性更强，而高碘酸盐氧化作用对分析羟基化毒素的敏感性更强。在这一时期，他们改进了这种技术，例如向高碘酸盐氧化剂中添加了铵甲酸盐，从而改善了neoSTX、GTX1、B2和C3的分析结果，而且由于添加了这种化合物到流动相，使neoSTX和B2的色谱分析更好。由于在检测过程中，pH对检测结果的影响很大，研究人员在检测过程中对pH进行了控制。Gago-Martinez等使用前置柱方法时，分别将高碘酸盐和过氧化物氧化过程的pH调节到7.2-12和8.2-12.8，最后得到的荧光氧化产物的产量不同。当pH在8.2时，通过高碘酸盐氧化作用neoSTX的产量达到了最大，而pH在10-11.5时，STX、GTX2/3、dcSTX和gTX5的产量也都达到了最大。Lawrence等声明采用柱前氧化pH很容易控制，因此结果的可重复性更强，因为在后置柱氧化时pH变化很小，相应对标记上荧光的产物的产量影响很小。然而，尽管柱前方法相对比较简单，但是一些PSTs形成了相同的氧化产物，另外一些形成了不只一种荧光产物。这种方法被建议作为一种筛选方法来为监测程序服务。最初的提议是首先使用高碘酸盐氧化方法，当检测出大多数PSTs，并且毒素浓度超过常规检测限80μg STXeq/100g时，接着采用过氧化氢氧化。色谱氧化法已经用于检测贝类中的毒素，研究PSTs在不同地区鼠脑的分布，他们认为这种方法很合适，敏感度也很高，因此该方法已被欧洲国家确定为检测PSTs的官方检测方法之一。然而，Ben-Gigirey等进行了实验室研究，推断尽管该方法适合于检测研究，但对含有更复杂毒素的样品进行分析时，得到的结果不理想，并且也不是对所有的PSTs都有效。此外，该法只是针对STX、GTX2/3、dcSTX、dcGTX2/3等毒素类似物，可以得到满意的检测结果。Turner等使用该标准对Lawrence的方法进行了进一步的验证，主要包括其选择性、线性、检测限、准确性、回收率、精确度、可重复性、适用性，同时也包括添加dcNeoSTX、dcGTX2/3等PSTs。Turner等对该方法进行了改进，以增加氧化产物的稳定性，改善了固相离子交换的纯度，最终推断该方法可以得到满意的结果。
液相色谱-质谱联用法（Liquid chromatography–mass spectrometry，LC-MS）是一种有效的检测技术，可以用来鉴定未知的化合物，定量已知的物质，阐明新分子的化学性质和结构，实现检测的高敏感度、可选择性、精确定量和高通量。然而，LC-MS价格昂贵，需要有专业知识的技术人员操作和维护。尽管如此，Quilliam建议将LC-MS检测方法作为检测海洋毒素的普遍方法。MS检测PSTs面临的挑战之一是离子配对剂对目标化合物的离子化产生干扰，因此离子配对剂要对PSTs有高效的反相色谱。因此，Jaime等研制了一种色谱方法，该方法使用基于非离子配对洗脱和后置柱电化学氧化的阴阳离子串联交换柱。Dell’Aversano等开发了一种实用的亲水性液相色谱法，该方法不仅可以分离主要的PSTs，而且还可以分离蓝藻细菌中的甲醛类毒素、柱孢藻毒素等。采用该方法，在质谱仪运行选择性反应监控程序时，检测出了15种PSTs，并鉴定出了新的毒素类似物。Diener及其合作者使用两性离子亲水作用色谱法分别与MS和荧光检测联用，在单个梯度下来检测PSTs，他们推断这两种方法都可以得到可靠的定量结果，能够很好的分离更多相关的PSTs。这两种检测方法的检测限只有微小的不同，荧光检测仪有更好的敏感性，而MS检测仪在更短的运行时receptor-binding assay，RBA）、免疫学分析技术等。随着科学技术的发展，又出现了一些新的研究方法应用于检测STX及其类似物，例如生物传感器法、色谱-质谱连用法、荧光定量PCR等方法。 由于ELISA方法具有敏感、快速、操作简便的优点，已经广泛用于检测中，尤其是医学和食品检测领域。该技术所面临的挑战是检测像PSTs这样的多种相关化合物的混合物时，需要保持其识别靶物质结构多样性的能力，同时忽略复杂的基质中其它化合物的影响，对此Usleber等概述了建立抗体检测技术的研究进展。研究显示，抗STX的抗体与neoSTX有很弱的交叉反应，而且这种选择性可以应用于该家族的所有类似物。Chu 等研究发现基于抗STX抗体和抗neoSTX抗体的测定之间有很弱的相关关系，结合这两种测定结果，检出率虽然得到了改善，但是依然不高，只有MBA的80-85%，阳性结果较低。Kawatsu等建立了针对gTX2/3的单克隆抗体，以完善先前建立的针对STX和neoSTX的抗体。该抗体保持着与STX/neoSTX家族其它抗体的差别，但是和gTX2/3、dcGTX2/3、C1/2有着很相似的亲和力。Garthwaite等对多重检测方法进行了深入的研究，并建议使用一整套的ELISA，不仅检测贝类样品中的PSTs，也检测遗忘性贝类毒素、腹泻性贝类毒素和神经毒性贝类毒素。荧光定量PCR法Al-Tebrineh J等建立了一种SYBRgreen的特殊定量PCR 方法，来定量检测鱼腥藻属蓝藻细菌产生的STX。该方法主要是通过确定蓝藻细菌中已鉴定的STX基因簇中独特的多聚乙酰序列拷贝数来推断样品产毒性的能力。Al-Tebrineh J等使用这种方法检测了从澳大利亚不同地方的湖泊、水库、河流中采集的水样，通过HPLC和显微细胞计数确定了水华中STX的富集和蓝藻细菌细胞密度。通过实验证实，STX富集确实与STX基因拷贝数相关，这就表示后者可以作为一种测量鱼腥藻属和其它水华蓝藻细菌的产毒潜能的方法。定量PCR 方法的靶向STX基因也可以用于水华鱼腥藻属和其它几种蓝藻细菌产STX的能力的监测和生态生理学研究。

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昌邑市17169249206： 石房蛤毒素的临床表现及治疗方法是什么? ？
宣菁平消： 人类多因误食含STX的贝类等海产品而发生中毒,中毒症状往往因食入的量不同而不同.轻度中毒表现为恶心、呕吐、腹泻,局部皮肤有麻或刺痛感.重度中毒后,表现为神经肌肉麻痹,随意肌无力,呼吸肌收缩无力,血压下降,心率减慢,心律失常,患者多感到身体有漂浮感,严重中毒15 min内就可死亡,STX中毒的死亡率约为10%左右.对STX中毒没有特效药,临床上主要是采取催吐、洗胃,用活性炭吸附胃内的毒素.4-氨基吡啶可以拮抗STX的毒性作用,起到治疗效果,但4-氨基吡啶毒副作用大,安全剂量范围小.因此,4-氨基吡啶对STX中毒的治疗效果和安全剂量范围有待进一步研究.

昌邑市17169249206： STX的毒性及其作用机制? ？
宣菁平消： STX主要作用于突触前膜,与膜表面毒素受体结合,阻断突触后膜的Na+通道,产生持续性去极化作用,特异性的干扰神经肌肉的传导过程使随意肌松弛麻痹,导致一系列...

昌邑市17169249206： 动物性食品中的天然毒素有哪些? - ？
宣菁平消： 1、河豚毒素,不只是河豚才有,蟹、鞘、蝾螈等许多生物都有. 2、章鱼毒素与石房蛤毒素,作用与河豚毒素相似. 3、动物性食品因被污染,还可能有重金属、霉菌毒素、细菌毒素等. 4、蛇毒,虫毒等多为蛋白质,对高温和蛋白酶敏感,但仍有可能导致食物中毒. 我知道的就这些了.